Kemik İliği Makrofaj üretim kaynaklı
Summary
Makrofajlar uzun doğal ve adaptif immün yanıtları kritik bir bileşeni olarak kabul edilmiştir. Makrofajlar ve mikrop arasındaki etkileşimin, evrimsel genetik ve biyokimyasal yönleri ile ilgili bilginin son patlama makrofajlara bilimsel ilgi yenilenmiştir. Bu makalede, fare kemik iliği makrofajları ayırt etmek için bir yöntem tarif edilir.
Abstract
Makrofajlar, doğal ve adaptif immün yanıtları kritik bileşenleri ve bunlar nedeniyle güçlü mikrobisidal faaliyetlerinin yabancı işgalcilere karşı ilk savunma hattı vardır. Makrofajlar, tüm vücuda yaygın şekilde dağıtılmıştır ve lenfoid organlarda bulunurlar, karaciğer, akciğer, gastrointestinal sistem, merkezi sinir sistemi, kemik ve deri. Çünkü onların yeniden bölme içinde, bunlar, fizyolojik ve patolojik işlemler geniş bir yelpazede katılabilir. Makrofajlar microenvironmental değişiklikleri tanımak ve doku dengesini korumak için mümkün oldukça çok yönlü hücrelerdir. Çok sayıda patojenler, hayatta çoğaltmak ve enfekte insan ve hayvanları hem vücutta yayılmasına için Truva atları gibi makrofajlar kullanmak için mekanizmalar gelişmiştir. Konak-patojen etkileşimleri, evrimsel genetik ve biyokimyasal açıdan ilgi son patlama makrofajlar ilgili bilimsel ilgi yeniledi. Burada, bir tarifkonukçu-patojen etkileşimlerine okuyan hem de diğer işlemler için makrofajların sayıda sağlayacak faregiller kemik iliğinden izole makrofajlar ve yetiştirmek için prosedür.
Introduction
Makrofaj fonksiyonunun önemli bir yönü doğal ve adaptif bağışıklık rolleri olduğunu. Çünkü asal partiküller, bakteri veya parazit fagosite kapasiteleri, makrofajlar yabancı işgalcilere karşı ilk savunma hattı vardır. Bir kez içselleştirilmiş, mikroplar fagolizozomları içinde parçalanırlar. Aynı zamanda makrofajlar, T lenfositler ve diğer bağışıklık hücrelerinin için işe alım sinyalleri ve antijenlerini gönderebilirsiniz. Makrofajlar monositlerden elde edilmiştir. Monositler miyeloid kök hücrelerden kemik iliği ortaya çıkan ve makrofajlara ayırt periferik kan ve çeşitli dokulara göç ederler. Sağlıklı yetişkin fare, çeşitli organ ve dokularda (Tablo 1), 1,2 vücut boyunca dağıtılan yaklaşık 10 8 makrofajlar içerdiği tahmin edilmektedir. Makrofajlar nedeniyle mikroçevresinin 3,4 uyum kabiliyetleri büyük fenotipik ve fonksiyonel çeşitlilik gösterir. En önemli macrophage mülkiyet mikropları fagosite ve onları yok etmek için kendi kapasitesi ile tanımlanır onların mikrobisidal faaliyetidir. Fagositik yanıt mikrobiyal temas ile uyarılır kompleks sinyal ağların aktivasyonu ile tanımlanan, bu yüzden, makrofajlar çeşitli uyaranlara karşı yanıt olarak uygun gen ifadesini modüle ederler. Fagositozundan sonra, mikroplar phagolysosome denilen bir yapıda ortadan kalkar, ancak birçok patojen mikroplar makrofaj 5 mikrobisidal fonksiyonunu yıkmak için stratejiler geliştirdik. Farklı mikrobiyal türler tarafından kullanılan yıkılma mekanizmalarının çeşitlilik Fagositik sürecinin 6 karmaşıklığı ve phagolysosome biyogeneze bir kanıtıdır. Bulaşıcı hastalıklar, başlıca insan sağlık sorunları, ve çok sayıda mekanizmaları ve molekülleri makrofaj antimikrobiyal faaliyetlerine katılmak. Ayrıca, mikroplar tarafından kaçırıldı vardır mikrobisidal özelliklerinin hedefleri hala bilinmiyor, bu nedenle, bir e varmakrofajlar ile ilgili bilimsel dikkatini yeniledi konak-patojen etkileşimleri, evrimsel genetik ve biyokimyasal açıdan ilgi xplosion. Şu anda, bu alanda araştırma çoğunluğu fagositik aktivitesi, sitokin üretimi ve oksidatif patlama düzenlenmesinde birincil makrofaj farklılık makrofajlar hücre çizgileri, yapılır. Buna ek olarak, mikroskopi için daha az uygundur. Etkileşim makrofajlar-patojenleri araştırmak için