نخاع العظام المستمدة من بلعم الإنتاج
Summary
منذ فترة طويلة معترف بها الضامة بوصفها عنصرا حيويا من الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية. الانفجار الأخير من المعرفة المتعلقة بالجوانب التطورية والجينية والبيوكيميائية والتفاعل بين الميكروبات الضامة وجددت الاهتمام العلمي لالضامة. توضح هذه المقالة طريقة للتمييز الضامة الماوس من نخاع العظام.
Abstract
الضامة هي عناصر حاسمة من الاستجابات المناعية الفطرية والتكيفية، وأنها هي خط الدفاع الأول ضد الغزاة الأجانب بسبب أنشطة ميكروبات قوية بهم. وتوزع على نطاق واسع في جميع أنحاء الضامة في الجسم وموجودة في الأجهزة اللمفاوية والكبد والرئتين والجهاز الهضمي والجهاز العصبي المركزي، والعظام، والجلد. بسبب إعادة تقسيم، فإنها تشارك في مجموعة واسعة من العمليات الفسيولوجية والمرضية. الضامة هي خلايا تنوعا للغاية التي هي قادرة على الاعتراف التعديلات microenvironmental والحفاظ على توازن الأنسجة. وقد تطورت العديد من مسببات الأمراض آليات لاستخدام الضامة كما أحصنة طروادة من أجل البقاء، في تكرار، وتصيب كل من البشر والحيوانات وتنتشر في جميع أنحاء الجسم. الانفجار الأخير من الاهتمام في الجوانب التطورية والجينية والبيوكيميائية والتفاعلات المضيف الممرض جددت الاهتمام العلمي فيما يتعلق الضامة. هنا، نحن تصفالإجراء لعزل وزراعة نخاع العظم الضامة من الفئران من شأنها أن توفر أعداد كبيرة من الضامة لدراسة التفاعلات المضيف الممرض وكذلك العمليات الأخرى.
Introduction
وهناك جانب كبير من وظيفة البلاعم هو دورها في المناعة الفطرية والتكيفية. بسبب قدرتها على يبلعم الجسيمات الخاملة، والبكتيريا أو الطفيليات، الضامة هي خط الدفاع الأول ضد الغزاة الأجانب. مرة واحدة المنضوية، وتدهورت الميكروبات داخل phagolysosomes. الضامة أيضا إرسال إشارات لتجنيد ومستضدات موجودة على الخلايا المناعية الأخرى مثل الخلايا اللمفية تي. وتستمد من وحيدات الضامة. حيدات تنشأ في نخاع العظم من الخلايا الجذعية النخاعي والهجرة إلى الدم الطرفية والأنسجة المختلفة حيث تفرق في الضامة. يقدر أن الفأر البالغين الأصحاء يحتوي على حوالي 10 8 الضامة التي يتم توزيعها في جميع أنحاء الجسم في مختلف الأجهزة والأنسجة (الجدول 1) 1،2. عرض الضامة المظهري كبيرة والتنوع الوظيفي بسبب قدرتها على التكيف مع 3،4 المكروية بهم. وmacrop أهمالملكية الحاج هو النشاط ميكروبات، والتي تم تعريفها بواسطة قدرتها على يبلعم الميكروبات وتدميرها. يتم تعريف استجابة أكلة من خلال تفعيل الشبكات الإشارات المعقدة التي تحفزها الاتصال الميكروبية، وبالتالي، الضامة تعدل التعبير الجيني بشكل مناسب في استجابة للمؤثرات متنوعة. بعد البلعمة، يتم القضاء على الميكروبات في بنية تسمى يحلول يبلوعي، ومع ذلك، وضعت العديد من الميكروبات المسببة للأمراض استراتيجيات لتخريب وظيفة ميكروبات الضامة 5. تنوع آليات التخريب التي يتم استخدامها من قبل الأنواع الميكروبية المختلفة هو دليل على تعقيد عملية البلعمة 6 و يحلول يبلوعي نشوء حيوي. الأمراض المعدية هي المشاكل الرئيسية صحة الإنسان، والعديد من الآليات والجزيئات المشاركة في الأنشطة المضادة للميكروبات البلاعم. وعلاوة على ذلك، فإن الأهداف من الخصائص ميكروبات التي يتم اختطافها من قبل الميكروبات لا تزال مجهولة، وبالتالي، هناك هxplosion من الاهتمام في الجوانب التطورية والجينية والبيوكيميائية والتفاعلات المضيف الممرض الذي تجدد الاهتمام العلمي فيما يتعلق الضامة. حاليا، يتم الغالبية العظمى من البحوث في هذا المجال على خطوط الخلايا الضامة، والتي تختلف من الضامة الأساسي في النشاط أكلة، وإنتاج السيتوكينات وتنظيم انفجار التأكسدي. بالإضافة إلى ذلك، فهي أقل ملاءمة للفحص المجهري. للتحقيق في التفاعل الضامة، مسببات الأمراض فمن المستحسن استخدام الضامة الأولية، مثل