JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
의학

Trombosit transfüzyonları Microparticles için yöntem eleme rutin

Published: January 31, 2018
doi:
10.3791/56893
, , ,
1Research & Development,LightIntegra Technology Inc., 2Quality Engineering & Regulatory,LightIntegra Technology Inc., 3Department of Pathology and Laboratory Medicine; Center for Blood Research,University of British Columbia, 4Canadian Blood Services

Summary

Microparticle içeriği trombosit konsantreleri eleme üzerinde trombosit stok yönetimi, hastane kan bankaları yeni bir kalite iyileştirme girişimidir. Trombosit kullanımını optimize etmek için trombosit sigara-harekete geçirmek harekete geçirmek ayırt etmek için hedeftir. Hematoloji-Onkoloji hastaları için aktif trombosit sağlayan ateşe dayanıklı olmak için yüksek risk azaltabilir.

Abstract

Microparticle içeriği trombosit konsantreleri eleme üzerinde trombosit stok yönetimi, hastane kan bankalar için yeni bir kalite iyileştirme girişimidir. Onlar stresli olduğunda hücreleri microparticles (MP) parçası. Kan ve kan bileşenleri hücrelerden, aktif trombosit olmak üzere çeşitli hücresel parçaları içeriyor olabilir. Doğuştan gelen bağışıklık hücreleri ve büyük oyuncular rollerini koagülasyon ve hemostaz gerçekleştirirken, trombosit şekil değiştirme ve microparticles oluşturmak. Dinamik ışık saçılma (DL) ile-microparticle algılama, dayalı sigara-harekete geçirmek (düşük microparticle) trombosit transfüzyonları içinde harekete geçirmek (yüksek microparticle) ayırt ve bu kıt kan ürün kullanımını optimize etmek mümkündür. Önceki araştırma sigara aktive trombosit Hematoloji-Onkoloji hastalarda profilaktik kullanım için ateşe dayanıklı olma riskini azaltmak ve hasta bakımı geliştirmek olduğunu göstermektedir. Bu tarama yöntemi rutin olarak ayırt etmek için harekete geçirmek trombosit aktive hedefidir. Burada açıklanan yöntemi rutin trombosit Stok Yönetimi’nde hastane kan Bankası için gerçekleştirilecek adımları özetliyor: kılcal DLS ölçüm için içine örnek yükleme bir trombosit transfüzyonu dan bir örnek alma DLS gerçekleştirmek sınamak için microparticles ve aktif trombosit tanımlamak için bildirilen microparticle içeriği kullanarak tanımlar.

Introduction

Microparticles ilgi çoğunlukla hücre hücre için iletişim ve biyolojik süreçler onların katılımı etrafında dönüyordu. 1 , 2 , 3 son zamanlarda microparticles da potansiyel erken tanı imleyicileri otoimmün ve kalp-damar hastalıklarının ilgi. 4 , 5 Microparticles, olarak da bilinen ekstraselüler veziküller veya exosomes, yaygın olarak Akış Sitometresi tarafından soruşturma. Ne yazık ki, geleneksel Akış Sitometresi protokolleri standartlaştırmak çabalarına rağmen hiçbir fikir birliği yoktur kullanmak için en uygun protokol. 6 , 7 , 8 , 9 , 10

Her ne kadar geleneksel Akış Sitometresi belirli MP altgrupları karakterize olabilir, birkaç vardır11 sınırlamalar bildirdi. 11 , 12 , 13 , 14 bu kısıtlamalar bazıları daha yüksek güçte lazer ve dedektörleri bir sözde kullanarak ele alınmıştır “küçük parçacıklar seçeneği”,15,16 gibi algılama, 15 ° – 25 ° ileri dağılım açı ve kılıf basınç modifiye . 17 , 18 yine de, bu sofistike yöntemlerle kombine edilebilir bir hızlı ve kullanımı kolay tarama yöntemi hala microparticles erken tanı işaretleyici olarak kullanmak için gereklidir. Microparticles düzeyleri normal kan bağış19 yaklaşık üçte biri algılanabilir ve subklinik koşulları gösterebilir. Sonuç olarak, bağışlanan kan ürünleri seviyelerinde yüksek microparticle savunmasız alıcıları ile uyumlu olmayabilir. 20

Trombosit transfüzyonları sağlanırken, non-immün refractoriness – neyin bir hastanın vücut ardışık nakli reddeder ve trombosit dolaşmaya önemli bir bölümünü izin vermez bir koşul riski vardır. 21 , 22 Non-immün refractoriness boşa nakli neden olabilir, hastalar ve genişletilmiş hastane için sağlık komplikasyonları kalır. 23 microparticles sayısının fazlalığı içeren trombosit transfüzyonları savunmasız Hematoloji-Onkoloji hastalarında bağışıklık sigara refractoriness geliştirilmesi için bir faktör olabilir. 20 microparticles böylece savunmasız hastalar için riski azaltmak için tarama tarafından trombosit transfüzyonları bileşimi göre trombosit stoku yönetmek mümkündür. Ancak, çoğu microparticle testleri trombosit5,12 microparticles yalıtımı veya aksi takdirde çok emek yoğun24,25 ve bu nedenle düzenli olarak hastanede uygulanabilir değil Kan Bankası.

Açıklanan teknik burada dinamik ışık saçılma (DL) – foton korelasyon spektroskopisi veya yarı elastik ışık saçılma olarak da bilinen kullanır. On yıl için dinamik ışık saçılma yoğun ilaç endüstrisinde liposomal ilaç formülasyonları veya emülsiyonlar karakterize parçacık boyut alt mikron aralığında nerede kullanılmaya başlanmıştır. 26 , 27 ancak, bu uygulamalar için geliştirilmiş araçlar ekran kan ürünleri için optimize edilmiş değildir. Yeni bir DLS sistemi teknik sınırlamalar üstesinden ve dinamik ışık saçılma trombosit transfüzyonları ile taranması için yararlı hale getirmek için geliştirilmiştir. 28

