Les mitochondries associées à membranes ER (SMMA) et glycosphingolipides microdomaines enrichis (GEM): Isolement à partir de cerveau de souris

Organites intracellulaires sont des structures très dynamiques avec plus ou moins de forme et de composition, qui sont soumis à des cellules spécifiques indices intrinsèques et extrinsèques. Leurs membranes sont souvent juxtaposées à des sites de contact définies, qui deviennent des plaques tournantes pour l'échange de molécules de signalisation et des composants membranaires ^1,2,3,4. Les microdomaines membranaires inter-organites qui sont formées entre le réticulum endoplasmique (RE) et les mitochondries lors de l'ouverture de l'IP3 Ca ² sensible à canal ⁺ sont connus comme les mitochondries associé-ER membranes ou SMMA ^4,5,6. La composition en protéines / lipides et les propriétés biochimiques de ces sites de contact membranaire ont été étudiés en particulier par rapport à leur rôle dans la régulation intracellulaire de Ca ^{2 + 4,5,6.} L'ER sert le magasin principal de la concentration intracellulaire de Ca ^{2 +,} et à ce titre régit une multitude de processus cellulaires en aval de Ca ^{2 +} signalisation, y comprisuding pliage post-traductionnelle de protéine et protéine maturation7. Mitochondries, d'autre part, maintenir l'homéostasie du Ca ^{2 +,} par mise en mémoire tampon Ca ^{2 +} concentration en empêchant ainsi l'ouverture de voies de l'apoptose en aval du Ca ^{2 + 4,8} balourd. La nature dynamique des MMA rend sites idéaux pour disséquer les mécanismes de base cellulaires, y compris le Ca ^{2 +} signalisation et la réglementation des mitochondriale de Ca ^{2 +} de survie biosynthèse des lipides concentration, et le transport, le métabolisme énergétique cellulaire et ^{4,9,10,11,12.} Plusieurs protocoles ont été décrits pour la purification de ces microdomaines de tissus du foie et des cellules cultivées ^13,14.

Les méthodes de prise en compte précédemment publiées, nous avons adapté un protocole pour l'isolement des mitochondries et des MMA propres du cerveau de souris adulte. Pour cette procédure, nous avons ajouté une étape de purification supplémentaire, à savoir une extraction Triton X100, qui enables de l'isolement du glycosphingolipide enrichi microdomaine (GEM) fraction des MMA. Ces préparations GEM partager des composants de plusieurs protéines avec des radeaux lipidiques et cavéoles, dérivées de la membrane plasmique ou d'autres membranes intracellulaires, et sont proposés à fonctionner comme des lieux de rencontre pour le regroupement des protéines réceptrices et des interactions protéine-protéine ^4,15.