Изоляции клеток эндотелия прародителем от человеческой пуповинной крови

Некоторые следователи изучили характеристики и потенциал человека Пэк^{5,10,11,12,13}. Пэк может быть описана как циркулирующих клеток, которые имеют возможность присоединиться к эндотелиальной тканей в местах гипоксии, ишемии, травмы или образования опухоли и способствовать формированию новых сосудистых структур^4,14. Их наблюдаемых участие в неоваскуляризация, в форме послеродовой vasculogenesis, привело к пониманию патофизиологии этих клеток и их использования в терапевтического применения^{4,15, 16}. количество Пэк в лицо было показано, быть связаны с сердечно-сосудистой патологии^{9,,1516,,1718,19 ,20}. Другие исследования также дифференцированы Пэк в клапан фибробластоподобных фенотип и предложил, что эти клетки могут использоваться для тканевой инженерии сердца клапаны^7,21.

Конкретной ячейке поверхности молекул, необходимо изолировать Пэк не были четко определены из-за расхождений между исследования⁴. Адгезии МНК к матрице, с воздействием различных условий культуры, было выполнено несколько групп^1,17,22,23, предполагая, что предполагаемый Пэк может Отображение различных фенотипических свойств. Эти свойства включают в себя отсутствие phagocytotic способности, формирования трубки в Matrigel и поглощение Dil ацетилированные уровня липопротеидов низкой плотности. Два свойства с которой Пэк может быть структурировано⁵высокий колониеобразования и пролиферативным потенциалом. Пэк могут также образовывать в vitro трубочки, когда cocultured с человеческих легких плода фибробластов⁴. Эти клетки, как известно, чтобы выразить эндотелиальных клеток поверхностных маркеров и поделиться некоторыми из гемопоэтических маркеры^13,24,25. Положительно выраженное маркеров, которые широко принимаются фенотипирование Пэк, CD31, CD34, Сосудистый эндотелиальный фактор роста рецепторов 2 (VEGFR2), Виллебранда фактор (vWF), CD133, c комплект и сосудистого эндотелия Кадгерины (VE-Кадгерины)^{4 , 18}. клетки, которые совместно Экспресс CD90, CD45, CD14, CD115 или альфа гладких мышц актина (α-SMA) не считаются Пэк из-за их ограниченного пролиферативный потенциал, способность фагоцитоз бактерий и неспособности сформировать de novo человека судов в vivo^4,7. Эта статья конспектирует измененный Протокол для изоляции клеток эндотелия прародителем от человеческой пуповинной крови без необходимости в любую ячейку Сортировка протоколы. Для этой статьи мы использовали CD31, CD34 и VEGFR2 как положительных маркеров, с α-SMA как отрицательный показатель.

В этой статье мы предлагаем, что метод изоляции и культивирования эндотелиальной прогениторных клеток из пуповинной крови без ячеек, сортировка с использованием специализированных среднего роста эндотелия сосудов, дополнена факторов роста (СГЭ). Этот внеочередного общего собрания акционеров содержит Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) и фактор роста фибробластов (ФБП), которые увеличивают миграцию эндотелиальных клеток²⁶выживания и распространения. Она также включает в себя аскорбиновую кислоту, которая отвечает за поддержание булыжником морфологию клеток; инсулиноподобный фактор роста-1 (ИФР-1), которая обеспечивает ангиогенных и мигрирующих функции; и гепарин, который вызывает повышение долгосрочной стабильности факторов роста в среднесрочной²⁶. Другие факторы роста, добавляется эндотелиальных клеток питательной среды включает в себя добавки с эпидермального фактора роста (EGF), который помогает в стимулировании пролиферации и дифференциации и гидрокортизон, который знакомит клетки EGF²⁶ . Мы покажем, что использование этой конкретной роста среднего дает более высокие числа Пэк, по сравнению с эндотелиальной базальной средний (МВБ) или Дульбекко изменение средних орла (DMEM).