Dinamik ışık saçılma ölçüleri askıya alınan parçacıklar lazer ışıklı aydınlatıcı ve süspansiyon hareket parçacıklar bir sonucudur dağınık ışık yoğunluğunu zaman varyasyon analizi tarafından gerçekleştirilir. Ayrıca, Partikül hızı ve boyutu – arasında ters ilişki bu yöntemi kullanan küçük parçacıklar hızlı hareket ve büyük parçacıklar yavaş – boyut dağılımları ve örnek bileşenleri göreli konsantrasyonları üzerinde bilgi sağlamak için hareket. DLS, ortalama microparticle kullanarak içerik ve ortalama RADIUS microparticle bileşeninin sayısal. Microparticles kan ürün içeriği % MP için parçacık yarıçapı 50-550 nm üzerinden ölçülen histogram alanına bağlı olarak verilir. Süre parçacıkları ile yarıçapı 50 aşağıda nm DLS tarafından algılanan ve rapor DLS sistem tarafından onlar % MP dahil değildir. Trombosit microparticles izole yerine, trombosit transfüzyonları heterojen microparticles ve trombosit örnek bir göreli içeriğine göre belirlenir. Aslında, trombosit ve microparticle doruklarına oranını trombosit sayısı bilindiğinde mutlak MP toplama hesaplamak için kullanılabilir. 19

DLS sistemi insan kan veya kan ürünleri türetilmiş örnekler bulunan microparticles hakkında Nitel ve nicel bilgi sağlık uzmanları sağlar. Akış Sitometresi, elektron mikroskobu,29 nanopartikül analiz30 veya31 algılama ayarlanabilir direnç darbe izleme gibi alternatif teknikleri ana avantajı açıklanan DLS teknik örnek hazırlıktır: trombosit konsantreleri aliquots, trombosit, Numune dilüsyonu veya diğer modifikasyon MP ayırmaya gerek kalmadan doğrudan ölçülebilir. 9 , 17 Ayrıca, DLS bir mutlak boyutlandırma yöntemidir ve Kalibrasyon boncuklar uygun Kırılma indisi ile eksikliği muzdarip değil. 14 , 32

Trombosit aktivasyon ve MP içerik arasında bir ilişki daha önce mikroskobu33,20 tarafından gösterilen ve MP içerik patolojik koşullar15,34, artış değişkenden 35 , 36 ve trombosit etkinleştirmek için bilinen vitro koşullarda. 19 , 37 , 38 ancak, daha ileri çalışmalar tamamen DLS ölçülen microparticle içerik ve trombosit aktivasyon arasındaki ilişkiyi anlamak için ihtiyaç vardır. Bizim şu anki bilgiye dayalı iken gelen sigara aktive Hematoloji-Onkoloji hastaları yarar aktif olarak hastaların39, kanama, tedavi için kullanılan aktif trombosit sayısının fazlalığı microparticles, onlar en iyi içeren trombosit olmayan veya düşük seviyelerde microparticles20. Vitro yanıt donör trombosit hızını önemli ölçüde kurtarma ve istikrarlı, çoğunlukla kanama Hematoloji-onkoloji hastalarına40 tek nakli bu trombosit yaşama etkisi olmadı ki son zamanlarda bildirilmiştir . Bu bulgu, yüksek MP içerik tarafından tanımlanan trombosit aktivasyon da hastalara profilaktik tedavi hiçbir önemli rol oynayan sonucuna. Ancak, hastaların dar yelpazesi nedeniyle, bu çalışma (çalışma hariç) febril karmaşık hastalar için donör faktörler etkisi ele vermedi, kararlı değil ve birçok birden fazla trombosit transfüzyonu alırsınız. -Hangi refractoriness azaltmak için söz sahibidir – hasta bu durumda karmaşıklığı nasıl giderilebilir soru cevapsız kalır.

Microparticles iltihabı41,42,43,44 ve trombosit aktivasyon45 erken işaretleri ve bu nedenle pek çok normal bağış algılanır. 19 sonuç olarak, aktif trombosit ve microparticles trombosit bağışlar mevcuttur. Ateş, yani, bir dolu harekete geçirmek doğuştan gelen bağışıklık sistemi, hastalarda ek zorluk aktif trombosit transfüzyonu, tahammül edemez broşürüne uygun olur. Ancak, çalışmalar bu varsayımı kanıtlamak için ihtiyaç vardır. Microparticle tarama trombosit transfüzyonları içeriği hakkında geçerli belirsizlik hafifletmek ve hasta tedavi karmaşıklığını azaltın.

Öncelikle donör nüfus ve taşıma, ışınlama, patojen inactivation ve trombosit aktivasyonu artırabilir diğer işlemleri üzerinde çok az bir ölçüde hastane kan Bankası içinde sigara-harekete geçirmek için harekete geçirmek trombosit oranı bağlıdır yoğunlaşmaktadır. 19 Amerika Birleşik Devletleri’nde büyük hastane kan Bankası verilerinden trombosit stok ortalama bileşimi aktif % 49 ve % 51 sigara aktive olduğunu gösterdi (aktif trombosit için aralığı: % 38-62, kişisel iletişim). Kan ürün sağlayıcılar veya hastane kan bankaları üretmek veya almak ve onların stok yönetmek istediğiniz kaç harekete geçirmek ve sigara aktive trombosit konsantreleri trombosit aktivasyon microparticle tarafından belirtildiği gibi temel bilmek istiyorsanız içerik, bu iletişim kuralı onlar için uygun olabilir.

Hastane kan Bankası sigara-harekete geçirmek, homojen trombosit hastalık koruyucusu için kullanın ve aktif, türdeş olmayan trombosit terapötik kullanım için yolu tarif etmek mümkün olacak trombosit kompozisyon dayalı. Trombosit tarama hastaneler hasta bakımı geliştirir ve maliyet azalır kullanılabilen stok kullanımını en üst düzeye çıkarmak izin verir. Bu iletişim kuralının temel kullanım ve kan ürünleri manipülasyon ile tanışık laboratuar personeli içindir.

Burada sunulan bir tarama için rutin olarak hastane kan Bankası stoku yönetmek için uygulanabilir trombosit transfüzyonları microparticles microparticle içeriğine göre ürün seçmek arzu nerede yöntemidir. Bu iletişim kuralının uygulanması ve değerlendirilmesi DLS bağışlanan trombosit tarama için anahat hedefidir. Açıklanan Protokolü örnekleri, non-invaziv erişim kan Bankası iş akışı ve performans özellikleri içine test Tümleştirme ortak sorular adresleri.

