L'isolement et la caractérisation par cytométrie en flux de l'intestin grêle Lymphocytes murine

La tâche principale de l'intestin grêle est souvent considérée comme la digestion et l' absorption des nutriments ^1. Bien que cette fonction métabolique est évidemment essentiel, de l'intestin grêle a un rôle tout aussi important dans la protection de l'hôte à partir du barrage continu des antigènes environnementaux trouvés dans la lumière ^2. Le tractus intestinal sépare le monde extérieur (par exemple., Antigènes luminal) à partir de l'environnement interne de l'hôte avec une couche épithéliale qui est seulement une couche cellulaire unique épaisse. En tant que tel, le système immunitaire de l'intestin grêle a la formidable tâche d'équilibrer son seuil pour la réactivité, ce qui permet des antigènes étrangers provenant de l'alimentation et commensaux microbes d'entrer dans la muqueuse avec un minimum, le cas échéant, la réponse immunitaire lors du montage d'une réponse robuste contre les agents pathogènes envahisseurs et d'autres antigènes "nuisibles". Réponses immunitaires excessives ou inappropriées à ces antigènes peuvent conduire à une maladie pathologique (par exemple., Inflammamaladie tory de l' intestin, diabète de type I, la sclérose en plaques) et doit être évitée ^3-6.

Dans l' ensemble, le tractus gastro – intestinal est considéré comme représentant le plus grand organe immunitaire dans le corps, contenant plus de 70% de toutes les cellules sécrétrices d'anticorps ^7. Le système immunitaire de l' intestin grêle est composé de 3 compartiments principaux – la lamina propria (LP), la couche intraépithéliale, et les plaques de Peyer (PP) – que chacun contient un groupe distinctif de lymphocytes ^2. Les lymphocytes LP (LPLs) sont principalement des cellules avec des cellules ~ 20% B TCRap ⁺ T; lymphocytes intraépithéliaux (LIE) contiennent très peu de cellules B avec plus de cellules TCRγδ ⁺ T que les cellules TCRap ⁺ T; et PPs, qui sont les organes lymphoïdes secondaires embarqués dans le petit-intestinal mur, contiennent ~ 80% de cellules B. Bien que chacune de ces régions anatomiques a des fonctions légèrement distinctes et les bases ontologiques, ils fonctionner dans ahla mode armonized pour protéger l'hôte contre les insultes pathogènes.

En outre, il est de plus en plus l' appréciation que le microbiote est un facteur déterminant pour le développement du système immunitaire intestinal, avec l' augmentation de la reconnaissance de la relation entre les microbes spécifiques apparenté et l'ontogenèse des particuliers lignées cellulaires ^8,9. En outre, étant donné que l' éducation du système immunitaire intestinal affecte les réponses immunitaires dans des sites anatomiquement éloignés (par exemple., L' arthrite, la sclérose en plaques, la pneumonie), il est devenu clair que le développement du système immunitaire intestinal est pertinent pour plus de processus de la maladie que précédemment reconnu ^{10 -12.} En tant que tel, l'intérêt pour l'évaluation quantitative du système immunitaire intestinal a étendu au-delà des interactions hôte-pathogène pour inclure désormais les interactions hôte-commensal et la pathogenèse de nombreuses maladies systémiques ainsi.

Compte tenu de la variabilité des méthodes actuelles dans leisolement des lymphocytes intestinaux, un procédé qui est optimisé pour le rendement, de la viabilité et l'uniformité tout en équilibrant le temps nécessaire est de plus en plus critique. Les protocoles qui impliquent des gradients de Percoll sont le temps et de main – d'œuvre et potentiellement plus sujettes à l' erreur humaine, conduisant à un rendement variable et la viabilité ^13. Ici, nous fournissons un protocole optimisé pour l'isolement et la caractérisation des lymphocytes de tous les compartiments 3 immunitaire de l'intestin grêle. De plus, l'intérêt croissant porté par des altérations induites par les microbes dans le système immunitaire des muqueuses, on comprend les étapes qui peuvent être utilisés pour permettre la transmission horizontale des micro-organismes entre la souris pour évaluer la façon dont ces modifications affectent quantitativement le système immunitaire intestinal.