daha fazla fizyolojik özellikler sergileyen bu gibi Kemik İliği kökenli makrofajlar (BMDMs) birincil makrofajlar, kullanımı tavsiye edilir. Bu makrofajlar transgenik farelerden izole edilmiş ve doğrudan doğruya, örneğin lentiviral transfeksiyonu gibi yeni teknolojilerin durumu ile olabilir çünkü Ayrıca, bu, genetik olarak modifiye edilmiş BMDMs üzerinde çalışmak mümkündür, bunların gen ekspresyon profili gen aşırı ifadesi veya RNA girişim ile değiştirilebilir. Burada, biz fare kemik m ayırt etmek için bir prosedür açıklanmaktadırfonksiyonel gibi Proteomikte 7, transkriptomik 8 gibi analizler çeşitli için 7 gün içinde makrofajlar çok sayıda sağlayacaktır makrofajlar içine ok, içi insan ticareti 9, dinamik çalışmaları 10, genetik ekranlar (RNAi) ve 11 tarama ilaç çalışmaları.
Protocol
Representative Results
Discussion
Burada tarif edilen protokol BMDMs çok sayıda üretilmesi için bir yöntem göstermektedir. BMDM birincil hücreler ve olgunlaşmamış makrofaj hücre hatları, aksine, olgun vardır, çünkü biyolojik fonksiyonunu ve monositler ayırt makrofajların özelliklerine sahiptir. BMDMs genetik tarama (RNAi), ilaç tarama, fonksiyonel çalışmalar, konak-patojen etkileşimi çalışmaları ve soruşturma diğer birçok alanda kullanılabilir.
Burada sunulan işlem çok basittir ve herhangi b…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma CNRS (RESİMLER EG 2012-2014) tarafından ve Regione Campania (LR n.5, Giovanna Mottola 2002/03/28) bir hibe ile desteklenmiştir. Filippo Conti Bilimsel İşbirliği Vakfı'' Infectiopole Sud bir üyesidir.'' Nicola Boucherit Araştırma ve Teknoloji Bakanlığı Fransız bir adam olduğunu. Finansman kaynakları çalışma tasarımı, veri toplama, veri analizi, yayınlamak kararı, ya da yazının hazırlanmasında hiçbir rolü vardı.
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| DMEM | Gibco Life Technologies | 21969-035 | |
| Fetal Calf Serum | Gibco Life Technologies | 10270 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15070 | |
| Glutamine | Gibco Life Technologies | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Red Blood Cell Lysis buffer | Sigma | R7757 | |
| Cell strainer 70 μm Nylon | BD Falcon | 352350 | |
| Cell strainer 40 μm Nylon | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml tubes | any supplier | n/a | |
| 15 ml tubes | any supplier | n/a | |
| Petri dishes (100/20 mm) | any supplier | n/a | culture treated |
| Petri dishes (35/10 mm) | any supplier | n/a |
References
- Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
- Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80. Development. 112, 517-526 (1991).
- Haas, A. The phagosome: compartment with a license to kill. Traffic. 8, 311-330 (2007).
- Underhill, D. M., Ozinsky, A. Phagocytosis of microbes: complexity in action. Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).
- Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications. Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).
- Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. Macrophage polarization in bacterial infections. J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).
- Barry, A. O., et al. Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes. Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).
- Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. The uniformity of phagosome maturation in macrophages. J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).
- Sundaramurthy, V., et al. Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing. Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).
- Boltz-Nitulescu, G., et al. Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant. J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).
