A method for establishing lung infections in immunocompetent rodents is described. With proficiency, this method can be performed quickly and easily to induce stable infection with many isolates of S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae and A. baumannii.
יעילות של טיפולים אנטי-בקטריאלי מועמד חייבת להיות מופגנת במודלים של בעלי חיים של זיהום כחלק מתהליך הגילוי ופיתוח, רצוי במודלים אשר לחקות את האינדיקציה הקלינית המיועדת. שיטת התרמת דלקות ריאות חזקות אצל חולדות ועכברים עם מערכת חיסון תקינים מתוארת אשר מאפשרת ההערכה של טיפולים במודל של דלקת ריאות חמורות הנגרם על ידי S. pneumoniae, H. אינפלואנזה, פ aeruginosa, ק pneumoniae או baumannii א. בעלי חיים מורדמים, וכן בידוד אגר מבוססת מופקד עמוק לתוך הריאות באמצעות אינטובציה intratracheal הניתוחית. הזיהום הנובע עולה בקנה אחד, לשחזור, ויציב לפחות 48 שעות ועד 96 שעות עבור רוב הבידודים. מחקרים עם antibacterials משווקים הוכיחו קורלציה טובה בין יעילות in vivo ו רגישות במבחנה, הלימה בין מטרות pharmacokinetic / pharmacodynamic נקבעהבמודל זה ויעדים קבלו קליני נצפה. אמנם יש השקעה ראשונית זמן כאשר לומדים את הטכניקה, זה יכול להתבצע במהירות וביעילות פעם מיומנת מושג. יתרונות של המודל כוללים חיסול של דרישת נויטרופני, חוסן מוגבר שחזור, יכולת ללמוד יותר פתוגנים ומבודדים, גמישות משופרת בעיצוב מחקר והקמת זיהום מאתגר מארח עם מערכת חיסון תקין.
הערכת היעילות של לתרופות פוטנציאליות במודלים של בעלי חיים של זיהום הוא מרכיב קריטי של תהליך גילוי תרופות אנטיבקטריאלי. בשנת vivo מחקרי יעילות לספק נתונים חשובים לקבלת החלטות על פני האורך של מאמצי גילוי, מן הבהרת יחסים-פעילות מבנה (SAR) ואופטימיזציה סדרה כימית להוביל דרך קביעה-pharmacodynamic pharmacokinetic (PK / PD) מאפיינים של תרכובות ותמיכת בחירה במינון פיתוח ואישור רגולטורים קליניים. דגמים רבים זיהום חיה מתוארים בספרות למטרות אלה. אחד המודלים הנפוצים ביותר בשימוש נרחב הוא זיהום ירך עכבר נויטרופני, אשר היה חלוץ ידי 1 נשר, 2 והרחיבו לאחר מכן פוגלמן וקרייג 3, 4. מודל זה כבר לא יסולא בפז לתמיכת קביעת נקודות עצירה רגישה חיידקים למתן מטרות PK / PD להנחות מינון אדם. ישנם בחינה רבהPles שבהם היכולת החזויה של מודל זה הוכחה 4-7. עם זאת, אחד החסרונות של מודל זיהום הירך הוא חוסר הרלוונטיות ישירה למחל ריאה. כיום ישנו דגש רב יותר על התאמת האתר של זיהום במודלים של בעלי חיים לאתר של זיהום בבני אדם; וכך, ללמוד תרכובות לטיפול בדלקת ריאות, הוא אידיאלי כדי לנצל מודל דלקת ריאות בחיות.
כמה שיטות גרימת זיהומים בריאות בחיות מעבדה תוארו ושימשו מחקרי יעילות אנטיבקטריאלי כולל שאיפה אפי, השאיפה דרך המסלול הלוע התחתון, חשיפה אירוסול, וכירורגי intratracheal חיסון 8. במקרים רבים, בעלי החיים (במיוחד עכברים) צריכים קודם כל להיות שניתנו נויטרופני על מנת להשיג זיהום ריאות חזק. למרות קשה זו מדינת מדוכאי חיסון, מספר חיידקים פתוגנים זנים אשר מייצרים זיהומי קיימא במכרסמים הואמוגבל. לדוגמה, זה יכול להיות קשה לקבוע אינפלואנזה המופילוס בהצלחה או baumannii Acinetobacter במודלים דלקת ריאות 9, 10, ופתוגנים אפילו יותר ארסית, כגון Streptococcus pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa ו Klebsiella pneumoniae, יכול להוות אתגר 11-13.
