Summary

Волоконно-оптические имплантации для хронической стимуляции Optogenetic ткани головного мозга

Published: October 29, 2012
doi:

Summary

Развитие optogenetics сейчас предоставляет средства для стимулирования именно генетически определено нейронов и схемы, как<em> В пробирке</em> И<em> В естественных условиях</em>. Здесь мы описываем сборку и внедрение волоконно-оптических хронических фотостимуляции мозговой ткани.

Abstract

Выяснение моделей нейронных соединений был вызов для обеих клинических и фундаментальных нейронаук. Электрофизиология был золотой стандарт для анализа моделей синаптические связи, но в паре электрофизиологических записей может быть как громоздкая и экспериментально ограничения. Развитие optogenetics представила элегантный способ стимулировать нейроны и схем, как в пробирке 1 и в естественных 2,3. Воспользовавшись камерного типа удельной активности промотора ездить опсина выражение в дискретных нейронных популяций, можно стимулировать именно генетически определено нейронов подтипов в различных схем 4-6. Ну описаны методы, чтобы стимулировать нейроны, в том числе электрической стимуляции и / или фармакологических манипуляций, часто камерного типа неизбирательным, инвазивные, и может привести к повреждению окружающих тканей. Эти ограничения могут изменить нормальную синаптическую функцию и / или схемы поведения. Кроме того, благодаряк природе манипуляций, современные методы часто являются острые и терминала. Optogenetics дает возможность стимулировать нейроны в относительно безобидных образом, и в генетически целевых нейронов. Большинство исследований с участием в естественных условиях optogenetics в настоящее время используется оптическое волокно направляется через имплантированные канюли 6,7, однако, ограничения этого метода включают повреждение тканей мозга при повторных вставки оптического волокна, и потенциальные поломки волокна внутри канюли. С учетом растущей области optogenetics, более надежный метод хронической стимуляции необходимо содействовать долгосрочных исследований с минимальным повреждением тканей залога. Здесь мы предлагаем нашим модифицированный протокол в качестве видео-статьи в дополнение к методу эффективно и элегантно описано в Спарте и др. 8. Для изготовления волоконно-оптических имплантата и его постоянной фиксации на черепе анестезированных мышей, а также сборки волокнооптические муфты подключения имплантата к источнику света. Имплантат, связанные с оптическими волокнами твердотельного лазера, позволяет эффективный метод хронически photostimulate функциональных нейронных цепей с меньшим повреждением ткани 9, используя небольшие съемные, ремни. Постоянная фиксация волоконно-оптических имплантатов обеспечивает постоянный, долгосрочный в естественных условиях исследования optogenetic нейронных цепей в проснулась, поведение мышей 10 с минимальным повреждением тканей.

Protocol

* Все материалы вместе с соответствующими производителей и / или поставщиков перечислены ниже протокол. 1. Собрание имплантатов Приготовить смесь из тепловым отверждением волоконно-оптических эпоксидных добавлением 100 мг отвердителя на 1 г смолы. Отмерьте и о…

Discussion

Optogenetics это новая мощная техника, которая позволяет беспрецедентный контроль над конкретным нейронов подтипов. Это может быть использовано для модуляции нейронных цепей с анатомическими и временной точностью, избегая при этом камерного типа неизбирательным и инвазивные эффектов эле?…

Acknowledgements

Мы хотели бы отметить, что этот метод был впервые описан Спартой и соавт., 2012 и были легко адаптированы для использования в нашей лаборатории.