Protocol

Aşağıdaki iletişim kuralı tüm Kanada kan Hizmetleri (CBS) yönergelere uygun olarak yapılmıştır. Gönüllü onların bağış olabilir izin verdi bu çalışmalar taşımak için kullanılır. Trombosit konsantreleri CBS standart işletim yordamlar göre hazırlanmıştır. Tüm performans test burada açıklanan merkezinde kan Araştırma British Columbia Üniversitesi, Vancouver, Kanada için kurumsal araştırma Etik Kurulu onayı ile gerçekleştirilmiştir. 1. kalite kontrol Gün DLS sisteminin düzgün çalıştığını doğrulamak için test başına en az bir kez bir kalite kontrol denetimi yapın. Üreticinin yönergelerine kullanmak için sağlanan denetim boncuk (50 nm RADIUS) ölçmek. Denetim şişe soğuk hava deposu almak ve oda sıcaklığına kadar ısıtmak 15 dk bekleyin. Boncuk kullanmadan önce oda sıcaklığına equilibrate gerekir. DLS sistem 15dk lazer dönemini oluşturan sıcak ilk örnek test için hazır olduğunu tamamlandı bu yüzden örnek hazırlama önce açın. Konsol başladıktan sonra giriş yapın ve denetimi örneğini ölçmek için sistem Test seçeneği seçmek için dokunmatik ekranda yönergeleri izleyin. Girdap karışımı 10 şişe s temsil edici bir örnek sağlamak için. Bir kılcal bir 100 µL sabit birim pipet, pipet ucu ve kılcal test kiti kullanarak denetim boncuk ile doldurun. Test tamamlandığında DLS sisteminin ekranındaki yönergeleri izleyin.Not: Denetim boncuk test sonuçlarını otomatik olarak denetim boncuk barkod etiket ve bir geçiş depolanan bilgilerden karşılaştırılır veya hata bildirimi hem de örnek bilgiler test sonunda DLS sistem ekranda gösterilir. 2. bir trombosit konsantre bir örnek alma Not: Aşağıdaki adımları işlemi trombosit transfüzyonu kılcal rutin trombosit stok yönetimi için test DLS içine üzerinden non-invaziv örnekleme için açıklar. Genel şekil 1′ de gösterilen. Gerekli aksesuarları: tüp mühürleyen, manuel tüp striptizci, makas ve sıçrama kalkan. Trombosit konsantre denenmemiş stoktan kaldırırken. Trombosit ürünü örnek bir kullanılmayan örnekleme kese ya da elde etmek (2.3 adıma) veya bir boru kesimi (2.4 boş bırakılmışsa tutamaçlarından veya adım 2.5 değilse boş).Belgili tanımlık kese kesmek için tüp ya da boru kesimi kullanın bir tüp mühürleyen. Tüp mühürleyen çalışması için üreticinin yönergelerini izleyin. Kısaca, iki ısıtmalı jaws arasında kesin bir konum kapalı gibi boru kelepçe. Elde taşınır bir aygıtta birlikte erimiş boru basın ve serin yüksek basınç altında (süresi yeşil ışık tarafından belirtilir) kolu basarken bir kalıcı, sızıntı geçirmez mühür kaynaklanan. Bir kese örnekleme Trombosit çanta içeriğini de 5 için nazik yatay hareketi tarafından mix (uçtan uca beş kez devrilme) s. Kelepçe kılıfı için açın. Kese tahliye edildi ve kendisi tarafından doldurur. Sadece 100 µL örnek DLS test etmek için gerekli olacak gibi kese tamamen doldurmak gerekli değildir. Belgili tanımlık kese ısı sızdırmazlık bağlayan boru ile bir tüp mühürleyen tarafından çantasından çıkarın. 3 adımla devam edin. Boş boru örnekleme Trombosit çanta doğrulayın tüp boş depolanıp boru blok hala yerinde. Trombosit konsantre tüp içinde önemli miktarda değil doğrulamak için tüp kontrol edin. Tüp boş ise 2.5 adımla devam edin. Tüp striptizci olarak boru boru blok mümkün olduğunca yakın üzerinde boru Silindirler arasında sıkmak için kolları sıkıştırarak kapatın. Çantayı dikey asmak ve striptizci kolları sıkıştırmak tutun. Striptizci tutmak kapalı iken, boru blok serbest bırakın. Yavaş yavaş striptizci bırakmak için yavaş yavaş striptizci doldurmak boru boş boru aşağı çekin. Striptizci bölümüne tam şişirilmiş kadar veya striptizci içinde 1 inç hortumunun sonuna kadar devam edin. Striptizci ile durma noktasına ulaşıldığında, kullanım tüp mühürleyen ısı mühür tüp striptizci yukarıda 1 inç. Manuel tüp striptizci kolları serbest bırakın. Isıl yapı˛ma tekrar 1-2 santim üzerinden test segment oluşturmak için önceki mühür. Test kesimi trombosit biriminden kesti. Bu segment test DLS için kullanılacaktır. Boş değil boru üzerinden örnekleme Çantayı dikey olarak asmak ve boru blok yer eğer serbest bırakmak. Boru önemli herhangi bir katı kümeleri olup olmadığını belirlemek için kontrol edin. Katı kümeleri varsa, torbaya mahrum edemem öyle ki onları kapatın. Tüp striptizci olarak boru boru mümkün olduğunca kapalı sonuna yakın Tarih kapatın. Boru arasında silindirler ve sıkma gücü korurken sıkmak için kolları sıkıştırarak torbaya tüp içeriğini şerit doğru çanta boru boyunca tüp striptizci taşıyın. Trombosit çanta asılı kanca kaldır ve karışımı yavaşça çantayı 5 s striptizci tutarken beş kez uçtan uca devrilme tarafından kapalı. Çantayı dikey kapalı striptizci tutarken asmak. Yavaş yavaş yavaş yavaş striptizci doldurmak tüp için izin striptizci boş boru aşağı çekin. Striptizci bölümüne tam şişirilmiş kadar veya striptizci içinde 1 inç hortumunun sonuna kadar devam edin. Striptizci ile durma noktasına ulaşıldığında, kullanım tüp mühürleyen ısı mühür tüp striptizci yukarıda 1 inç. Yayın striptizci. Isıl yapı˛ma tekrar 1-2 santim üzerinden test segment oluşturmak için önceki mühür. Kesilmiş ve tüp son kısmını atın. Test kesimi trombosit biriminden kesti. Bu segment test DLS için kullanılacaktır. 3. örnek kılcal test DLS dolum Bir sıçrama kalkan ve temiz, Kuru makas kullanarak bir boru veya segment test kese ucunu kesti.Not: test DLS için kullanılan kılcal hemen dolu olması gerekir. Kılcal (birleştirilmiş 100 µL sabit birim pipet, pipet ucu ve kılcal damar) örnek doğrudan açılan kese veya boru kesimi kılcal damar çizmek için örnekleme aracını kullanarak doldurun. Dolu kılcal dibine hafifçe dolu kılcal damar kılcal tüp dolgu macunu hafif bir bükülme ve tepsiyi karşı bazı baskı uygularken iterek kapatın. Sabit birim pipet ve kılcal kalır sağlanması kılcal ucundan 100 µL sıkıca kılcal tüp dolgu macunu gömülü çıkarın. Kılcal damar kılcal tüp dolgu macunu tepsiden alın, bir temizlik iÖin izopropil alkol yastık ile silin ve hiçbir hava kabarcıkları yavaşça kılcal alt flicking tarafından tuzak vardır emin olun. Kılcal DLS sistemi içine yerleştirin. 4. DLS sınadıktan Trombosit örneği microparticle içeriği ölçmek için yeni DLS testi başlatmak için MP test seçeneği belirleyin. Örnek bilgileri (bağış kimlik numarası (ISBT), koleksiyon/üretim bitiş tarihini ve ürün kodu) girin barkod tarayıcı kullanarak veya el ile. Hiçbir ürün kodu varsa hangi DLS sistem sıvı orta bilgi almak, uygun sıvı orta el ile seçin (çoğu trombosit konsantreleri seçin plazma ama trombosit katkı çözüm (PAS) içeren örnekler için girin ««Artık plazma yüzdesi).Not: Nominal PAS yüzdesi olarak küçük bir sapma en az hesaplanan MP RADIUS ama değil % MP etkiler (DLS sistem tarafından otomatik olarak hesaplanır) viskozite içinde küçük bir hata neden olur. Kılcal talimat zaman DLS sistem yerleştirin ve test başlatın. Test tamamlandığında, örnek kapiller tutucu ve sarf malzemeleri tesis yönergelere uygun şekilde elden çıkarın. Örnek kapiller tutucu ve sarf malzemeleri tesis yönergelere uygun şekilde elden çıkarın. Karşılık gelen sonuç, örneğin için turuncu renk ile trombosit çanta tag sigara-harekete geçirmek (homojen) % MP eşit veya % 15 ve pink için aşağıda üzerinden % MP (heterojen) harekete geçirmek ile. Resim 1 : Yöntemi genel bakış. Rutin trombosit Stok Yönetimi’nde hastane kan Bankası için gerçekleştirilecek adımları genel bakış: bir örnek bir Trombosit elde etme konsantre ol, kılcal DLS ölçüm için içine örnek yükleme DLS performans test microparticles tanımlamak için ve trombosit aktive tanımlamak için bildirilen microparticle içerik kullanarak. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Representative Results