בשנת 1991, סמית 'תארה מודל דלקת ריאות אצל חולדות יַנוּקָא immunocompetent שבו הזיהום הוקם על ידי הקניית חיידקים ישירות לריאות באמצעות שיטת אינטובציה intratracheal ניתוחית פשוט 14. ברי et al. מאוחר יותר שינה את שיטת הדבקת עכברים 15. שימוש בידוד אגר מבוסס, טכניקת חיסון זה גורמת למחל ריאה חזקות בשני חולדות ועכברים עם מערכת החיסון התקינות עם ס pneumoniae, H. אינפלואנזה, ק pneumoniae, פ aeruginosa ו baumannii א. זה מקובל מגוון רחב של בידודים, כולל אלה מחסה שונה להתנגדהגורם אהה ואלה אשר אינם מייצרים זיהום קיימא דרך נתיבי חיסון אחרים. זה גם מאפשר יעילות שתיקבע בחיות immunocompetent, מצב שבו הוא רלוונטי יותר מאשר דגם העכבר המסורתי נויטרופני עבור אוכלוסיות חולים שאינם מדוכאי חיסון קשה. העקביות והאמינות של המודל הזה על פני פתוגנים רבים ומבודדים עושות את זה היטב מתאים מחקרי יעילות אנטיבקטריאלי.
להצלחה אופטימלית בשעתוק מודל זיהום זה, ההצעות הנוספות הבאות צריכות להיחשב. ארסיות של בידודים חדשים יכולה להיות מוגברת על ידי passaging 2 – 3 פעמים ב vivo לפני הניצול במחקר. מניות קפוא חיידקים צריכות תמיד להיות מוכנות מהמקור עיקרי in vivo מקור -derived עם קטעים מעטים ככל האפשר מן המקור, ו refreezing או שימוש חוזר של מניות מופשרות הוא מיואש. שימוש מבודדים קליני האחרון התאושש מחול עם דלקת ריאות, ו / או הכנת תרבויות בצמיחה בשלב יומן יכול גם לעזור לשפר את הקמת הזיהום. דילול פי חמישה לתוך אגר (למשל 2 השעיה מלוחה מיליליטר הוסיפה 8 אגרו מיליליטר) יכול לשמש במקום עשרה לקפל להגדיל את הבידוד חיידקי, ואת נפח הבידוד יכול להיות מותאם על פי הגודל של החיה (למשל 200 μL / בעלי חיים בדרך כלל מחוסן לתוך 250 חולדות גרם). לפני הוספת השעית החיידקים המלוחה לתוךאגר (כלומר שלב 2.3), צפיפות החיידקים ניתן לחזות או מוערך על ידי בדיקה ויזואלית, סטנדרטים מקפרלנד או מדידות צפיפות אופטיות. זה עוזר להכיר את מאפייני צמיחה במבחנה לכל לבודד לפני ביצוע בניסויי vivo. עקביות בצמיחה וטיפול מאפשרת הערכה המדויקת ביותר של צפיפות חיידקים לכל לבודד נתון. שיטות מיקרוביולוגית תקן שונות מאלה שתוארו, כגון תקשורת אלטרנטיבית ורקמות homogenizers, עשויות לשמש מתאים להכנת inocula ואת ספירת חיידקי רקמות נגועות.
מומלץ מאוד להכין או להמיס את אגר יום לפני הניסוי ולאחסן אותו לילה באמבט מים נפרד להגדיר עד 50 מעלות צלזיוס. זה יפשט את התהליך ולעזור להישמר מפני אגר להיות חם מדי בזמן הזיהום. טמפרטורה של 41 – 42 מעלות צלזיוס משיגה איזון טוב בין maintaiנינג אגר במצב נוזלי מבלי להיות חם מדי להישרדות חיידקים לטווח קצר. כחלופה ניתן אגר מזין, אגר אצילי שימש בהצלחה בניסויים מסוימים. צינור אחד הבידוד אגר הוא בדרך כלל מספיק עבור ניסוי כולו (והוא מומלץ), אבל צינורות מרובים יכולים להיות מוכנים להדביק מספר רב של בעלי חיים (למשל יותר מ -60) או כאשר התהליך הדבקה לוקח יותר 30 – 45 דק 'אם צינורות בידוד דרושים מספר, מוסיף את השעית חיידקים המלוחה על צינור אחד של אגר כפי שהוא נדרש. הפעולה זו מפחיתה את הסיכון כי הישרדות חיידקים ו / או כושר תושפע בחשיפה ממושכת טמפרטורה גבוהה לפני החיסון. יצוין כי צינורות בידוד מרובים באמצעות עשויים גם לדרוש הליכים אקראיים בעלי חיים נוספים. במידת האפשר, להדביק את כל החיות מאותו הכנה הבידוד. מומלץ להתאים את גודל ניסויים לרמה הנוכחית של מיומנות עם technique.
