在小鼠实验为细菌性肺炎的诱导和表型非侵入性和技术上非密集型方法
Summary
几种方法已在文献中的小鼠模型细菌性肺炎进行了描述。在此，我们描述了用于通过移液到口咽细菌接种物的抽吸（ 即 ，吸入）诱导肺炎的非侵入性的，廉价的，快速的方法。对于肺先天免疫应答的评估下游方法也是详细说明。
Abstract
虽然社区获得性肺炎仍然是一个重大的公共卫生问题，细菌性肺炎小鼠模型中我们底层的细胞和分子发病机制的认识，最近促进显著临床进展。 在活体小鼠模型捕捉宿主防御反应的综合生理和弹性的方式不被替代的，简化的离体方法揭示。几种方法已在文献中小鼠细菌肺内接种，包括雾化，鼻内递送，“盲”和可视化的条件下经口气管插管，和经皮气管插管进行了描述。所有的方法都具有相对的优点和局限性。这里，我们详细描述用于细菌的气管内递送，通过鼠标涉及抽吸（ 即 ，吸入）的非侵入性的，在技术上不密集的，廉价且快速的方法的同时，在全身麻醉下吸移到口咽感染接种物。这种方法可用于各种各样的无腐蚀性生物和化学制剂的肺递送，并且相对容易学习，即使对于肺程序最小先前经验的实验室。除了描述的吸入性肺炎的方法，我们也用于测定随后在体内小鼠的肺先天免疫反应，特别是提供一步一步的程序，用于量化细菌清除和感染呼吸道的细胞免疫应答的方法。这种集成和简单的肺炎评估方法允许的遗传和环境操纵在肺先天免疫效果快速和强大的评估。
Introduction
社区获得性肺炎仍然感染在美国死亡的主要原因，死亡率在过去40年，尽管在接种疫苗的改进和抗生素的战略1,2整体变化不大。尽管在公共卫生水平缺乏可察觉进展，近年来引人注目的进展已在我们的肺炎的分子和细胞发病机理的理解制成，具有许多的向前通过使用肺部感染的小鼠模型成为可能这些步骤。小鼠的遗传易处理性，鼠和人的免疫系统，和鼠靶向免疫试剂繁多，已成为商用的相似性都共同促进该领域的快速进步。
在文献中描述的细菌性肺炎的小鼠模型一般在四种情况之一的技术路线依赖于病原体接种：ⅰ）雾化; II）INTRanasal交付; III）口服交货;和iv）手术气管内注射（ 即气管切开术）3。感染的所有路线各有优缺点3。在上气道的特定，相对曝光，电位为口鼻菌群，对于全身麻醉要求的混合，递送至远端肺接种，的递送病原体大叶性肺炎分布，技术专长的要求，和程序的发病率的变异性在这些广泛地变化的方法。
常用的口服感染技术包括通过无论是“瞎子”（非可视）的方式，或直接在可视化喉气管3-5（translaryngeal）插管。这两种方法，而健壮的，需要大量的训练，还可以携带创伤的风险的上气道。在本报告中，我们描述了经口感染的一个技术上的非密集，非侵入性的，廉价且快速的方法，W特此细菌（ 肺炎在所提供的示例克雷伯 ）吸移到麻醉小鼠的口咽通过抽吸（ 即 ，吸入）递送至肺部。我们和其他人已经成功地6-9使用了吸入性肺炎的技术。这种多功能，也容易学习肺递送方法可以扩展至输送许多额外的非苛性剂到肺部，包括细胞因子和其它蛋白质，病原体相关分子（ 如脂多糖），细胞（ 即 ，继转移），和毒素（ 例如 ，博莱霉素）。除了讨论重要的技术方面的考虑，我们还描述了一个综合的，定量的方法来评估随后的宿主反应肺炎，包括细菌清除下游测量（ 即菌落形成单位[CFU]定量肺和外周器官）和白细胞堆积在领空。
Protocol
Representative Results
Discussion
细菌性肺炎小鼠模型，用基因靶向和体内生物和药物干预合作，提供了重要的见解肺宿主防御反应。伟大的进步特别是取得我们的支配中性粒细胞招募到受感染空域10,11趋化因子和粘附分子的理解。 体内肺炎模型，不同于基于细胞或替代办法，还提供了关键洞察内分泌被感染的肺和其他器官，如肝脏（急性期反应）之间发生的通信12和肾上腺（应力糖皮质激素）13…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported in part by the Intramural Research Program of the National Institutes of Health, National Institute of Environmental Health Sciences (Z01 ES102005).
Materials
| Klebsiella pneumoniae, serotype 2 | ATCC | 43816 | |
| Tryptic soy broth | Becton Dickenson | 211825 | |
| Excel Safelet IV Catheters, 18G x 1 1/4" | Claflin Medical Equipment | MEDC-031122 | |
| Hema 3 Solution 1 | Fisher | 23-122-937 | |
| Hema 3 Solution 2 | Fisher | 23-122-952 | |
| Hema 3 Fixative | Fisher | 23-122-929 | |
| 27½ gauge tuberculin syringes | Fisher | 14-826-87 | |
| Lithium heparin plasma collectors | Fisher | 2675187 | |
| L-shaped disposable spreaders | Lab Scientific | DSC | |
| 1x PBS, pH 7.4 | prepared in-house | n/a | Distilled water (5 L), NaCl (40 g), KCl (1 g), Na2HPO4 (5.75 g), KH2PO4 (1 g) |
| ACK lysis buffer | prepared in-house | n/a | NH4Cl (4.145 g), KHCO3 (0.5 g), EDTA (18.6 mg), bring up to 500 ml with distilled water and pH to 7.4 |
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