Preparazione e inattivazione dei patogeni di Double Dose Buffy prodotti piastrinici cappotto con il sistema INTERCEPT Blood System

1. Raccolta di sangue intero Raccogliere il sangue intero da donatori volontari in 450 ml di top / bottom collezione imposta secondo le direttive locali di raccolta del sangue. Il sangue intero è memorizzato per un minimo di 2 ore su una piastra di raffreddamento prima della centrifugazione e separazione. 2. Buffy Coat Preparazione Centrifugare il sangue intero con un giro difficile separare il sangue in tre livelli: globuli rossi, buffy coat e plasma. Parametri utilizzati sono stati centrifuga 4880 RCF per 11 min a 22 ± 2 ° C. Utilizzare un separatore automatico sangue per esprimere il plasma nella sacca satellite superiore ei globuli rossi (RBC) nel sacco satellite fondo, lasciando il buffy coat nel contenitore di raccolta. Medio obiettivo range di volume e di ematocrito per buffy coats sono circa 48 ml e 37%, rispettivamente. Gli buffy coats vengono memorizzati durante la notte su un agitatore delle piastrine a 22 ± 2 ° C. <p class = "jove_title"> 3. Buffy Coat Pooling Sterile connect 7 buffy cappotti e 300 ml di soluzione additiva SSP + piastrine (PAS) in una configurazione treno con linee parallele di ridurre la lunghezza del convoglio e il PAS dovrebbe essere in cima al treno. Bloccare la linea di demarcazione tra la PAS e la prima mano buffy. Aprire i collegamenti tra le unità sterili ricoprono le buffy e consentire cappotti buffy per scaricare nel contenitore ultima. Aprire la saldatura e il morsetto tra la PAS e la prima mano buffy. Consentire un terzo della soluzione additiva per sciacquare attraverso ciascuna delle buffy coat contenitori in sequenza. Ripetere 2 più volte ogni volta utilizzando la metà del restante PAS. Il volume medio di buffy coat piscina dovrebbe essere di circa 600 ml. Se il volume di destinazione e di ematocrito dei singoli strati buffy sono soddisfatte, il rapporto di plasma saranno 32 – 47%, come richiesto per il trattamento INTERCEPT inattivazione dei patogeni più avanti nel processo. Eliminare il vuoto SSP + e buffycappotto contenitori. Per ottimizzare il recupero delle piastrine, tenere la piscina sulla agitatore per 1 ora prima della centrifugazione. Sterile collegare un contenitore di stoccaggio delle piastrine con filtro integrato leucoriduzione alla piscina buffy coat. Effettuare un "giro soft" del pool di buffy coat per separare i globuli rossi da piastrine in sospensione (462 RCF per 9 min, 20 sec). Esprimono la sospensione di piastrine mediante un separatore automatico sangue attraverso il filtro leucoriduzione nel serbatoio di stoccaggio piastrinica. I requisiti di elaborazione precedentemente descritti modo che la sospensione di piastrine soddisfa le specifiche di elaborazione intercetta su 300 ml – 420 ml di volume, 2,5-7,0 x 10 11 dosi piastrinica, e ≤ 4 x 10 6 cellule / ml rossi. 4. INTERCETTARE Trattamento Eseguire il trattamento INTERCEPT prima della fine del 1 ° giorno dopo il prelievo (giorno 0 è il giorno della raccolta). Scartare il Set INTERCEPT Processingcon contenitori di stoccaggio doppio dal sacchetto di plastica trasparente. Collegare il contenitore sterile piastrinica sospensione al tubo del contenitore amotosalen sul set INTERCEPT elaborazione. Etichettare l'intercetta di elaborazione contenitori insieme con l'identificazione del prodotto appropriato sangue dopo requisiti di legge locali. Appendere le piastrine e rompere la prima cannula fondo sul contenitore amotosalen, permettendo alla soluzione amotosalen di fluire nel contenitore di illuminazione. Rompere la cannula superiore sul contenitore amotosalen consentendo alle piastrine di fluire attraverso il contenitore amotosalen nel contenitore illuminazione. Mescolare delicatamente la miscela piastrinica e amotosalen ed esprimere l'aria