מדען מיומן יכול לצנרר לחסן חיה בתוך פחות מ -30 שניות לחסן עד 5 – 6 חיות לכל אצווה (כלומר עם מזרק אחד מלא של בידוד אגר). לאלו לימוד הטכניקה, המהירות חשובה כמו אגרתי תתחיל לחזק; עם זאת, מיקום מדויק של הבידוד חשוב יותר. להתחיל עם 1 או 2 חיות לכל תצווה, ולהגדיל את הטכניקה הופכת יותר מוכרת. החיות להמשיך לנשום במהלך אינטובציה; וכך, חלון הזמן עבור חיסון תלוי כמה מהר את החיה מתאוששת מן isoflurane, אשר צריך להיות כ 2 – 3 דקות. בעלי חיים המעוררים בתהליך ניתנים מחדש מורדמים ניסו בשנית, אבל זה לא מומלץ לעשות זאת שוב ושוב. חיסון מוצלח על הניסיון הראשון צפוי כמעט 100% של בעלי חיים פעם מושגת מיומנת. הערה שזה קל יותר ללמוד את הטכניקה באמצעות החולדות ראשונות; עכברים הם יותר עדין קטן מדיls נוטה יותר סתימה עם אגר הקרושה אם לא מניפולציות במהירות. מזרקים טרום התחממות, צינורות מלוחים כמו גם שמירה על מכשיר אינטובציה על משטח חם (לא חם), כגון כרית חימום על הגדרה נמוכה, יכול לעזור למנוע התמצקות של אגר. כאשר לומדים את הטכניקה, זה גם מועיל לתרגל מיקום נכון של הבידוד באמצעות צבע כהה (כגון מתילן כחול מרוכז) במקום השעית החיידקים אגרו. בצע את ההליך כמתואר, אבל להרדימו מיד לאחר חיסון של צבע (שאינו מאפשר את החיה להתאושש בין הרדמה המתת חסד). לנתח כדי לקבוע היכן לצבוע הושם, ולהתאים טכניקה בהתאם.
המדד העיקרי במודל זה הוא CFU מריאות נגועות. הישרדות היא לא אינדיקטור טוב של נטל בקטריאלי אינו נקודת הסיום מומלץ. עבור מחקרי יעילות, ה- N הציע הוא 5 – 6 חיות לכל קבוצה כמו זה predicteד כדי לאתר ≥1 יומן 10 הבדלים CFU בין קבוצות עם כוח% 90 לפחות. ניתן בעקבות בעלי חיים יכולים להידבק בקבוצות כך חבריהם לכלוב להישאר ביחד, או תהליך אקראי אמיתי. שימו לב שאם קבוצות מוקצות על ידי כלוב, הקבוצות צריכות להיות נגועות ב רצף אקראי עם פקדי צמיחת סוף המחקר הנגועים אחרון (כדי לאשר הישרדות חיידקים / כושר לא היה מושפע משך הזמן החשוף טמפרטורה גבוהה באמבט מים). אין שיטות צנזורת נתונים צריכות להיות הכרחיות, ואף אחד המומלצים למעט סילוק המיידי של כל חיה כי כבר ברור mis-מחוסן בתחילת המחקר (לפני תחילת כל טיפול). בעלי חיים מומתים לפני תום המחקר צריכים להיות שנדגמו ותוצאות נכללות בנתונים להגדיר אלא סיבה טובה הדרה זוהתה באופן פרוספקטיבי (כלומר אירוע שאינו קשור זיהום או טיפול). שריד התרופה עלולה AFFect כמה דוגמאות והוא מהווה שיקול חשוב בכל דגמי זיהום in vivo. אם תרכובת ניתנת לעתים קרובות, בסמוך למועד של המתת חסד או יש זמן מחצית חיים ארוך, זה יכול להיות נוכח homogenate רקמות בריכוז גבוה מספיק כדי להמשיך להרוג חיידקים vivo לשעבר במהלך תהליך ספירה בקטריאלי (דילול ציפוי של הדגימות או על הצלחות אגרו במהלך דגירת הלילה). כדי למנוע זאת, פחם פעיל ו / או תוסף אשר מפרק את המולקולה הפעילה מבלי לפגוע תאי חיידקיים ניתן להוסיף המדגם לפני המגון. שיטות אחרות כוללות centrifuging הדגימות כדי להסיר את רוב המתחם הפעיל (שאמור להישאר supernatant) והעסיקו דילול שונה ציפוי מזימות כדי לדלל את המתחם הפעיל מספיק לריכוז שאינו מעכב.