Ortalama hazırlama süresiDLS sistemini kullanarak işlem eleme trombosit şekil 1′ de özetlenmiştir. Trombosit DLS sistemiyle kan tedarikçiden alındığı anda test edilmektedir. Tablo 1 ‘ deki ayrıntılı olarak eğitimli kullanıcıları için ortalama hazırlama süresi 2 dk. 23 s temizlik sırasında ve sonrası test çalışma saatlerinin 14 s ve 46 s, anılan sıraya göre. Toplamda, ortalama kullanıcı alır 3 dk ve 23 s test başına yakışıklı-üstünde zaman. Etkinlik Etkin Zamanı Yürüyüş koyma test zaman TOPLAM DLS sistemi hazırlamak 14 s Örnekleme aracı bir araya 28 s Segment elde 52 s Kılcal doldurun ve sınamayı Başlat 49 s 5 dk Temizlik 14 s Etiketi ve stok trombosit çanta 46 s Toplam süre örnek gerekli 3 dk. 23 s 5 dk 8 dk. 23 s Tablo 1: etkin test zaman krizi. Testin kendisiyle bir ortalama süresi 5 dk yürüme uzak testidir. Ortalama kullanıcı DLS sistem bir test için hazırlamak, elde etmek ve bu protokol sonrası bir örnek test etmek ve trombosit çanta tag için 3 dk. 23 s alır. HassasDLS sistem duyarlığını üç microparticle düzeyde, 0-7 değerlendirildi %, % 12-25 ve 28-. Klinik % MP 3- aralığıdır. İki işleç paralel iki DLS sistemlerde 16 çalışma gün için düşük, orta ve yüksek kontrol örnekleri test. Örnekleri yinelenen ama rasgele sırayla test etme her gün test edildi. Tablo 2 yüzde Microparticles (% MP) DLS ölçülerini trombosit göre aygıt içinde duyarlığını özetler. Microparticle içeriği Düşük Orta Yüksek Yani % MP (%) 4.4 19,5 53,8 Standart sapma (%) 1.8 2.6 5.8 CV (%) 40.4 13,2 10,6 Tablo 2: yüzde Microparticles (% MP) aygıt içinde duyarlığını. Çok düşük microparticle içerik küçük trombosit % için katkıda bulunabilir, değişkenlik düşük microparticle içerik örnekleri için sonuçlanan MP arttı. Tablo 3 ortalama microparticle RADIUS 50-550 nm arasında DLS ölçülerini aygıt içinde duyarlığını göstermektedir. Microparticle içeriği Düşük Orta Yüksek RADIUS (nm) demek 331 161 188 Standart sapma (mm) 133 41 25 CV (%) 40.1 25,2 13,5 Tablo 3: microparticle RADIUS duyarlığını aygıt içinde. Çok düşük microparticle yüzde Microparticles (% MP) içerik küçük trombosit katkıda bulunabilir sonuçlanan düşük microparticle içerik örnekleri için değişkenlik artar. Tablo 4 yüzde Microparticles (% MP) ölçülerini DLS tekrarlanabilirlik gösterir. Microparticle içeriği Düşük Orta Yüksek Yani % MP (%) 4.4 29.2 53.6 Tekrarlanabilirlik (%) 1.5 2.3 5 CV (%) 35 11,8 9,4 Tablo 4: Tekrarlanabilirlik dinamik ışık saçılma (DL) ölçümler için yüzde Microparticles (% MP). DoğrusallıkDLS sonuçları doğrusal Şekil 2 gösterir, Yani, düz bir çizgi ile ilgili örnekleri atanan değer uygun. Yedi örnekleri farklı microparticle içerikle hazırlanmıştır. Örnekleri yüksek (MP7) ve düşük (MP1) microparticle içeriği ve eşleşen trombosit konsantrasyon ile kurumlara ve ara örnekleri (MPx) oluşturmak için farklı oranlarıyla karışık. Örnekleri daha önce19 ve DLS açıklandığı gibi Akış Sitometresi ile test edildi ve her konsantrasyonu % MP sonuçlara çizilen giriş ve çıkış olarak. Katsayısı 0.985 bulundu. DLS histogramlar düşük ve yüksek microparticle içerik için örnekleri şekil 3′ teAgösterilmektedir. DLS sonuçları Akış Sitometresi (şekil 3B) tarafından teyit edildi. Resim 2 : Akış Sitometresi ve DLS sonuçları karşılaştırılması. % MP arasında doğrusal ilişki açık sembolü ○ tarafından işaretlenmiş iki örnek özgün DLS verilerden şekil 3′ te gösterilmektedir Akış Sitometresi (giriş) ve (çıkış), DLS tarafından belirlenir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 3 : Harekete geçirmek ve sigara aktive trombosit arasında ayırt etmek için Microparticle içerik. (A) DLS sonuçları’aktif trombosit (kesik çizgi) içeriğinde MP %4 oranında sigara aktive trombosit (düz çizgi) göre % 57 oldu. Testler gerçekleştirilen bir ölçüm sıcaklığı 37 ° c, plazma viskozite ayarı 1,06 x10-3 Pa·s ve 200-600 kHz arasındaki toplam yoğunluğunu ayarlar. (B) Akış Sitometresi sonuçları (19daha önce açıklandığı gibi elde edilen) (A); gösterildiği gibi aynı örnekleri ileri dağılım histogramlar P1 ve P2 MP ve trombosit kapıları sırasıyla temsil; için harekete geçirmek trombosit aktive trombosit (sağda) için % 6 göre MP geçide olayların (sol) düştü. Doğrusal regresyon çizgisinin arka plan gürültü % MP için sürekli olarak daha yüksek sonuçlar önde gelen Akış Sitometresi tarafından sürekli bir göreli katkısını gösteriyor. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Özgüllük/girişimUluslararası organizasyon için Standartlar Kuruluşu (ISO) analitik özgüllük algılamak veya diğer miktarları aşağıdaki örnekte mevcut iken sadece measurand ölçmek için bir ölçüm yordam yeteneği olarak tanımlar. Microparticle Tarama analitik özgüllük kırmızı kan hücreleri (RBC) tarafından etkilenebilir. DLS MP içerik trombosit içeriği göre ölçer. RBC saçılma katkısını trombosit, saçılma katkı dahil çünkü RBC MP göreli katkısını azaltmak etkileyebilir. Kan ürünleri izin verilen RBC içeriğinde için yasal sınırları yok; eşik muhafazakar bir dönüşüm önerilen AABB tarafından izin verilen RBC yoğunlaşması trombosit konsantreleri-2 ml Paketli RBC bir birimi cinsinden trombosit sonuçlandı 8.0 x1010 hücreler/M (varsayımlar: RBC birimdir 8.5 x10-14L, paketlenmiş RBC Hematokrit % 68’i, trombosit birim hacmi 200 mL). Bildirilen kalan RBC konsantrasyonları farklı ürünlerde de bu eşik46bulunmaktadır. Üç farklı bağış trombosit ve kırmızı kan hücreleri (RBC) üç bağımsız deneyleri için uygun olarak iki farklı gün bağışladı. 0,05 – trombosit konsantreleri (referans örnek) ilk RBC içeriğinde yapıldı 0,15 x109 hücre/M hemasitometre ile belirlendiği gibi. Beş ek örnek spiking olarak bilinen miktarda RBC aliquots trombosit konsantresi içine tarafından oluşturulan; Hedef RBC düzeyleri Bu örneklerdeki olduğunu 1.0, 5.0, 10, 40 ve 80 x109 hücre/L. Kırmızı kan hücrelerinin girişim eşik yaklaşık 1,0 oldu x1010 hücreler/hangi Ayrıca kırmızı kan hücreleri varlığı görsel olarak belirgin (şekil 5) idi düzeyiyle ilişkili M (şekil 4). Bu seviyesinden % MP içinde görsel olarak kırmızı örnekleri-ki içeren RBC yerine hemoglobin bildirilen microparticle içeriği çok düşük olacaktır anlamına gelir göz ardı. Şekil 4 : % MP (DL) ve RBC konsantrasyon (hücre/L) arasında doğrusal ilişki. 0,1 RBC konsantrasyonları artan x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010ve 8.0 x1010 hücreler/M (soldan sağa) üzerinden 3 bağımsız deneyler (○ deneme 1, ● deney 2, □ deney 3, doğrusal regresyon satırlar her deneme için görüntülenir). 1.0 yukarıda x1010 RBC/M önde için % MP küçümseme. RBC içeren örnekleri görünümünü şekil 5′ te gösterilen. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 5 : Örnekleri içeren RBC görünümünü. Trombosit kızarıklık örnekleri içeren RBC konsantrasyonları 0,1 x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010ve 8.0 x1010 hücreler/M soldan sağa doğru. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. DoğrulukDoğruluk bir tek ölçüm sonucu ve örnek için atanan bir gerçek miktar değeri arasındaki fark olarak tanımlanır. Bu ölçüm hata ölçüm önyargı tarafından tahmini sistematik bir bileşeni ve tarafından bir standart sapmayı tahmin rasgele bir bileşeni içerir. Böylece, bir ölçüm sonucu doğruluğunu vefa ve hassas bir kombinasyonudur. Standart bir boncuk DL testin doğruluğunu belirlemek için kullanıldı. Doğruluk iki konsantrasyonları 3- MP tahlil klinik aralığında incelendi. Başvuru boncuk karışımları çünkü başvuru boncuk bilinen boyutu ve konsantrasyon bilinen konsantrasyonları örnekleri hazırlamak için kullanıldı. Sonuç olarak, başvuru boncuk örnekleri istenilen parçacık boyut ve konsantrasyonları ile elde etmek için karışık olabilir. 125 nm RADIUS içeren standart polistren boncuk microparticles temsil etmek için kullanılan ve boncuk 1,5 µm RADIUS ile trombosit temsil etmek için kullanılmıştır. Microparticle tahlil doğruluğunu yaklaşık % 20 ve % 50 MP içerik boncuk karışımları ile değerlendirildi. Ölçülen parçacık yarıçapı doğruluğunu sertifikaları analizi Tablo 5’ te gösterildiği gibi başvuru boncuk için belgelenen parçacık yarıçapı için karşılaştırıldı. 125 nm boncuk 1,5 µm boncuk Analiz belgesi Analiz belgesi % 20 MP % 50 MP % 20 MP % 50 MP RADIUS demek 122.0 113.8 124.4 1.5 1.6 1,60 STD sapma 4.5 2.83 3.6 0.035 0,06 0,07 CV %3,60 %2,48 %2,89 %2.20 %3.74 %4.05 Doğruluk %6,70 %2.00 %6,50 %6,30 Tablo 5: dinamik ışık saçılma (DL) ölçümlerin doğruluğu. Boyut Karşılaştırma DLS için boncuk 125 nm RADIUS ve 1,5 µm RADIUS için analiz belgesi karşı karışımları içinde sonuçlanır.

