Ligando o risco de predação, Stress herbívoro fisiológica e decomposição da maca Usina

1. Grasshoppers de criação sob estresse e de estresse Grátis Utilizar 0,5 m 2 circular, mesocosmos fechados para evitar a emigração ou imigração de espécies animais (Figura 1). Construir mesocosmos usando 2,4 m de comprimento de 1,5 m de altura ¼ "malha cerca de alumínio como um andaime. Cubra a esgrima com 2,5 m de comprimento 1,75 m de altura seleção da janela de alumínio dobrado sobre a parte superior e inferior da cerca e grampeadas ao longo dobra. Junte-se à esgrima acaba de formar um círculo fechado e grampeado a janela de sobreposição triagem em conjunto para criar um selo. Definir os mesocosmos no solo em campo, cavando a 10 cm de profundidade por 4 cm de largura trincheira ao redor da base do mesocosom, afundar o mesocosmos em da vala e, em seguida, apertar o sod da trincheira ao redor da parte submersa do mesocosmo. uma peça do grampo circular de triagem janela para a parte superior do mesocosmo. Mesocosmos matriz em uma replicados desig emparelhado experimentalN no campo. Plot locais devem ser selecionados para coincidir com a identidade de espécies de plantas e cobertura relativa planta. Pia gaiolas 10 centímetros no chão no local trama. Usando uma rede de varredura, coleta iniciais (2 ª) ninfas de gafanhoto e armazená-las para os mesocosmos em densidades naturais de campo. Usando uma rede de varredura, a captura de indivíduos de uma caça sentar-e-espera dominante (não web tecelagem) espécies de aranhas predadoras. Cola fechou a quelíceras aranha (peças bucais utilizados para subjugar presas) com cimento de secagem rápida, para efeitos de risco dissociados da seleção própria sobrevivência favorecendo gafanhotos individuais com melhores habilidades para escapar da predação de aranha. Estocar as aranhas em densidades de campo a um mesocosmos de cada par. Este será o tratamento do stress. Mesocosmos sem aranhas será o tratamento livre de estresse. Permitir ninfas gafanhoto para desenvolver a final estágios (4 º e 5 º) estádio. Colete todos os indivíduos das gaiolas e RAndomly atribuir indivíduos de cada gaiola para um dos três grupos de ensaio seguintes: (1) validação do estado de estresse fisiológico, (2) validação da mudança de estequiometria corpo elemental, (3) a decomposição microbiana. 2. Estado de tensão validar Grasshopper Meça gafanhoto taxa metabólica padrão (SMR), como a taxa de emissão de dióxido de carbono ( ) Num fluxo através do sistema incurrent respirometria com uma taxa de fluxo de ar de 200 ml / min. Remover o vapor de água pela passagem do ar que flui através de um agente de secagem. Depois da privação de alimentos de 16 horas (a água deve estar disponível), pesar gafanhotos individuais (± 0,1 mg), e colocá-los em 50 ml transparente (9,2 cm L x 2,0 cm D) câmaras respirômetro e permitir-lhes recuperar de manipulação para, pelo menos, 10 min antes do começo das medições. Sob constante ambiente média ma tura (temperatura ± 1% variação de erro padrão) no interior da câmara respirômetro, analisar o ar respirado usando uma infra-vermelho analisador de CO 2 (por exemplo, resolução ppm Qubit S151-1). Medir a média mínima no estado estacionário durante 10 min. O analisador fornece CO fracionário 2 concentração (partes por milhão), ainda SMR deve ser relatado como uma taxa, por isso deve-se transformado as gravações como FR = i ( – ) / {1 – [1 – (1/RQ)]}, em queiles/ftp_upload/50061/50061eq3.jpg "fo: src =" / files/ftp_upload/50061/50061eq3highres.jpg "/> = concentração incurrent fracionário de CO 2; = Concentração excurrent fracionário de CO 2; FR = taxa de fluxo (ml min -1); RQ = quociente respiratório, assumido igual a 0,85 em animais herbívoros. 