כפי שמעידה דוגמאות שניתן לראות בתרשים 2, מודל זה בהצלחה induces דלקות ריאות במכרסמים עם מגוון רחב של אורגניזמים כולל אלה שאינם גדלים גם במודלים אחרים (אינפלואנזה H. למשל). זיהומים אלה הם עקביים לשחזור, להקטין את הסבירות כי ניסויים יהיו צורך לחזור בשל כשל מודל ו / או ביצועים ירודים עם לבודד נתון. למרות החיות הן עם מערכת חיסון תקינות, הם אינם מסוגלים לפתור את הזיהום במהירות, אם בכלל. זה מאפשר גמישות רבה יותר אורך המחקר, כפי מבודד רבים לשמור על זיהום קיימא דרך לפחות 96 שעות ללא צורך בזריקות חוזרות ונשנות לשמור נויטרופניה. היתרון הפוטנציאלי של הלימוד יעיל אנטיבקטריאלי בחיות immunocompetent כבר ציין בעבר 20, 21, ויש ראיות לכך, עבור תרכובות מסוימות (למשל oxazolidinones), נתוני מכרסמים שאינם נויטרופני יכולים יותר לחזות במדויק במטרות חשיפה אנושיות בהשוואה לאלו נויטרופני שניתנה 5. השירות רב תכליתי של tהוא מודל מודגם איורים 3 ו -4 ובלוחות 1 ו 2. מחקרים אלה הם חלק מאוסף גדול של נתונים שהתפרסמו פורסם שנוצרה עם המודל הזה כדי לתמוך במאמצים אופטימיזציה להוביל 16, 17, 22-24, להשוואה והאישור של מינון אדם מוצע משטר 19, 25-29 ו לאפיון PK / PD 18, 30-32 .While המודל הזה הוא בתחילה מורכב יותר לנהל בהשוואה לשיטת משאיפת אף, ישנם יתרונות רבים כפי שתואר לעיל. בעזרת תרגול שימוש שיגרתי, הטכניקות צריכות להיות פשוטות לביצוע.
ראוי לציין בחלק מהמחקרים כי הנטל חיידקי בתחילת המחקר היה נמוך מזה ממוקד בדרך כלל במודלים זיהום ריאה אחרות. הדבר נובע במידה רבה על הדילול הנדרש לתוך אגרתי ואת נפח האתגר הקטן, במיוחד אצל עכברים. עם זאת, ראוי גם לצייןהתפתחות חיידקים כי נתפסה בכל המקרים גם כאשר הנטל הראשוני היה נמוך יחסית. את עומס חיידקי בסיס היעד הוא 6 עד 6.5 יומן 10 ריאות CFU / (6.8 עד 7.3 יומן 10 CFU / g של רקמה בעכברי סמך משקל ריאות ממוצעות) אשר תואמת את הצפיפויות מוערכות בבני אדם עם דלקת ריאות חמורות 33. נטל בסיסי גבוה יותר ניתן להשיג על ידי התמקדות יותר את הבידוד חיידקי או על ידי וכתוצאה מכך התעכבה תחילת הממשל המתחם כדי לאפשר התפתחות חיידקים נוספים; עם זאת, להגדיל את העומס אתגר יותר מדי יכול להוביל למחלות קשות וחריף באופן חריג (כלומר מוות בתוך פחות מ -24 שעות) כי הוא עקשן לכל הטיפולים אנטיבקטריאלי קשר הרגישות. למרות הבידוד מושם בתחילה מועדף לתוך הריאה השמאלית של החיה, הזיהום מתפשט בדרך כלל ברחבי בשתי הריאות. מחלת ריאות מתקדמת, הפצת החיידקים לאיברים אחרים, ותחלואה סופית היא לעתים קרובות observאד עם ס pneumoniae, ק pneumoniae ו פ aeruginosa. מעניין, זיהומים עם אינפלואנזה ח ו baumannii א הם בדרך כלל יותר מאופקים, ורק לעתים רחוקות לגרום למוות בבית inocula החיידקים שנקבע.