Discussion

Bu iletişim kuralı trombosit konsantreleri gibi biyolojik örnekleri bulundu yüksek parçacık konsantrasyonu için en iyi duruma getirilmiş microparticle tarama için bir dinamik ışık saçılma yöntemi açıklar. DLS yöntemi doğru boyutunu ölçmek için doğal olarak standartlaştırılmıştır. Microparticles göreli yoğunlaşmasını-ebilmek var olmak değiştirmek mutlak bir konsantrasyon trombosit konsantrasyon bilinen ve trombosit pik alanı başvuru tepe19kullanılır. Trombosit konsantrasyonları genelde Hematoloji Analizörleri ile elde edilen veya akış cytometers DLS eşlik eden teknolojiler bu yöntemler kabul edilebilir.

DLS sistemin işlevselliğini kontrol boncuk düzenli olarak çalıştırarak sigortalıdır. Distile su arka plan gürültü çok az olduğunu doğrulamak için ölçülebilir. Piyasada bulunan trombosit standartları MP-negatif denetimleri ve sonra 125 nm RADIUS boncuklar, ek MP-pozitif denetimleri olarak analiz edilebilir. Faiz MP biyolojik aralığı konsantrasyonları içinde pratik ve kan Bankası rutin bir parçası olarak gerçekleştirmek hızlı işlemlerdir.

Akış Sitometresi aksine parçacık saçılım yoğunluklarda ama oldukça onların Albert hareket hızını karşılaştırılmasına bu yöntem dayalı değildir. Bu nedenle, exosomes da küçük boyutlarına rağmen tespit edilebilir ve MP ayrı olarak raporlanır.

Bir tarama aracı olarak tasarlanmış, bu yöntemi sınırlamaları microparticles farklı türleri arasında ayırt etmek için onun yetersizlik ilgilidir. Potansiyel Oda için ilerleme ek yalıtım adımlar kullanılır olup; örnekleri önce ve sonra manyetik boncuk yakalama microparticles antikor aracılığıyla belirli kaldırılması birleştiğinde test olabilir. Buna ek olarak, algılanan tüm microparticles hiperlipidemi47,48 ve küçük bakteri veya virüs6 oluşan silomikron da microparticle aralığında rapor edilecektir çünkü türetilmiş hücre vardır kabul edemiyor. Ancak, diğer güvenlik önlemlerinin çok numunelerde veya hastane kan Bankası stoğa girmesinin kirlenmiş trombosit önlemek için kan akımı içinde bulunmaktadır.

Seçimi örnek antikoagülan, trombosit aktivasyon ve bu nedenle MP içerik49ölçüde etkiler. Farklı ürünler karşılaştırmalar için bu faktör dikkate alınması gerekiyor. Ayrıca, PAS gibi MP ücretsiz süspansiyon medya ile plazma değişimine MP içerik ve heterojenlik belirlemek için eşik sınırlıdır-yaklaşık üçte biri orijinal MP içerik içinde konsantre kalan plazmada yaptı eğer sadece bir Buna göre MP içerik eşiği düşük trombosit aktivasyon olduğu gibi % 100 plazma aynı düzeyde belirtir. Yüzde MP trombosit göre MP içeriğidir. Bu daha önce ortalama % MP hala %9,519olduğu kadar PAS ürün ortalama trombosit sayısı düşük olduğunu bildirildi. ABD’de lisanslı PAS trombosit için % MP eşik şu anda % 10’una ayarlanır.

MP birincil kaynak trombosit konsantreleri verici olmakla birlikte, trombosit için stres neden süreçleri MP düzeyine bağlı olarak stres trombosit duyarlılık artacak-trombosit zaten çok etkinleştirdiyseniz, stres gibi küçük raf ömrü, patojen inactivation, yıkama, genişletilmiş ışınlama veya uzun mesafe taşımacılığı MP içerik önemli artışa neden olabilir. Bu gerilim hiçbiri önemli ölçüde etkileyecek homojen, harekete geçirmek trombosit19göstermiştir. Ayrıca, dikkat için örnek kompozisyon kılcal içinde değişimler için potansiyel para değilse hemen hazırlık (Adım 3 Bu protokol tamamlanması) sonra test.

Bu protokol parçacıklar trombosit transfüzyonları ve trombosit aktivasyon biyolojik microparticles kullanılacak mevcut kompozisyon belirlenmesi üzerinde odaklanmıştır. Trombosit transfüzyonları ya sigara-harekete geçirmek (turuncu) öğesini ya da harekete geçirmek (pembe) dayalı bir % 15 microparticle yüzde eşiğinde. Eşik % 15 MP trombosit % 100 plazma için ampirik olarak ortalama 66inci yüzdelik birden çok site olarak belirlendi.

Non-immün trombosit refractoriness engelleyerek hasta bakım ve sürücü maliyet verimliliği artırmak için trombosit envanter yönetimi rutin microparticle DLS ile eleme temel amacı budur. Trombosit çanta ile taranması için DLS sisteminin uygulanması sigara aktive trombosit hasta nüfus en riski trombosit refractoriness geliştirmek için doğrudan kullanıcıya sağlayacaktır.