dal contenitore illuminazione nel contenitore amotosalen. Una piccola quantità della miscela piastrinica alla tubazione di riempimento di circa 4 cm del tubo. Questo assicura piastrine sia il tubo e contenitore illuminazione subiscono il patogeno inactivatiil trattamento. Sigillare il tubo tra il contenitore e il contenitore amotosalen illuminazione. Lasciare non più di circa 4 cm di tubo che si estendono dal contenitore illuminazione. Rimuovere e gettare il piastrine vuoto e contenitori amotosalen e chiudere le fascette sui sacchetti di campionamento. Posizionare il gruppo di elaborazione nel illuminatore con il contenitore illuminazione nel vano grande sulla sinistra e l'organizzatore nel vano inferiore sul lato destro. Utilizzare il dispositivo portatile di codici a barre per inserire l'ID donazione, codice prodotto, e impostare il numero di elaborazione lotto nella illuminatore. Chiudere il coperchio di metallo e quando richiesto sull'interfaccia grafica illuminatore, chiudere il cassetto. Premere il tasto "Start" per avviare l'Illuminazione. Dopo l'illuminazione, rimuovere il set di trasformazione dal illuminatore. L'illuminatore stampa automaticamente il rapporto di trattamento per l'unità trattata piastrinica (s). Scartare i contenitori da parte dell'organizzatore e appendere la platelets e set di trasformazione, rompere la cannula all'uscita del contenitore illuminazione, e consentire le piastrine di fluire nel dispositivo di adsorbimento composto (CAD) contenitore. Facendo attenzione a non piegare il wafer CAD, esprimono l'aria dal contenitore CAD nel contenitore illuminazione usando un estrattore di plasma. Sigillare il tubo vicino alla porta di entrata del contenitore CAD. Rimuovere e gettare il contenitore vuoto illuminazione. Porre il recipiente CAD con i contenitori di memorizzazione collegati su un agitatore piastrinica per almeno 6 ore, ma non più di 16 ore. Questo comporta la riduzione di amotosalen residua ad una concentrazione di ≤ 2 pM. Dopo il trattamento CAD, rimuovere le unità di piastrine dal agitatore. Appendere le piastrine. Rompere la cannula e consentire piastrine di fluire in contenitori di conservazione. Esprimere l'aria dai contenitori di stoccaggio nel contenitore CAD. Lasciate che il piastrinica residua riflusso concentrato nei contenitori storagegravità. Sigillare il tubo sopra il raccordo a Y e rimuovere il contenitore vuoto CAD. Ridistribuire il volume tra i contenitori di stoccaggio in base alle esigenze. Le regolazioni del volume sono fatte da pesatura dei contenitori di stoccaggio. Sigillare la tubazione di ogni contenitore pochi centimetri sopra l'entrata del contenitore di stoccaggio, che facilita l'ottenimento di un campione sterile dal prodotto finale come descritto al punto 5.2. 5. Prodotto di campionamento Per il controllo di qualità di routine, i contenitori di stoccaggio finali si possono degustare una volta usando il sacchetto di campionamento sui contenitori di stoccaggio. Per fare ciò, assicurarsi che l'unità delle piastrine è ben amalgamato, quindi aprire il morsetto per la sacca e spremere più volte. Sigillare il tubo dopo che il sacchetto è pieno di piastrine. Trasferire il campione di piastrine in una provetta di laboratorio adeguato ed eseguire test immediatamente. Per ottenere campioni a tempi diversi nel corso di memorizzazione, ad esempio per uno studio di convalida, collegare sterileun contenitore di campionamento nuovo al tubo del contenitore di stoccaggio piastrinica. Garantire che le piastrine sono ben miscelati prima del trasferimento al contenitore di campionamento. 