תוצאות יעילות המתקבלות במודל זה יש בקורלציה גם עם פרופילים רגישים במבחנה כמו גם מטרות PD PK / מוגדרות. צמצום הוצאה לנפש ניטלת חיידקים הם נצפו באופן שיגרתי עבור מבודד הנחשב רגיש הסוכן נבדק, בעוד אלה תערוכה העמידה הנחשב ללא שינוי או התפתחות חיידקים מעל הבסיס 16, 17, 19, 24-29. בניסויים שנערכו בחיות מעבדה הערכת שני quinolones וכן macrolide באמצעות מודל זה 32 הראו כי היעד PK / PD הנדרשים 1-log 10 הפחתת ס pneumoniae בהשוואה לנקודת ההתחלה בקורלציה עם יעד שנקבע עכברים נויטרופני, וחשוב יותר, עם מטרות קליניות pneum חיידקי נרכש בקהילה6 onia, 7, 34, 35. Gepotidacin, אנטיביוטיקה המנגנון החדשני, נוסתה נגד מספר ס pneumoniae ונזקק יעד דומה PK / PD הפחתה 1-log 10 במודל דלקת ריאות זה 31 כפי שדרשה הפחתה 1-log 10 במודל הירך נויטרופני 36 כאשר חדירת ריאות נלקחה בחשבון (נתונים על קובץ). באופן דומה, PK / המטרות PD שנקבעו עכברי GSK2251052 נגד פ aeruginosa תאמו עבור קיפאון, 1- ו -2-log 10 הפחתות CFU בין מודל ריאה זה 30 ואת מודל זיהום נויטרופני ירך כאשר חדירת ריאות נחשבות 37, 38 . מתאם עם מודל דלקת ריאות נויטרופני באמצעות חיסון אף היה עני; עם זאת, GSK2251052 לא לייצר יותר מאשר תגובה סטטית שלימוד 38. זה ניתן לייחס בידוד החיידקים הגבוה, אשר היה 8 יומן 10 CFU / עכבר לעומת 6 יומן <sub> 10 CFU / עכבר אינטובציה נויטרופני הירך 37 ו intratracheal 30 דגמים. אוסף של נתונים כגון זה הוא קריטי עבור בהשוואות, שכן היא מאפשרת השוואה ישירה עם מודלים קיימים קורלציה עם נתונים קליניים על מנת להעריך את יכולת הניבוי של התרגום. עוד שימוש נרחב של מודל דלקת ריאות אינטובציה intratracheal יספק נתונים נוספים על אלו סוגים של ניתוחים.
ישנן מספר מגבלות של מודל דלקת ריאות עם מערכת חיסון תקינה זו. ראשית, הוא לא מתאים היטב כדי להעריך הופעתה של התנגדות ספונטנית בגלל בידוד החיידקים הגבוה הנדרש בדרך כלל לתוצאות מחקרים כאלה חמורים מדי זיהום. בעקבות ניסיונות להשיג ניטל חיידקים של יומן 7 או 8 10 CFU בתחילת המחקר, תחלואה מהירה נצפתה (כלומר בעלי חיים הופכים הגוססת בתוך פחות מ -24 שעות) למרות שטיפה היסודית של inocula כדי לסלק רעלים קיימים (נתונים על קובץ). זהייתכן שתוכל להתגבר על בעיה זו באמצעות מכרסמים גדולים. חולדות, במיוחד חולדות כבדות (> 250 גרם), מופיעות לסבול יותר inocula הגבוה לעומת עכברים עשויים להיות מתאים עבור סוגים אלה של מחקרים. מגבלה שנייה היא כי השימוש של אגר כמו משפר-זיהום עלול למנוע שימוש במודל להערכה של מארחת מסוימת: אינטראקציות הפתוגן. הוא האמין כי אגר מספק נקודה מוגנת מוקדים עד הזיהום הוא לקבוע באופן מלא בתוך הריאה. אפשר לספק את הבידוד מלוח ולא אגרתי כדי לעזור להתגבר על בעיה זו; עם זאת, יש לציין כי זו תייצר זיהום רק עם בידודים כמה. שלישית, קיימת עקומת למידה תלולה נדרש להיות בקיאים הטכניקה. ההליך יכול להיות עדין, במיוחד אצל עכברים. יקל בטעות למקום צינורית המתכת לתוך הוושט, ו בכוח מופרז יכול להוביל ניקוב או הוושט או קנה הנשימה. מיקום זהיר של הבידוד הוא גםנדרשים או או לא חיות לשחזר או לא להיות נגועות כראוי. עם זאת, עם סבלנות והתמדה, אפשר להיות מאוד מיומן לבצע את הטכניקה במהירות, בצורה חלקה ומדויק.
