Развитие optogenetics сейчас предоставляет средства для стимулирования именно генетически определено нейронов и схемы, как<em> В пробирке</em> И<em> В естественных условиях</em>. Здесь мы описываем сборку и внедрение волоконно-оптических хронических фотостимуляции мозговой ткани.
Выяснение моделей нейронных соединений был вызов для обеих клинических и фундаментальных нейронаук. Электрофизиология был золотой стандарт для анализа моделей синаптические связи, но в паре электрофизиологических записей может быть как громоздкая и экспериментально ограничения. Развитие optogenetics представила элегантный способ стимулировать нейроны и схем, как в пробирке 1 и в естественных 2,3. Воспользовавшись камерного типа удельной активности промотора ездить опсина выражение в дискретных нейронных популяций, можно стимулировать именно генетически определено нейронов подтипов в различных схем 4-6. Ну описаны методы, чтобы стимулировать нейроны, в том числе электрической стимуляции и / или фармакологических манипуляций, часто камерного типа неизбирательным, инвазивные, и может привести к повреждению окружающих тканей. Эти ограничения могут изменить нормальную синаптическую функцию и / или схемы поведения. Кроме того, благодаряк природе манипуляций, современные методы часто являются острые и терминала. Optogenetics дает возможность стимулировать нейроны в относительно безобидных образом, и в генетически целевых нейронов. Большинство исследований с участием в естественных условиях optogenetics в настоящее время используется оптическое волокно направляется через имплантированные канюли 6,7, однако, ограничения этого метода включают повреждение тканей мозга при повторных вставки оптического волокна, и потенциальные поломки волокна внутри канюли. С учетом растущей области optogenetics, более надежный метод хронической стимуляции необходимо содействовать долгосрочных исследований с минимальным повреждением тканей залога. Здесь мы предлагаем нашим модифицированный протокол в качестве видео-статьи в дополнение к методу эффективно и элегантно описано в Спарте и др. 8. Для изготовления волоконно-оптических имплантата и его постоянной фиксации на черепе анестезированных мышей, а также сборки волокнооптические муфты подключения имплантата к источнику света. Имплантат, связанные с оптическими волокнами твердотельного лазера, позволяет эффективный метод хронически photostimulate функциональных нейронных цепей с меньшим повреждением ткани 9, используя небольшие съемные, ремни. Постоянная фиксация волоконно-оптических имплантатов обеспечивает постоянный, долгосрочный в естественных условиях исследования optogenetic нейронных цепей в проснулась, поведение мышей 10 с минимальным повреждением тканей.
Optogenetics это новая мощная техника, которая позволяет беспрецедентный контроль над конкретным нейронов подтипов. Это может быть использовано для модуляции нейронных цепей с анатомическими и временной точностью, избегая при этом камерного типа неизбирательным и инвазивные эффектов эле?…
Мы хотели бы отметить, что этот метод был впервые описан Спартой и соавт., 2012 и были легко адаптированы для использования в нашей лаборатории.
Name of the Reagent or Equipment | Company | Catalogue # | Comments |
LC Ferrule Sleeve | Precision Fiber Products (PFP) | SM-CS125S | 1.25 mm ID |
FC MM Pre-Assembled Connector | PFP | MM-CON2004-2300 | 230 μm Ferrule |
Miller FOPD-LC Disc | PFP | M1-80754 | For LC ferrules |
Furcation tubing | PFP | FF9-250 | 900 μm o.d., 250 μm i.d. |
MM LC Stick Ferrule 1.25 mm | PFP | MM-FER2007C-1270 | 127 μm ID Bore |
MM LC Stick Ferrule 1.25 mm | PFP | MM-FER2007C-2300 | 230 μm ID Bore |
Heat-curable epoxy, hardener and resin | PFP | ET-353ND-16OZ | |
FC/PC and SC/PC Connector Polishing Disk | ThorLabs | D50-FC | For FC ferrules |
Digital optical power and Energy Meter | ThorLabs | PM100D | Spectrophotometer |
Polishing Pad | ThorLabs | NRS913 | 9″ x 13″ 50 Durometer |
Aluminum oxide Lapping (Polishing) Sheets: 0.3, 1, 3, 5 μm grits | ThorLabs | LFG03P, LFG1P, LFG3P, LFG5P | |
Standard Hard Cladding Multimode Fiber | ThorLabs | BFL37-200 | Low OH, 200 μm Core, 0.37 NA |
Fiber Stripping Tool | ThorLabs | T10S13 | Clad/Coat: 200 μm / 300 μm |
SILICA/SILICA Optical Fiber | Polymicro Technologies | FVP100110125 | High -OH, UV Enhanced, 0.22 NA |
1×1 Fiberoptic Rotary Joint | doric lenses | FRJ_FC-FC | |
Mono Fiberoptic Patchcord | doric lenses | MFP_200/230/900-0.37_2m_FC-FC | |
Heat shrink tubing, 1/8 inch | Allied Electronics | 689-0267 | |
Heat gun | Allied Electronics | 972-6966 | 250 W; 750-800 °F |
Cotton tipped applicators | Puritan Medical Products Company | 806-WC | |
VetBond tissue adhesive | Fischer Scientific | 19-027136 | |
Flash denture base acrylic | Yates Motloid | ColdPourPowder+Liq | |
BONN Miniature Iris Scissors | Integra Miltex | 18-1392 | 3-1/2″(8.9cm), straight, 15 mm blades |
Johns Hopkins Bulldog Clamp | Integra Miltex | 7-290 | 1-1/2″(3.8 cm), curved |
MEGA-Torque Electric Lab Motor | Vector | EL-S | |
Panther Burs-Ball #1 | Clarkson Laboratory | 77.1006 | |
Violet Blue Laser System | CrystaLaser | CK473-050-O | Wavelength: 473 nm |
Laser Power Supply | CrystaLaser | CL-2005 | |
Dumont #2 Laminectomy Forceps | Fine Science Tools | 11223-20 | |
Probe | Fine Science Tools | 10140-02 | |
5″Straight Hemostat | Excelta | 35-PH | |
Vise with weighted base | Altex Electronics | PAN381 |