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Biz kan bağış ve personel Kanada kan Hizmetleri Ağ merkezinde uygulanan geliştirme için toplama ve bu çalışmada kullanılan trombosit birim üretim için teşekkür ederim. Biz Kanada Vakfı yenilik ve Michael Smith Vakfı için sağlık araştırma için altyapı UBC merkezinde kan araştırma için fon için kabul edersiniz. Yayın için finansman LightIntegra Technology Inc., ThromboLUX üreticisi tarafından sağlanan.

Materials

ThromboLUX-M LightIntegra Technology Inc.  LPN120 DLS System
ThromboSight Software LightIntegra Technology Inc.  LPN124 DLS analysis software
Capillaries LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Optinova MLE) LPN065 Custom extruded non-activating, non-birefringent plastic tube, inspected and irradiated
MiniPet  LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor TriContinent Scientific) LPN082 100 µL fixed volume pipette for sampling  
MicroFlex 1-200 µL Pipette tips LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor ESBE Scientific) LPN080 Pipette tips for sampling
Critoseal  LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Fisher Scientific) LPN075 Capillary Tube Sealant
Dukal Alcohol Pad or equivalent LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Dukal Corp.) LPN085 Isopropyl pad (saturated with 70% isopropyl alcohol)
Control beads, 50 nm radius LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor PolySciences Inc.) LPN128 Control beads
Microbead NIST Traceable Particle Size Standard, 3 µm PolySciences Inc. 64060 Standard microbeads: 1.5 µm radius Polystyrene beads; range 1.43-1.58 µm; 1% solids suspensions in de-ionized water
Nanobead NIST Traceable Particle Size Standard, 250 nm PolySciences Inc. 64014-15 Standard nanobeads: 125 nm radius Polystyrene beads; range 120 – 130 nm; 1% solids suspensions in de-ionized water
Genesis BPS RapidSeal II or equivalent Genesis BPS 428-SE640 Tube sealer
Fresenius Kabi Tube Stripper or equivalent Fresenius Kabi 6R4452 Manual tube stripper
Biohazard Shield – Cell Counter or equivalent CardinalHealth S1389-75 Splash Shield
Corning LSE Vortex Mixer or equivalent Corning Incorporated 6775 Vortex mixer
FACSCanto II Flow cytometer  with FACSDiva software version 6.1.3 or equivalent BD Biosciences 338960 Flow cytometer
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dinkla, S., et al. Platelet microparticles inhibit IL-17 production by regulatory T cells through P-selectin. Blood. 127 (16), 1976-1986 (2016).
  2. Yin, W., Ghebrehiwet, B., Peerschke, E. I. Expression of complement components and inhibitors on platelet microparticles. Platelets. 19 (3), 225-233 (2008).
  3. Aatonen, M., Gronholm, M., Siljander, P. R. Platelet-derived microvesicles: multitalented participants in intercellular communication. Semin Thromb Hemost. 38 (1), 102-113 (2012).
  4. Suades, R., Padro, T., Alonso, R., Mata, P., Badimon, L. High levels of TSP1+/CD142+ platelet-derived microparticles characterise young patients with high cardiovascular risk and subclinical atherosclerosis. Thromb Haemost. 114 (6), 1310-1321 (2015).
  5. Obeid, S., et al. Development of a NanoBioAnalytical platform for “on-chip” qualification and quantification of platelet-derived microparticles. Biosens Bioelectron. 93, 250-259 (2017).
  6. Witwer, K. W., et al. Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research. J Extracell Vesicles. 2, (2013).
  7. Lacroix, R., Robert, S., Poncelet, P., Dignat-George, F. Overcoming Limitations of Microparticle Measurement by Flow Cytometry. Semin Thromb Hemost. 36 (8), 807-818 (2010).
  8. Lacroix, R., et al. Standardization of platelet-derived microparticle enumeration by flow cytometry with calibrated beads: results of the International Society on Thrombosis and Haemostasis SSC Collaborative workshop. J Thromb Haemost. 8 (11), 2571-2574 (2010).
  9. Shah, M. D., Bergeron, A. L., Dong, J. F., Lopez, J. A. Flow cytometric measurement of microparticles: pitfalls and protocol modifications. Platelets. 19 (5), 365-372 (2008).
  10. Nolan, J. P., Jones, J. C. Detection of platelet vesicles by flow cytometry. Platelets. 28 (3), 256-262 (2017).
  11. Connor, D. E., Exner, T., Ma, D. D., Joseph, J. E. The majority of circulating platelet-derived microparticles fail to bind annexin V, lack phospholipid-dependent procoagulant activity and demonstrate greater expression of glycoprotein Ib. Thromb Haemost. 103 (5), 1044-1052 (2010).
  12. Inglis, H., Norris, P., Danesh, A. Techniques for the analysis of extracellular vesicles using flow cytometry. J Vis Exp. (97), (2015).
  13. Inglis, H. C., et al. Techniques to improve detection and analysis of extracellular vesicles using flow cytometry. Cytometry A. 87 (11), 1052-1063 (2015).
  14. van der Pol, E., Coumans, F., Varga, Z., Krumrey, M., Nieuwland, R. Innovation in detection of microparticles and exosomes. J Thromb Haemost. 11, 36-45 (2013).
  15. Boudreau, L. H., et al. Platelets release mitochondria serving as substrate for bactericidal group IIA-secreted phospholipase A2 to promote inflammation. Blood. 124 (14), 2173-2183 (2014).
  16. Rousseau, M., et al. Detection and quantification of microparticles from different cellular lineages using flow cytometry. Evaluation of the impact of secreted phospholipase A2 on microparticle assessment. PLoS One. 10 (1), 0116812 (2015).
  17. Groot Kormelink, T., et al. Prerequisites for the analysis and sorting of extracellular vesicle subpopulations by high-resolution flow cytometry. Cytometry A. 89 (2), 135-147 (2016).
  18. van der Vlist, E. J., Nolte-‘t Hoen, E. N., Stoorvogel, W., Arkesteijn, G. J., Wauben, M. H. Fluorescent labeling of nano-sized vesicles released by cells and subsequent quantitative and qualitative analysis by high-resolution flow cytometry. Nat Protoc. 7 (7), 1311-1326 (2012).
  19. Maurer-Spurej, E., Larsen, R., Labrie, A., Heaton, A., Chipperfield, K. Microparticle content of platelet concentrates is predicted by donor microparticles and is altered by production methods and stress. Transfus Apher Sci. 55 (1), 35-43 (2016).