על ידי ביטול הדרישה עבור נויטרופניה, הגדלת האיתנות שחזור, מאפשר לחוקרים ללמוד יותר פתוגנים ומבודד, שיפור הגמישות של תכנון הניסוי ומתן זיהום מאתגר לאפיין פרמקודינמיקה עבור דלקת ריאות, מודל דלקת ריאות עם מערכת חיסון תקינה זה מוסיף ערך משמעותי לגילוי האנטיביוטיקה קהילה. שימוש מוגבר של מודל זה על ידי חוקרים נוספים יעזור לספק את בהשוואות דרושים לכך שהוא יוכל להשיג הסכמה רחבה יותר ולהמשיך לספק מידע תומך פרשנות ראויה.
The authors have nothing to disclose.
JH מבקש להכיר ולהודות מנטור, חבר ומנהל לשעבר ואלרי ברי עבור הראשון מלמד אותנו מודל זה; וגארי Woodnutt, שלימד אותנו את היסודות של השראה מחויבותנו בתחום PK / PD אנטיבקטריאלי. כל המחברים מבקשים להודות דוד פיין לתמיכה והערכתו המדע שלנו. ברצוננו להכיר לשעבר שלנו עמיתים מיקרוביולוגיה vivo שתרמו הגוף של נתונים שנוצרו באמצעות שיטות אלה, במיוחד פיט DeMarsh, רוב שטראוב, רוני פייג 'Nerissa סיימון. לבסוף, תודתנו ללכת העמיתים מיקרוביולוגיה במבחנה שלנו על עזר, במיוחד עבור מתן כל המיקרופונים אנו מבקשים (לין McCloskey, ג'וש המערבי ושרון מינ '); ועבור צוות מיקרוביולוגיה קלינית שלנו אשר מספק ייעוץ ותמיכה מומחה (לינדה מילר, ניקול Scangarella-עומאן ודבורה באטלר).
TSA II Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood | Becton Dickinson and Company | 4321261 | |
Chocolate II Agar | Becton Dickinson and Company | 4321267 | |
BBL Brain Heart Infusion Broth Modified | Becton Dickinson and Company | 299070 | |
BBL Trypticase Soy Broth with 20% Glycerol | Becton Dickinson and Company | 297808 | storage media for frozen stock |
Inoculating loop | Nunc | 251586 | |
0.9% Sodium Chloride, USP | Baxter Healthcare Corporation | NDC 0338-0048-04 | |
Difco Nutrient Agar | Becton Dickinson and Company | 213000 | |
30 ml free standing centrifuge tube with cap | EverGreen Scientific | 222-3530-G80 | |
50 ml Polypropylene Conical Tube 30 x115mm | Falcon, a Corning Brand | 352070 | |
14 ml Polypropylene Round-Bottom Tube 17 x 100mm | Falcon, a Corning Brand | 352059 | |
Guide Tool | Intek Services Ltd | GT01 | custom-made metal cannula for rats |
90' Portex tubing | SAI | POR-080-100 | plastic cannula for rats |
1 ml TB syringe slip tip | Becton Dickinson and Company | 309659 | |
PrecisionGlide Needle 25G x 5/8 | Becton Dickinson and Company | 305122 | |
Animal feeding needle – straight 20×3" 2-1/4 | Popper and Sons, Inc | 7903 | used to create metal cannula for mice |
Intramedic polyethylene tubing | Clay Adams brand – Becton Dickinson and Company | 427401 | plastic cannula for mouse |
75 TN 5.0ul syringe 26s/2"/2 | Hamilton | 87930 | HPLC glass injection syringe |
Pyrex tube, culture 25×150 screwcap with rubber liner | Corning | 9825-25 | to autoclave/store metal cannulae |
70% isopropyl alcohol | Vi-Jon (Swan) | NDC 0869-0810-43 | |
Isoflurane, USP | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-10 | |
Stomacher | Seward | Stomacher80 | |
Stomacher 80 classic bags | Seward | BA6040 | |
Assay plate, 96 well, round bottom | Costar, Corning Inc | 3795 | optional, for serial diluting |
Blood Omni Plates | Hardy | #A127 | optional, rectangular blood plates |