6. Valutazione della funzione in vitro Per questo studio di validazione, valutazione in vitro è stata effettuata dopo il trattamento CAD (giorno 1 giorno o due, a seconda della durata CAD) e nuovamente il giorno 4 (o giorno 5) e 7 giorni. Misurazioni in vitro inclusi volume, conta piastrinica, pH, gas del sangue (pO 2, pCO 2), glucosio, lattato, e vorticoso. Volume è stato determinato dal peso utilizzando 1,01 g / ml come il peso specifico della soluzione additiva di piastrine. Contaminazione emoglobina è stata valutata visivamente con rispetto ad una tabella di colore. Turbine è stata determinata visivamente. Vedere "Tabella di apparecchiature" per la metodologia di altri saggi. 7. Risultati rappresentativi Il processo di produzione double dose di buffy coat piastrine inizia con la produzione di singoli buffy coats che soddisfano le specifiche bersaglio per volume ed ematocrito. Poiché non è pratico per misurare l'ematocrito del singolo buffy cappotti durante il processo di convalida finale, abbiamo iniziato effettuando un intervento separato per ottimizzare la nostra buffy cappotti per garantire che abbiamo sempre incontrare volume di destinazione e dell'ematocrito. Come mostrato nella Tabella 1, i cappotti ottimizzati buffy rispetto favorevole ai valori bersaglio per volume ed ematocrito 46 ± 2 ml e 37 ± 3%, rispettivamente. Dopo pooling, il volume e l'ematocrito del pool di buffy coat dovrebbe essere di circa 600 ml e 20%, rispettivamente, prima della centrifugazione rotazione morbida. Come illustrato nella Tabella 2, le nostre piscine buffy coat media di 615 ± 5 ml; l'ematocrito media di 19 ± 1%. Le morbide centrifugazione risultati di spin in un conc doppia dose di piastrineEntrate in grado di soddisfare i requisiti in ingresso alla inattivazione dei patogeni che utilizzano il INTERCEPT Blood System DS di elaborazione impostata. Parametri di input fondamentali per il trattamento INTERCETTA comprendono il volume, conta delle piastrine, plasma il rapporto, e il contenuto RBC. Inoltre, intendiamo recuperare ≥ 75% delle piastrine nel concentrato di piastrine rispetto al pool di buffy coat. Per fabbisogno locale, dei globuli bianchi (WBC) la contaminazione deve essere <1×10 6 / unità. Il concentrati piastrinici nella nostra convalida incontrato i parametri chiave per trattamento INTERCEPT nonché gli obiettivi di contaminazione WBC e recupero delle piastrine, come mostrato nella Tabella 3. Il processo di inattivazione INTERCEPT patogeno viene eseguita sul concentrato di piastrine doppia dose utilizzando un unico set di elaborazione INTERCEPT. Il set di elaborazione contiene due contenitori integrali che consentono all'unità trattata per essere diviso in due singole dosi terapeutiche piastrinica al completamento del percorsoogen inattivazione processo. Linee guida europee richiedono che il 75% delle unità testate contiene ≥ 200×10 9 piastrine per dose1 terapeutico; alle prescrizioni locali in Svezia richiedono che il 75% delle unità testate con contenuto> 240×10 9 piastrine per dose. Dopo il trattamento INTERCETTA, il tenore medio delle piastrine era 265 ± 22 x10 9 (n = 24). Inoltre, l'88% delle unità raggiunto o superato 240×10 9 piastrine per dose terapeutica, questo è ben all'interno di entrambe le linee guida e regolamenti europei svedesi. Vedere le figure 1 e 2 per l'illustrazione della doppia dose di preparazione buffy coat e dei processi di gestione delle intercettazioni, rispettivamente. Per questo la validazione, abbiamo misurato la caratteristiche in vitro del concentrati piastrinici dopo il trattamento INTERCETTA (vale a dire dopo la scissione nei contenitori individuali); parametri sono stati misurati oltre 7 giorni di conservazione. La media e la deviazione standard sono stati raccolti perDose piastrinica, pH, pO 2, pCO 2, produzione di lattato e consumo di glucosio. La figura 3 mostra la media dose iniziale del concentrato piastrinico doppia dose piastrinica prima del trattamento INTERCEPT e la dose media piastrinica in ciascuno dei prodotti parziali dopo trattamento INTERCEPT oltre 7 giorni di conservazione. Perdita delle piastrine durante la conservazione è stato di circa il 9%. Questa riduzione non è diversa dalla perdita attesa di piastrine durante la conservazione delle piastrine convenzionali. 