真のIgE発現するマウスB系統細胞の検出

マウスおよびヒトの免疫グロブリン重鎖（IgH遺伝子）クラススイッチ組換え（CSR）の間に、IgH遺伝子は 、定常領域エクソン（Cμ）が削除され、下流の定常領域エクソンのいくつかのセットの一つ（Cの_H秒 ）（ 例えば、Cγで置換されているμ他のIgクラス（ 例えば IgGを、IgEの、またはIgA）の産生に対するIgMの生産からスイッチになりCε、およびCα）、。 CSRは、C _H ¹のそれぞれの組の5 '側に位置する1〜10キロバイト配列であるスイッチ（S）領域内で起こる。活性化誘導シチジンデアミナーゼ（AID）酵素は、シチジン脱アミノ化の活動を通じてCSRを開始します。

IgEはアレルギー疾患^​​2の重要なメディエーターおよびIgEが産生され、アトピー性疾患への新しい治療的アプローチへの扉を開くことが規制されている方法の理解である。マウスとヒトでは、IgEが最も厳密に調節Igアイソタイプである。 IgEのは、通常、ティムのレベル数千で検出されるエス他のIgH未満は^{3アイソタイプ}が、高度に疾患状態⁴に上昇させることができる。しかし、IgEに対するCSRが完全には理解される。B細胞のインビトロ活性化を抗CD40またはLPSのいずれかと組み合わせてIL-4を使用して、IgG1およびIgEの⁵の両方にCSRを誘導する。活性化されたB細胞は、可溶性IgEがCSR後の培養中に分泌結合し、低親和性IgE受容体FcεRIIは/ CD23 ^2,6を 、表現する。フローサイトメトリーで分析する場合、したがって、受容体結合IgEとB細胞は、内因的なIgE ^7を発現するB細胞にも同様に染色する。それは、マウスB細胞は、低親和性のIgG受容体^{FcγRIIB1（CD32）8を}発現することが知られているが、我々の経験では、IgG1へのクラススイッチの測定を妨害しないようである。培養物中のB細胞活性化後のIgE切り替えを測定する場合しかし、非特異的表面結合IgE分析を不明瞭にすることができる。一般的な染色方法では、非IgEの発現細胞は、IgEのために積極的に染色する。

^{11 –}ここで概説はCSRアッセイを実施し、マウス⁹から真のIgEを発現するB細胞を検出するために利用されている戦略である。トリプシンで活性化されたB細胞の治療は、一般的なラボの試薬は、タンパク質を消化するために、cytophylicおよび膜の両方に結合した表面IgEは削除されます。細胞質のIgEに対するその後の透過処理と染色は、このように真のIgE産生細胞を明らかにする。