نخاع العظم الضامة المشتقة (BMDMs)، والتي تظهر المزيد من الميزات الفسيولوجية. وعلاوة على ذلك، فمن الممكن أن يعمل على BMDMs المعدلة وراثيا، وذلك لأن هذه الضامة قد تكون معزولة مباشرة من الفئران المعدلة وراثيا و، مع توافر تقنيات جديدة مثل ترنسفكأيشن lentiviral، ملفهم الشخصي التعبير الجيني يمكن تعديلها من قبل من overexpression الجينات أو تدخل الحمض النووي الريبي. هنا، نحن تصف الإجراء لتمييز العظام الفئران مسهم في الضامة التي من شأنها توفير أعداد كبيرة من الضامة في 7 أيام وظيفية لمختلف التحاليل مثل البروتينات 7، 8 transcriptomics، يدرس الاتجار داخل الخلايا 9، ودراسات ديناميكية 10، وشاشات جينية (رني) وفحص المخدرات 11.
Protocol
Representative Results
Discussion
بروتوكول الموصوفة هنا تفاصيل طريقة لانتاج أعداد كبيرة من BMDMs. BMDM هي الخلايا الأولية ولها وظيفة بيولوجية وخصائص متباينة من الضامة وحيدات لأن هناك نضجا، على النقيض من خطوط الخلايا بلعم، والتي هي غير ناضجة. BMDMs يمكن استخدامها لفحص الجيني (رني)، وفحص المخدرات، والدراسات ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل CNRS (PICS 2012-2014 لEG) وعن طريق منحة من REGIONE كامبانيا (LR N.5، 2002/03/28 إلى جيوفانا موتولا). فيليبو كونتي هو زميل في مؤسسة التعاون'' Infectiopole سود العلمي.'' نيكولا Boucherit هو زميل وزارة الفرنسي للأبحاث والتكنولوجيا. وكانت مصادر التمويل أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات وتحليل البيانات، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| DMEM | Gibco Life Technologies | 21969-035 | |
| Fetal Calf Serum | Gibco Life Technologies | 10270 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15070 | |
| Glutamine | Gibco Life Technologies | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Red Blood Cell Lysis buffer | Sigma | R7757 | |
| Cell strainer 70 μm Nylon | BD Falcon | 352350 | |
| Cell strainer 40 μm Nylon | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml tubes | any supplier | n/a | |
| 15 ml tubes | any supplier | n/a | |
| Petri dishes (100/20 mm) | any supplier | n/a | culture treated |
| Petri dishes (35/10 mm) | any supplier | n/a |
References
- Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
- Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80. Development. 112, 517-526 (1991).
- Haas, A. The phagosome: compartment with a license to kill. Traffic. 8, 311-330 (2007).
- Underhill, D. M., Ozinsky, A. Phagocytosis of microbes: complexity in action. Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).
- Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications. Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).
- Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. Macrophage polarization in bacterial infections. J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).
- Barry, A. O., et al. Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes. Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).
- Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. The uniformity of phagosome maturation in macrophages. J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).
- Sundaramurthy, V., et al. Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing. Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).
- Boltz-Nitulescu, G., et al. Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant. J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).