Materials

Name of the Reagent or Equipment Company Catalogue # Comments
LC Ferrule Sleeve Precision Fiber Products (PFP) SM-CS125S 1.25 mm ID
FC MM Pre-Assembled Connector PFP MM-CON2004-2300 230 μm Ferrule
Miller FOPD-LC Disc PFP M1-80754 For LC ferrules
Furcation tubing PFP FF9-250 900 μm o.d., 250 μm i.d.
MM LC Stick Ferrule 1.25 mm PFP MM-FER2007C-1270 127 μm ID Bore
MM LC Stick Ferrule 1.25 mm PFP MM-FER2007C-2300 230 μm ID Bore
Heat-curable epoxy, hardener and resin PFP ET-353ND-16OZ  
FC/PC and SC/PC Connector Polishing Disk ThorLabs D50-FC For FC ferrules
Digital optical power and Energy Meter ThorLabs PM100D Spectrophotometer
Polishing Pad ThorLabs NRS913 9″ x 13″ 50 Durometer
Aluminum oxide Lapping (Polishing) Sheets: 0.3, 1, 3, 5 μm grits ThorLabs LFG03P, LFG1P, LFG3P, LFG5P  
Standard Hard Cladding Multimode Fiber ThorLabs BFL37-200 Low OH, 200 μm Core, 0.37 NA
Fiber Stripping Tool ThorLabs T10S13 Clad/Coat: 200 μm / 300 μm
SILICA/SILICA Optical Fiber Polymicro Technologies FVP100110125 High -OH, UV Enhanced, 0.22 NA
1×1 Fiberoptic Rotary Joint doric lenses FRJ_FC-FC  
Mono Fiberoptic Patchcord doric lenses MFP_200/230/900-0.37_2m_FC-FC  
Heat shrink tubing, 1/8 inch Allied Electronics 689-0267  
Heat gun Allied Electronics 972-6966 250 W; 750-800 °F
Cotton tipped applicators Puritan Medical Products Company 806-WC  
VetBond tissue adhesive Fischer Scientific 19-027136  
Flash denture base acrylic Yates Motloid ColdPourPowder+Liq  
BONN Miniature Iris Scissors Integra Miltex 18-1392 3-1/2″(8.9cm), straight, 15 mm blades
Johns Hopkins Bulldog Clamp Integra Miltex 7-290 1-1/2″(3.8 cm), curved
MEGA-Torque Electric Lab Motor Vector EL-S  
Panther Burs-Ball #1 Clarkson Laboratory 77.1006  
Violet Blue Laser System CrystaLaser CK473-050-O Wavelength: 473 nm
Laser Power Supply CrystaLaser CL-2005  
Dumont #2 Laminectomy Forceps Fine Science Tools 11223-20  
Probe Fine Science Tools 10140-02  
5″Straight Hemostat Excelta 35-PH  
Vise with weighted base Altex Electronics PAN381  

References

  1. Boyden, E. S., Zhang, F., Bamberg, E., Nagel, G., Deisseroth, K. Millisecond-timescale, genetically targeted optical control of neuronal activity. Nat Neurosci. 8, 1263-1268 (2005).
  2. Arenkiel, B. R. In Vivo Light-Induced Activation of Neural Circuitry in Trangenic Mice Expressing Channelrhodopsin-2. Neuron. 54, 205-218 (2007).
  3. Gradinaru, V. Molecular and cellular approaches for diversifying and extending optogenetics. Cell. 141, 165-16 (2010).
  4. Luo, L., Callaway, E. M., Svoboda, K. Genetic dissection of neural circuits. Neuron. 57, 634-660 (2008).
  5. Arenkiel, B. R., Ehlers, M. D. Molecular genetic and imaging technologies for circuit based neuroanatomy. Nature. 461, 900-907 (2009).
  6. Zhang, F. Optogenetic interrogation of neural circuits: technology for probing mammalian brain structures. Nat. Protoc. 5, 439-456 (2010).
  7. Adamantidis, A. R., Zhang, F., Aravanis, A. M., Deisseroth, K., de Lecea, L. Neural substrates of awakening probed with optogenetic control of hypocretin neurons. Nature. 450, 420-424 (2007).
  8. Sparta, D. R. Construction of implantable optical fibers for long-term optogenetic manipulation of neural circuits. Nature Protocols. 7, 12-23 (2012).
  9. Stuber, G. D. Excitatory transmission from the amygdala to nucleus accumbens facilitates reward seeking. Nature. 475, 377-380 (2011).
  10. Liu, X. Optogenetic stimulation of a hippocampal engram activates fear memory recall. Nature. 484, 381-385 (2012).

Play Video

Cite This Article
Ung, K., Arenkiel, B. R. Fiber-optic Implantation for Chronic Optogenetic Stimulation of Brain Tissue. J. Vis. Exp. (68), e50004, doi:10.3791/50004 (2012).

View Video