2 La tabella 4 riassume le caratteristiche in vitro delle piastrine INTERCEPT dopo il trattamento e la divisione in unità singole. Per i requisiti europei, il pH delle piastrine deve rimanere al di sopra 6,4 fino alla fine della durata di conservazione. Durante la lavorazione, il pH della concentrati piastrinici scende leggermente basata sulla concentrazione piastrinica, il volume e la permeabilità ai gas della piastrina stocontenitore rabbia. Figura 4 illustra il pH dei prodotti divisi piastriniche oltre 7 giorni di conservazione. Durante l'immagazzinamento, il pH è stabile e ben mantenuta nei requisiti di elaborazione. Come mostrato nelle figure 5A e 5B, la piastrina consumo di O 2 e CO 2 produzione indicare respirazione continuato dalle piastrine intercetta nel contenitore PL2410 durante 7 giorni di conservazione. Figure 6A e 6B mostrano i livelli di lattato e glucosio oltre 7 giorni di conservazione . Consumo di glucosio piastrinica e la produzione di lattato sono coerenti tra di loro durante i 7 giorni di conservazione. 5 unità avevano livelli di glucosio inferiore a 1,11 mmol / l (il limite inferiore per il dosaggio del glucosio). La preparazione buffy coat e delle piastrine convalida pooling prodotto concentra in grado di soddisfare i criteri di ingresso per il trattamento INTERCETTA, in particolare, il volume, conta delle piastrine, plasma il rapporto, e rosso blood cella contaminazione. Le unità finali incontrato i criteri di convalida oltre 7 giorni di conservazione tra cui la dose delle piastrine e del pH. Parametro Obiettivo Gamma Risultati media ± DS Volume (ml) ~ 48 46 ± 2 Ematocrito (%) ~ 37 37 ± 3 Tempo di mantenimento prima di mettere in comune Pernottamento in agitatore Pernottamento in agitatore Caratteristiche Tabella 1. Dell'individuo Buffy Coats (n = 19). Parametro Obiettivo Gamma Risultati media ± DS Volume (ml) ~ 600 615 ± 5 Hematocrit (%) ~ 20 19 ± 1 Tempo di mantenimento prima della centrifugazione 1 ora su agitatore 1 ora su agitatore Caratteristiche Tabella 2. Delle piscine Rivestire le Buffy (n = 12). Parametro Obiettivo Risultati media ± DS Volume (ml) 370-420 404 ± 8 Conta piastrinica (x10 9 / unità) 250-700 577 ± 62 Media di recupero delle piastrine (%) ≥ 75 75 ± 4 Plasma ratio (%) 32-47 38 ± 1 RBC (x10 6 / ml) ≤ 4 1,2 ± 0,4 WBC (x10 6 </sup> / unità) ≤ 1 0,11 ± 0,1 Tempo di attesa prima di INTERCETTA (hr) ≤ fine del giorno 1 ≤ fine del giorno 1 Caratteristiche Tabella 3. Della doppia dose concentrati piastrinici (n = 12). Media ± DS Min Max Volume (ml) 199 ± 16 182 236 Conta piastrinica (x10 9 / unità) 265 ± 22 225 292 pH (22 ° C) 6,9 ± 0,1 6,8 7.0 pO 2 (kPa) 21,4 ± 4,8 12,8 27,3 pCO 2 (kPa) 4,3 & plusmn; 0,4 3,3 4,9 Lattato (mmol / l) 9,1 ± 1,7 6,8 12,4 Glucosio (mmol / l) 5,3 ± 0,9 3,7 6,5 Caratteristiche Tabella 4. Del INTERCEPT giorno trattata Piastrine 1/2 (Unità singole, n = 24). Figura 1. Produzione di un concentrato piastrinico doppio della dose da un pool di 7 buffy cappotti. Figura 2. Inattivazione dei patogeni di un concentrato piastrinico doppio della dose con il sistema INTERCEPT Blood. Figura 3. Dose media piastrinica prima e per7 giorni dopo il trattamento INTERCETTA (n = 12 prima INTERCETTA, n = 24 dopo INTERCEPT). Figura 4. Media piastrinica pH ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). Figura 5A. Media pO 2 ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). Figura 5B. Media pO 2 ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). Figura 6A. Livelli medi di lattato ± DS dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24). Figura 6B. Livelli medi di glucosio eplusmn; SD dopo il trattamento INTERCETTA (n = 24).