Summary

Analyser murin développement des cellules de Schwann le long des axones en croissance

Published: November 21, 2012
doi:

Summary

Nous décrivons ici une cellule de Schwann (SC) essai de migration dans lequel SC sont en mesure de développer le long des axones s'étendent.

Abstract

Le développement des nerfs périphériques est un processus fascinant. Neurones envoient des axones innervent à des objectifs spécifiques, qui chez l'homme sont souvent de plus de 100 cm du soma du neurone. La survie neuronale au cours du développement dépend de facteurs de croissance dérivés cible, mais aussi sur le soutien des cellules de Schwann (CS). Vers l'extrémité des axones ensheath sc de la région de la soma neuronale (ou la transition de la centrale au système nerveux périphérique) de la synapse ou de la jonction neuromusculaire. Les cellules de Schwann sont des dérivés de la crête neurale et migrent le long des axones en tant que précurseurs émergents jusqu'en l'axone entier est couvert de SC. Cela montre l'importance de la migration SC pour le développement du système nerveux périphérique et souligne la nécessité d'enquêter sur ce processus. Afin d'analyser le développement SC, une configuration qui est nécessaire à côté des castes repose aussi sur le substrat physiologique de la migration, de l'axone. En raison du développement intra-utérin <em> in vivo imagerie time-lapse, cependant, n'est pas réalisable chez les vertébrés placentaires comme la souris (Mus musculus). Pour contourner cela, nous avons adapté la technique supérieure du col explant ganglion (CTB). Lors du traitement avec le facteur de croissance des nerfs (NGF) explants CTB étendre les axones, suivis par des précurseurs SC migrent le long des axones du ganglion vers la périphérie. La beauté de ce système est que le SC sont issus d'un pool de SC endogène et qu'ils migrent le long des axones leurs propres physiologiques qui se développent en même temps. Ce système est particulièrement intéressant parce que le développement SC le long des axones peuvent être analysées par imagerie time-lapse, ouvrant de nouvelles possibilités pour mieux comprendre la migration en SC.

Protocol

1. Préparation de gels de collagène Préparer le milieu de stock, contenant 455 ul MEM 10x, 112 ul de 7,5% de NaHCO 3, 50 ul glutamine et NaOH. La concentration et la quantité de NaOH dépend de la préparation de collagène de queue de rat (voir 1.2), le volume final du milieu stocks étant 1,000 pi. Préparer du collagène de queue de rat selon la Ebendal (1). Conserver la solution de collagène à 4 ° C. Une dégradation de la solution de collagène n'a pas pu …

Representative Results

La croissance axonale est facilitée à partir SCG explants par traitement avec NGF (4) (schéma de film S1 Figure 1 schéma). Ce processus est facilement visible par n'importe quel microscope inversé et peut être suivi par imagerie time-lapse (film S2). Si un scientifique est nouveau pour disséquer CTB à partir d'embryons de souris, nous recommandons fortement une validation de la technique par un simple anti-tyrosine hydroxylase (TH) immunohistochimie. TH est un marqueur c…

Discussion

Le développement du système nerveux périphérique est un processus passionnant. Lorsque le développement est terminé, les axones sont entourées par SC sur toute la longueur, ce qui peut, chez l'homme, souvent plus de 100 cm. À cette fin, le nombre exact des SC requis doit être établi au cours du développement et les SC ont aussi à se déplacer le long des axones s'étendent à la périphérie pour assurer la couverture complète des axones. Cela est vrai pour myélinisées, mais aussi pour les axones …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nous tenons à remercier Arumae Urmas pour partager un protocole de collagène et Jutta Fey et Ursula Hinz d'assistance technique excellente. En outre, nous tenons à remercier Christian F. Ackermann, Ulrike Engel et le Nikon Imaging Center à l'Université de Heidelberg et aussi Joachim Kirsch d'avoir bien voulu contribuer à la shoting vidéo. Le travail a été partiellement financé par la Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 592).

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalogue Number Comments
10x MEM Gibco 21430
Sodium Bicarbonate (7.5%) Gibco 25080
Glutamine Gibco 25030
NaOH Merck 109137
NGF Roche 1058231 R&D#556-NG-100
Neurobasal Medium Gibco 21103
B27 Supplement Gibco 17504
antibiotics Gibco 15640
d-PBS Gibco 14040
insect needles FST 26002-20
syringe needle Braun BD # 300013
8 well chamber slide Lab tek 177402

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Cite This Article
Heermann, S., Krieglstein, K. Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons. J. Vis. Exp. (69), e50016, doi:10.3791/50016 (2012).

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