Summary

윌리스의 마우스 원을 분리하는 프로토콜

Published: October 22, 2016
doi:

Summary

We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.

Abstract

윌리스 (COW)의 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양) 또는 원은 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 광학 chiasma 및 시상 하부를 둘러싸는 순환 문합이다. 이는 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 뇌 동맥류 등 여러 질병에 관여하고있다. 자신의 예방을위한 새로운 약물 표적의 식별을 위해 이러한 질병의 기초가되는 분자 메커니즘의 연구는 동물 모델을 필요로한다. 다른 사람들이 여기에 설명 된 CoW.The 방법 임의의 마우스 계통의 소 분리에 적합하며 (유전자, 단백질 생산의 발현을 선별하기위한 상당한 잠재력을 가지고 포함하는 뇌 – 혈관의 분리를 포함하는 반면 이러한 모델 중 일부는, 형질 전환 될 수있다 번역 후 단백질 수정 secretome 분석) 마우스 cerebro-의 대형 선박에 대한 연구혈관. 또한 절연 마우스 후각 동맥 위해 개발 기관 욕 시스템을 적용하여, 생체 외 연구에 사용될 수있다.

Introduction

또한 윌리스 (소), Willisor 윌리스 다각형의 루프의 원형으로 알려진 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양은)) 먼저 그것은 시신경 chiasma 수 있습니다 시상 하부의 주위에있는 순환 문합 인 1664 년 토마스 윌리스에 의해 설명되었다 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 중앙 허브로 간주 될 수있다. 혈액 경동맥 및 척추 동맥을 통해 이러한 구성에 진입하며 내부 중간 및 후방 뇌동맥 통해 원 밖으로 흐른다. 이러한 동맥의 각각은 원호의 양측에 지점을 좌우되었다. 완전한 원을 동맥을 통신하는 기저, 포스트 소통하고, 전방 (그림 1과 그림 2). 유출 동맥 중 어느 하나에 장애가 혈류 위험함으로써 충분한 혈액이 (B)에 공급되도록 보장 경동맥 및 뇌동맥으로부터 원 입력 피 병합하여 최소화비. 이 구조는 내부 경동맥 폐색 심각한 질병에 부수적 혈류의 주요 경로로서 기능한다.

뇌 혈관 질환의 여러 유형의 소에서 자신의 기원을 가지고있다. 가장 일반적으로는 1, 2, 3이 질환으로 인한 혈관 확장에 관류 저하로 이어질 수있다. 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 내 동맥류하고, 뇌내 및 / 또는 지주막 하 출혈 궁극적 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중 또는로 변환 기껏해야 일시적 허혈성 발작. 아마도 조영술 결합 뇌 영상을 포함한 진단 절차에서의 최근 발전은 뇌 생검 없이도 가능 임상 이러한 주요 뇌 혈관 질환을 진단 만들었다. 그럼에도 불구하고, 효과적이고 특이 치료 (약물 또는 혈관)이 현재 부족과 새로운 정의 필요하다분자 표적.

인간에서 이들 질환의 예방을위한 신규 약물 표적의 식별은 동물 모델 및 소를 포함하는 뇌 – 혈관을 분리하는 방법이 필요하다. 이러한 모델은 두개 내 동맥 동맥류, CAA 또는 두개 내 동맥 경화증의 동물 모델에서 큰 혈관의 벽에 발생하는 염증을 포함하는 특정 변경에의 증거와 단서를 제공해야한다. 4, 5, 6

우리는 CAA와 같은 알츠하이머 질환에서 혈관 염증의 연구 (AD) 및 관련 질병을 촉진하기 위해 마우스 암소 분리하는 방법을 설립했다. 마우스 암소를 분리하는이 방법은 질병 진행 동안 뇌 염증 유전자 발현의 평가를 위해 개발되었다. 함께 leptomeningeal 및 pial 동맥의 벽 내에서 아밀로이드 베타 침착의 검출과,이 방법은 쉽게 저지 할 만들 수내 염증성 뇌 – 혈관 벽에 유전자 발현 및 Aβ 펩타이드의 축적 사이의 가능한 관계. 지주막 하 공간에 leptomeningeal 및 pial을 포함하는 뇌의 혈관 네트워크는 윌리스의 원을 형성하는 큰 동맥의 확장입니다. 여기서 설명한 방법은 임의의 마우스 계통의 암소를 분리하는 데 사용될 수 있고, 마우스 뇌 – 혈관의 대형 선박의 스크리닝 (예를 들어, 유전자 발현, 단백질 생산 및 번역 후 단백질 변형)의 모든 유형에 이용 될 수있다.

Protocol

모든 절차가 동물 실험에 대한 로컬 윤리위원회 (일드 프랑스 – 파리 -위원회 승인 4270)의 승인, 관리 및 실험 동물의 사용을위한 유럽 공동체 표준에 따라 수행 하였다. 1. 마취 펜토 바르 비탈을 치사량을 주입 성인 마우스에 복강 내 (27 게이지 바늘 및 주사기를 1ml) (1 밀리그램 / 10g 체중까지) 수술 전. 2. 선박 관류 참고 :…

Representative Results

PBS를 관류 마우스를 살해하고 프로토콜의 3.2 절에 설명 된대로 소는 격리됩니다. 해부가 제대로 수행 될 때, 소는 한 조각에서 와야 인해 혈관에 잔류 혈액의 부재로 약간 투명해야한다. 그림 2 : 분리 후 마우스 소. 10 cm 페트리 접시에서 암소…

Discussion

우리는 윌리스의 원의 분리 여기를 재현 프로토콜을 설명합니다. 소를 포함하는 가장 일반적인 뇌 혈관 질환은 동맥 혈관의 벽에 영향을 모두 CAA 관련 vasculopathies, 두개 내 동맥 경화 및 두개 내 동맥류이다. 위험 인자로 잘 알려져 있지만, 이들 뇌 질환의 분자 기전은 잘 알려져 있지 남아 그 발생을 예측하기위한 특정한 생물학적 마커는 부족하다. 분자 변화를 거시적 인 관찰을 연결하는 형질 전…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 파리 VI 대학과 피에르 파브르 혁신 기금에 의해 지원되었다.

Materials

Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Sigma-Aldrich D8537
Dumont #55 Forceps Fine Science Tools 11295-51
Hardened Fine Iris Scissors  Fine Science Tools 14090-11
Scissors – Straight / Sharp / Sharp   16.5 cm Fine Science Tools 14002-16
Dumont #7b Forceps  Fine Science Tools 11270-20
Stereoscopic Zoom Microscope Nikon SMZ745T
CellBIND Surface 60mm Culture Dish Corning #3295
Peristaltic Pump – MINIPULS 3 Gilson M312
Pentobarbital Sodique Ceva Santé Animale FR/V/2770465 3/1992

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Cite This Article
Hur, J. C., Blaise, R., Limon, I. Protocol for Isolating the Mouse Circle of Willis. J. Vis. Exp. (116), e54352, doi:10.3791/54352 (2016).

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