Clostridium difficile, hastane antibiyotik ilişkili ishal enfeksiyonlarının ¹ en önemli nedenlerinden biridir. Bu Gram-pozitif anaerobik bakteri dışkı-ağız yolu ile kendi spor formu yoluyla bulaşır. Son on yılda, yeni '' salgın '' ya da '' hipervirülan 'suşları (/ 027 örneğin BI / NAP1) Kuzey Amerika ve Avrupa'da ² yeni enfeksiyonların ve ölüm oranlarında ciddi bir artışa neden olmuştur. C. difficile -associated hastalığı (CDAD) yüksek ölüm oranları ³ ile hayatı tehdit eden kolon iltihabıdır. Belirtiler ishal ^4'ten psödomembranöz kolit ⁵ ve genellikle ölümcül zehirli megakolon ⁶ arasında değişir.

Öldürücü suşlar Çok ilaca dirençli ve nüks oranı ⁷ yüksek olduğu gibi CDAD tedavisi zordur. anı tedavisi antibiyotikler metronidazol, fidaxomicin ya da vankomisin veya repetiti olarak içeren enf tekrarlayan olgular dışkı Mikrobiyota nakli. Yeni tedavi stratejileri acilen ⁸ ihtiyaç vardır. Bazı ilerlemeler C. difficile toksin B ⁹ hedefleyen terapötik monoklonal antikor Bezlotoxumab olarak kaydedilir, son zamanlarda başarılı bir faz III klinik çalışmalarda geçti ve FDA ve EMA ile onay için açılmıştı. Ek olarak, yeni antibiyotikler klinik çalışmalarda ¹⁰ farklı aşamalarında anda denenmektedir.

yeni tedavi hedefleri belirlenmelidir etkili bir tedavi geliştirmek. (; CD2830 / Zmp1; PPEP-1 EC 3.4.24.89), C. difficile proteaz prolin-prolin endopeptidaz-1 keşfedilen bir knock-out suşunda PPEP-1 eksikliği gibi umut verici bir hedef olduğunu, C hastalık oluşturma azalır ., in vivo ¹¹ difficile. PPEP-1 de C-terminalinde iki tane C. difficile adezinleri yaran bir salgılanmış metaloproteaz ^12,13 olan ¹³ ve böylece yapışık Bacter serbestİnsan bağırsak epitelinden ia. Bu nedenle, C. difficile sesil ve hareketli fenotip arasındaki dengeyi koruyarak yer almaktadır. PPEP-1'e karşı seçici inhibitörlerinin geliştirilmesi ve onun yüzeyler üç boyutlu yapının samimi bilgi vazgeçilmez olduğunu tanır anlamak. Bir alt-tabaka peptidi ¹⁴ PPEP-1 tek başına veya karmaşık ilk kristal yapışım çözdük. PPEP-1 ilk olarak bilinen proteaz, iki prolin kalıntıları ¹⁵ ila seçimli olarak böler peptid bağlar. Bu çift bükülmüş bir şekilde alt-tabakanın bağlanır ve proteaz aktif mevki ¹⁴ kapsar S döngüsünde yer alan tortuların uzun bir alifatik-aromatik ağ aracılığıyla stabilize eder. Bu alt-tabaka bağlanma modu PPEP-1'e özgü olan ve bugüne kadar, insan proteazlar bulunamadı. Bu umut verici bir ilaç hedef haline getirir ve çok olası inhibitörlerinin hedef dışı etkileri.

Ekran seçici PPEP-1 inh geliştirmek veibitors gelecek saf ve tek dağılımlı PPEP-1 proteininin büyük bir miktarı gereklidir. Bundan başka, tespit edilmesi gerekir PPEP-1 ilk önleyicileri, ko-kristal yapıları bağlanmasının modunu belirler. Bizim ellerde PPEP-1 sürekli iç içe gelişmiş kristaller üretir. Böylece PPEP-1 tek sapması kalitede kristaller üretmek için bir optimizasyon yöntemi geliştirmişlerdir. Bu protokolde, ayrıntılı PPEP-1 ¹⁴ üretimi, saflaştırma, kristalleştirme ve Yapı çözümü tarif etmektedir. Bu salgılama sinyal dizisi, saflaştırma işareti kaldırılması ile afinite kromatografisi ve boyut çıkarma kromatografisine eksik PPEP-1 varyantın Escherichia coli hücre içi ifade kullanmak, çinko tek dalga boyu anormal dağılma vasıtasıyla bir optimizasyon ekran ve yapı belirlenmesi halinde ¹⁶ mikro-tohumlama ardından (çinko-SAD) ^17. Bu protokol, (diğer proteinlerin üretimi ve yapı tayini için uyarlanabilir, örneğin </ Em> metaloproteazlar) ile iç içe gelişmiş kristallerinin üretilmesi proteinler için, özellikle de. İstek üzerine, yapının DNA (pET28a-USES-rPPEP-1) ve difraksiyon verileri, eğitim amacıyla temin edilebilir.