쥐과 잇몸 세포의 분리, 처리 및 분석
Summary
이 연구는 단일 셀 문화를 생산하기 위해 마우스 구강의 잇몸 조직을 분리하고 처리 할 수있는 효율적인 방법을 설명합니다. 그 결과 세포는 더욱 유동 세포 계측법 분석 및 분자 연구에 사용할 수 있습니다.
Abstract
우리는 정확하게 분리 및 유동 세포 계측법 및 분자 연구를위한 쥐 치은 조직을 처리하는 기술을 개발했습니다. 치은이 치주 질환을 일으킬 수 있습니다 구강 바이오 필름에 대한 숙주 면역 반응에 관여하기 때문에 면역 메커니즘을 연구하는 독특하고 중요한 조직이다. 또한 치조골 조직에 치은의 근접도 염증 상태에서 뼈의 리모델링을 공부 가능하게합니다. 우리의 방법은 우리가 이전에 1을 보여 같은 랑게르한스 세포와 T 조절 세포로도 희귀 한 세포 집단의 분석을 허용 면역 세포의 다량을 얻을 수 있습니다. 치주 질환시 치조골의 손실에 관련된 지역의 면역 반응을 연구하는 고용 쥐 때문에 다양한 면역 실험 도구의 가용성 유리합니다. 그럼에도 불구하고, 그들의 작은 크기와 쥐 잇몸에 상대적으로 불편 접근으로 인해 많은 연구가 생의 검사를 피할 수의 중요한 조직. 이 작품에서 설명하는 방법은 희망 치주 질환시 경구 면역 시스템과 그 역할을 우리 과소을 증가 잇몸 분석을 용이하게 할 수 있습니다.
Introduction
잇몸은 치아의 치경부 부분을 둘러싸고있는 연부 조직과 폐포 과정 (그림 1)을 다룹니다. 치은 더 점막 상피 세포와 결합 조직 (또한 점막하 또는 고유 층라고도 함)로 분리 할 수 있습니다 저작 점막의 유형입니다. 치은 및 인접 치아의 해부학 적 구조는 박테리아가 지속적으로 로컬 면역 체계를 도전 플라크 (바이오 필름)을 상주하고 발전 할 수 있습니다. 치주 질환 2를 칭했다 조건 – 결과적으로 염증 반응은 특정 상황에서 파괴되고 잇몸에 개발하고 있습니다. 기본적으로, 플라크에 의한 치주 병변은 치은염과 치주염으로 나눌 수 있습니다. 치은염은 잇몸에 국한되는 로컬 염증 반응의 가역적 인 상태를 나타냅니다. 치주염은, 다른 한편으로는, 돌이킬 수없는 파괴적인 과정이다하는 부착 장치 (치조골, 치주인대, 백악질과 치은은 3) 파괴된다.
잇몸이 치주 질환 4시 등의 이펙터와 유도 두 사이트를 제공하기 위해 제안되었다. 인간의 연구는 치과 플라크에 대한 응답으로, 면역 효과기 세포와 분자가 동적으로 침투하거나 출발 잇몸 5-7 것을 제안했습니다. 이 활동은 치주 파괴 8,9에 중요한 역할을하는 것으로 나타났다. 인간의 조직 작업이 병적 과정에 대한 귀중한 정보를 제공하는 연구에 의해 생성 된 데이터는 중요한, 윤리적 기술 및 실험 한계를 가지고 반면. 형질 전환 생쥐를 이용한 통해 생체 개입 10 인과 실험을 허용 실험 모델의 개발. 그 결과로, 치주 질환에 관여하는 메커니즘에 대한 우리의 지식은 지난 20 년간 크게 증가했다. 그럼에도 불구하고, 치주 질환의 복잡성으로 인해,이조직의 파괴를 촉진 지역 면역 반응의 특성에 관한 지속적인 논의. 치주 질환시 치은 중앙 면역 세포의 기능에 대한 이해의 부족이있다. 그것은 질병, 잇몸의 표적 조직에서 발생하는 병적 인 염증 이벤트를 공부 때문에 필수적이다.
Protocol
Representative Results
Discussion
하나의 마우스에서 얻은 상악 치은 조직은 우리가 이전 1 설명한대로 세포와 세포 내 분자를 표현하는 T 및 B 림프구의 하위 인구뿐만 아니라, 자신의 능력을 분석하기에 충분합니다. 그럼에도 불구하고, 희소 한 세포 집단 (예를 수지상 세포에 대한) 관심이 있으며, 그것은 2-3 생쥐 수영장 조직에 권장됩니다. 참고로, 바람직하는 경우, 그것은 할 수 있습니다 다음, 구개 치은 조직 및 소비?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 AW, AHH에 젊은 연구자 (GIF 영)에 대한 독일 이스라엘 재단과 박사 I에 이스라엘 과학 AHH로 재단 (제 11분의 1,418) 및 (제 12분의 1,933)에서 교부금에 의해 지원되었다 . AHH 및 AW에 치과 의학의 히브리어 대학 Hadassah 대학에서 Cabakoff 연구 기금 기금.
Materials
| Comments (optional) | Catalogue number | Company | Name of the reagent |
| CLS-2 | Worthington Biochemical Corp. | Collagenase Type II | |
| DN25-1G | SIGMA | DNAse I | |
| E6758-100G | SIGMA | EDTA | |
| D8537 | SIGMA | Dulbecco’s PBS | |
| Heat Inactivated | 04-121-1 | Biological Industries | Fetal Bovine Serum |
| FPE-204-500 | Jet Biofil | Vacuum-Driven Filter | |
| 352052 | BD Falcon | 5 ml Polystyrene Round-Bottom Tube | |
| 93070 | SPL Lifesciences | Cell Strainer 70 μm | |
| 153066 | NUNC | Tissue Culture Dish 35×10 mm | |
| 554714 | BD | BD Cytofix/Cytoperm | |
| Clone N418 | 117305 | Biolegend | Anti-mouse CD11c antibody |
| Clone 104 | 109819 | Biolegend | Anti-mouse CD45.2 antibody |
| Clone GK1.5 | 100413 | Biolegend | Anti-mouse CD4 antibody |
| Clone 53-6.7 | 100733 | Biolegend | Anti-mouse CD8a antibody |
| Clone 17A2 | 100214 | Biolegend | Anti-mouse CD3 antibody |
| Clone G8.8 | 118219 | Biolegend | Anti-mouse CD326 (Ep-CAM) antibody |
| Clone 929F3.01 | DDX0362D | Imgenex | Anti-mouse CD207 (Langerin) antibody |
| Clone 39-10-8 | 115010 | Biolegend | Anti-mouse I-Ad (MHC-II) antobody |
| BD Biosciences | LSR II Flow Cytometer | ||
| Tree Star | FlowJo Software v 7.6.5 |
References
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