Isolement et enrichissement du foie progénitrices sous-ensembles identifiés par une combinaison de marqueurs de surface Novel

La régénération hépatique est principalement associée à la capacité d'auto-renouvellement des hépatocytes. Néanmoins, les lésions chroniques du foie se produisent avec l' activation des cellules progénitrices et l' expansion, qui ont été associés à leur capacité à se différencier en hépatocytes et cholangiocytes ^{1, 2, 3, 4.} Ceci est particulièrement pertinent parce que, au cours des blessures chroniques, la prolifération des hépatocytes est pas efficace. En dépit de nombreuses études de traçage génétique ciblant les cellules souches, leur rôle dans la régénération du foie reste controversée ^{5, 6, 7, 8.} En outre, l'activation des cellules progénitrices a été liée à une augmentation de la réponse fibrotique dans le foie, ce qui soulève des questions quant à leur rôle exact pendant ⁹ blessures, ^10.

Le caractère hétérogène du compartiment de cellules progénitrices a longtemps été suggérée par des études d'expression génique , qui isole des cellules progénitrices exprimant un marqueur de surface unique en utilisant une microdissection ou une cellule méthodes basées sur le tri ^{1, 11.} En effet, tout récemment, une nouvelle combinaison de marqueurs de surface à l' aide gp38 (podoplanin) lié sans équivoque des marqueurs individuels précédents de progéniteurs de ¹² différents sous – ensembles. Surtout, ces sous – ensembles non seulement diffèrent par leur expression de marqueurs de surface , mais aussi présentaient des altérations fonctionnelles pendant ¹² blessures.

Plusieurs modèles animaux ont été utilisés pour étudier l'activation des cellules progénitrices et la régénération du foie. Il semble que les différents types de blessures favorisent l'activation des sous – ensembles de cellules souches ¹² différentes. Cela pourrait expliquer le phdivergence enotypic de la réaction ductulaire observée chez les humains ^4. Ainsi, les analyses phénotypiques et fonctionnels complexes de cellules progénitrices sont essentiels pour comprendre leur rôle dans les blessures et la vraie signification de la réaction canalaire dans les maladies du foie.

Outre les combinaisons de marqueurs de surface, les différences cruciales dans les protocoles d'isolement de cellules compliquent encore davantage les conclusions fondées sur des études antérieures ^2. Une quantité importante d'études a évoqué le rôle des cellules progénitrices qui diffèrent grandement dans leur protocole d'isolement (par exemple, la dissociation du foie (combinaison de l' enzyme et la durée du processus), de densité moyenne, et la vitesse de centrifugation) ^2. Une technique d'isolation optimisée, offrant une meilleure viabilité des populations de cellules rares et de réflexion de la composition du sous – ensemble, a été développé et publié récemment ^12. Le but de cet article est de fournir un plus detailed protocole de la procédure d'isolement des cellules du foie et de l'analyse du sous-ensemble pour permettre une bonne reproduction de la technique. En outre, le protocole comprend une comparaison avec la méthode d'isolement préalable pour démontrer les différences par rapport au nouveau protocole.