3. Mudança em validar Estequiometria Corpo Elemental Avaliar de carbono: azoto (C: N) conteúdo de uma amostra de gafanhotos recolhidos dos mesocosmos campo. Reduzir a variação em C: N, devido ao consumo de alimentos, eliminando recente conteúdo intestinal gafanhoto sob um microscópio de dissecação. Liofilizar o estômago vazio e do corpo durante 48 horas e, em seguida, triturar a carcaça individual e intestino de um pó homogéneo. Medida C: conteúdo de N do pó, utilizando um auto-analisador CNH. 4.A decomposição microbiana Lugar replicado pares de colares de PVC (15,4 cm-diâm., Inserido ~ 4 cm no solo), na localização do campo (Figura 3C). Remova toda a vegetação dentro deles via corte, a superfície do solo. Estes colares são usados ​​para medidas de decomposição. Além disso, estabelecer um conjunto de colares de PVC em todo o local de campo para atuar como 13 C natural abundância controles (ver abaixo), a que nem os gafanhotos nem grama maca-são adicionados. Para uma coleira em cada par adicionar duas intactas, liofilizadas carcaças de gafanhotos (gravar a biomassa adicionado) criados com o risco de predadores, como descrito acima, usando-campo gaiolas. Para o colar outro em cada par adicionar 2 intactas liofilizadas carcaças criados sem risco predador. Cubra os colares de PVC com uma tela para impedir a remoção gafanhoto por catadores de parcelas e deixe as carcaças gafanhoto decompor por 40 dias. Enquanto carcaças estão se decompondo rótulo, grama-litter com 13 C. Construir uma câmara de plexiglass claros (60 cm x 60 cm x 1,5 m), com uma entrada e uma válvula de saída (Figura 3B). Afundar uma quadrícula com 60 cm x 60 centímetros moldura de madeira com um selo de borracha revestida com silício graxa 5 cm no solo (Figura 3B). Deslizar a câmara na parte superior do caixilho de madeira, de modo que a câmara fica vedado pela borracha (Figura 3B). Ligam as entradas de câmara de cilindros de gás comprimido que contenha 99% 13 átomo de CO 2. Plantas no interior da câmara vai ser marcado com 13 C, em que as concentrações de CO 2 são mantidos a níveis ambientais (porque as concentrações de elevação altera particionamento de carbono da planta). Níveis de ambiente são mantidos por apenas pulsando CO 2 marcado por curtos períodos de tempo. Além disso, as temperaturas na câmara são controladas e as câmaras são removidas se atingir temperaturas de 5 ° C umabove ambiente. Uma semana depois de rotulagem, compare C 13 δ da erva-lixo com valores de abundância naturais coletados de uma amostra aleatória de espécies de gramíneas idênticos usando um Thermo DeltaPlus razão isotópica espectrômetro de massa (Thermo, San Jose, CA, EUA). Depois de 40 dias, adicione 10 g de ar seco marcada com 13 C grama-lixo para cada colar que haviam sido alterado com carcaças de gafanhoto. Monitorar a taxa de mineralização da erva-lixo in situ através de 75 dias por cada colar nivelamento e acompanhamento, tanto a respiração do solo e da respiração de 13 de CO 2. Isto é realizado utilizando um fluxo através de técnica de câmara onde amostras de gás a partir de cada anel são monitorizados em tempo real, durante 8 minutos de cada cavidade utilizando espectroscopia de anel-down (CRDS; Picarro Inc., Santa Clara, CA, EUA; Modelo: G1101 -i). CRDS permite que se rastrear simultaneamente tanto total como δ 13 Cde respiração do solo. Estimar a contribuição de 13 C-rotulado grama-lixo para a respiração total do solo por meio de equações de isótopos de mistura. A quantidade de erva-lixo derivado de CO 2 é calculado da seguinte forma: (. Δ 13 C respiração – δ 13 C nat.abn) C grama-lixo derivado = C total × / (δ 13 C grama-lixo – δ 13 C nat . abn), onde C total é a quantidade total de C respirado durante uma dada medição, δ 13 C respiração é a C 13 de δ respirados-C para os colares alteradas com ninhada grama rotulados, δ 13 C nat.abn. é a média δ 13 C de C respiratórios em três colares de abundância natural (ou seja, aqueles que não foram alterados com a maca), e δ 13 C grama-lixo é o C 13 δ da ninhada grama adicionado ao collars. Monitorar a temperatura ea umidade do solo em todo o experimento utilizando de mão sondas para corrigir diferenças de respiração do solo, devido a diferenças de temperatura e umidade. Embora destinado a utilização no campo, a cavidade do instrumento de espectroscopia de anel para baixo (Picarro Inc., Santa Clara, CA, EUA; Modelo: G1101-i) As leituras são sensíveis ao movimento. Portanto, deve-se construir uma estação de medição de base central para todos os lotes contendo colares de PVC, e conectar o instrumento para os colares com comprimentos de tubos de PVC.