  20. Maurer-Spurej, E., et al. Platelet quality measured with dynamic light scattering correlates with transfusion outcome in hematologic malignancies. Transfusion. 49 (11), 2276-2284 (2009).
  21. Hess, J. R., et al. Clinical and laboratory correlates of platelet alloimmunization and refractoriness in the PLADO trial. Vox Sang. 111 (3), 281-291 (2016).
  22. Doughty, H. A., et al. Relative importance of immune and non-immune causes of platelet refractoriness. Vox Sang. 66 (3), 200-205 (1994).
  23. Vassallo, R. R., Norris, P. J. Can we “terminate” alloimmune platelet transfusion refractoriness. Transfusion. 56 (1), 19-22 (2016).
  24. Anderson, W., Kozak, D., Coleman, V. A., Jaemting, A. K., Trau, M. A comparative study of submicron particle sizing platforms: Accuracy, precision and resolution analysis of polydisperse particle size distributions. J colloid inter sci. 405, 322-330 (2013).
  25. Gyoergy, B., et al. Improved Flow Cytometric Assessment Reveals Distinct Microvesicle (Cell-Derived Microparticle) Signatures in Joint Diseases. Plos One. 7 (11), 49726-49726 (2012).
  26. Urey, C., et al. Combining gas-phase electrophoretic mobility molecular analysis (GEMMA), light scattering, field flow fractionation and cryo electron microscopy in a multidimensional approach to characterize liposomal carrier vesicles. Int J Pharm. 513 (1-2), 309-318 (2016).
  27. Mohr, K., et al. Evaluation of multifunctional liposomes in human blood serum by light scattering. Langmuir. 30 (49), 14954-14962 (2014).
  28. Maurer-Spurej, E., Brown, K., Labrie, A., Marziali, A., Glatter, O. Portable dynamic light scattering instrument and method for the measurement of blood platelet suspensions. Physics in Medicine and Biology. 51 (15), 3747-3758 (2006).
  29. Arraud, N., et al. Extracellular vesicles from blood plasma: determination of their morphology, size, phenotype and concentration. J Thromb Haemost. 12 (5), 614-627 (2014).
  30. Ambrose, A. R., Alsahli, M. A., Kurmani, S. A., Goodall, A. H. Comparison of the release of microRNAs and extracellular vesicles from platelets in response to different agonists. Platelets. , 1-9 (2017).
  31. Buzas, E. I., Gardiner, C., Lee, C., Smith, Z. J. Single particle analysis: Methods for detection of platelet extracellular vesicles in suspension (excluding flow cytometry). Platelets. 28 (3), 249-255 (2017).
  32. Stoner, S. A., et al. High sensitivity flow cytometry of membrane vesicles. Cytometry A. 89 (2), 196-206 (2016).
  33. Labrie, A., Marshall, A., Bedi, H., Maurer-Spurej, E. Characterization of platelet concentrates using dynamic light scattering. Transfus Med Hemother. 40 (2), 93-100 (2013).
  34. Ueba, T., et al. Plasma level of platelet-derived microparticles is associated with coronary heart disease risk score in healthy men. J Atheroscler Thromb. 17 (4), 342-349 (2010).
  35. Badimon, L., Suades, R., Fuentes, E., Palomo, I., Padro, T. Role of Platelet-Derived Microvesicles As Crosstalk Mediators in Atherothrombosis and Future Pharmacology Targets: A Link between Inflammation, Atherosclerosis, and Thrombosis. Front Pharmacol. 7, 293 (2016).
  36. Berezin, A. E., Kremzer, A. A., Berezina, T. A., Martovitskaya, Y. V. The pattern of circulating microparticles in patients with diabetes mellitus with asymptomatic atherosclerosis. Acta Clin Belg. 71 (1), 38-45 (2016).
  37. Marcoux, G., et al. Microparticle and mitochondrial release during extended storage of different types of platelet concentrates. Platelets. 28 (3), 272-280 (2017).
  38. Yanez-Mo, M., et al. Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. J Extracell Vesicles. 4, 27066 (2015).
  39. Reddoch, K. M., et al. Hemostatic function of apheresis platelets stored at 4 degrees C and 22 degrees C. Shock. 41, 54-61 (2014).
  40. Kelly, A. M., et al. The effect of variation in donor platelet function on transfusion outcome: a semirandomized controlled trial. Blood. 130 (2), 214-220 (2017).
  41. Peerschke, E. I., Yin, W., Ghebrehiwet, B. Platelet mediated complement activation. Adv Exp Med Biol. 632, 81-91 (2008).
  42. Redman, C. W., Sargent, I. L. Microparticles and immunomodulation in pregnancy and pre-eclampsia. J Reprod Immunol. 76 (1-2), 61-67 (2007).
  43. Ripoche, J. Blood platelets and inflammation: their relationship with liver and digestive diseases. Clin Res Hepatol Gastroenterol. 35 (5), 353-357 (2011).
  44. Ling, Z. L., Combes, V., Grau, G. E., King, N. J. Microparticles as immune regulators in infectious disease – an opinion. Front Immunol. 2, 67 (2011).
  45. Melki, I., Tessandier, N., Zufferey, A., Boilard, E. Platelet microvesicles in health and disease. Platelets. 28 (3), 214-221 (2017).
  46. Culibrk, B., et al. Application of the ADVIA cerebrospinal fluid assay to count residual red blood cells in blood components. Vox Sang. 103 (3), 186-193 (2012).
  47. Connolly, K. D., et al. Lipoprotein-apheresis reduces circulating microparticles in individuals with familial hypercholesterolemia. J Lipid Res. 55 (10), 2064-2072 (2014).
  48. Mork, M., et al. Prospects and limitations of antibody-mediated clearing of lipoproteins from blood plasma prior to nanoparticle tracking analysis of extracellular vesicles. J Extracell Vesicles. 6 (1), 1308779 (2017).
  49. Raczat, T., et al. The influence of four different anticoagulants on dynamic light scattering of platelets. Vox Sang. 107 (2), 196-199 (2014).

Tags

Platelet TransfusionsMicroparticle ContentPlatelet ActivationRoutine Screening MethodDynamic Light ScatteringPlatelet Concentrate SamplingTube StripperTubing Segment Sampling

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Millar, D., Murphy, L., Labrie, A., Maurer-Spurej, E. Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions. J. Vis. Exp. (131), e56893, doi:10.3791/56893 (2018).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image