Бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) для исследований; Получение достаточном количестве отобранных образцов Выход

1. Объекты встречены по прибытию дыхательной исследовательского Медсестра Предметом было поститься> 4 ч для твердой пищи и 2 ч для прозрачных жидкостей 1. Процедура проводится как однодневная случае с соответствующими проверками до и после-процедур (как в стандартной политики больницы). Предметом носит больничную одежду. Небольшой датчик канюля вводится (в идеале в левой руке) и остается на месте до конца после процедуры восстановительного периода 1. Preprocedure наблюдения взяты (артериальное давление, частота сердечных сокращений, кислородные насыщенности [SATS]). Предметом передается бронхоскопии люкс. 2. Тема готовится к процедуре в люксе на Респиратор исследовательского Клиницист опыт в Бронхоскопия Оборудование для мониторинга прилагается в том числе, 3-канальной ЭКГ, пульсоксиметр 1,10 и сфигмоманометре. Anesthetподдержка микросхемы не требуется в том числе письменного информированного согласия. Кислород может быть доставлен по носовые канюли со скоростью до 4 л / мин, для достижения САЦ> 90% 1. Оператор проверяет бронхоскоп, это включает в себя обеспечение эффективного всасывания путем аспирации стерильный физиологический раствор. Местная анестезия с лидокаином достигается в носовые проходы (используя Instillagel 1) и слизистой оболочки полости рта (при использовании Xylocaine) Если седативный уместно и по просьбе субъекта, внутривенное мидазолам вводят 1. Соответствующий разворот агент (флумазенила) сразу же доступны. Реанимационное оборудование должны быть легко доступны 1,10. 3. Бронхоскоп вставлена ​​и позиционируется Интубации, как правило, через нос. Если это не представляется возможным в связи с носовые полипы, воспаленные раковин, или какого-либо дискомфорта, то субъект интубированных через рот (рот-охранник используется для предотвращенияповреждению рамки или зубов субъекта). Местная анестезия в гортани выполняется с использованием 4% лидокаина, как правило, в общей сложности 4-6 мл используется. Обычно это вызывает кашель на закапывания. Голосовые связки передаются, и дальнейшие слизистой анестезии с использованием 2 мл аликвоты 2% лидокаина в килем, на разделение правой нижней доле (RLL) и правой средней доли (RML) и при входе RML. Бронхоскоп расположен внутри ОПМ, в идеале в медиальном сегменте, в положении, когда она является достаточно, чтобы быть в безопасном положении дистального, но не слишком, так что дистальный дыхательных путей разрушается, когда прилагается усилие всасывания ('Интерес тест "с помощью кнопки всасывания ). Удобное положение указано в ходе испытания подмигнуть по бронхоскоп, которые могут быть в полной мере поддерживается в положении на bronchoscopist и дыхательных путей, что не в полной мере близко сразу на деликатного всасывания. 4. БАЛ выполняется Четыре 60 мл шприцы предварительнонаполненный подогретой физиологического раствора – 60 мл, 50 мл, 50 мл и 40 мл в последовательных шприцев. Когда объект и bronchoscopist готовы первый шприц физиологического раствора закапывают по бронхоскопии помощником в то время как bronchoscopist сохраняет позиции в RML. Нежный всасывания рука Затем выполняется с помощником, используя тот же порт и 50 мл шприц. Эта процедура повторяется еще 3 раза, с максимальным объемом 200 мл, используемых в нашем конкретном техники. Извлеченный БАЛ выталкивается мягко в маркированные контейнеры уже состоявшихся таяния льда. Стеклянная тара может быть presiliconized для того, чтобы ингибировать прикрепление клеток и максимальную отдачу клеток. БАЛ появляется туманное против света с поверхностными мыльных пузырей, образованных поверхностно. Бронхоскоп медленно полностью выведены. Транспортируется БАЛ без ожидания на льду в течение немедленной обработки. 5. Тема восстановления </p> Предметом восстанавливается в течение 2-4 часов на дыхательной исследовательской медсестры на отделении. За это время они имеют право на отдых, а затем только есть и пить> 60 мин 1 после процедуры (когда их ласточка оценивается как сейф), для того, снизить риск аспирации. Сообщение процедурные наблюдения контролироваться и регистрироваться. Клиническое обследование происходит перед сбросом. Субъект проинформировал перед выпиской о распространенных побочных эффектов (лихорадка, умеренная право субмаммарной дискомфорт в груди, боль в горле) и с учетом контактный номер в случае, если существенные побочные эффекты возникают 1. Предметом следуют вверх на 1-5 дней после процедуры с клиническим контакта. Это может быть либо по телефону или лично. 6. Клетки Изолированные в лаборатории – Выполнить на тающем льду, где только возможно Объем БАЛ записывается и фильтровали через двойной слой стерильной марлевой тампонаудалить слизь пробки в prechilled, стерильные 50 мл центрифужные пробирки. Клетки осаждали центрифугированием при 500 х г при 4 ° С в течение 5-10 мин и промывают при интенсивном перемешивании в 50 мл холодного нормального физиологического раствора. Центрифугирование повторяли один раз. Клетки ресуспендируют в культуральной среде (RPMI-1640 + 10% фетальной бычьей сыворотки + 2 мМ L-глутамина, пенициллин + [40 МЕ / мл], стрептомицин [75 МЕ / мл] и амфотерицин В [0,5 МЕ / мл]) и дифференциального подсчета выполняется с помощью равного объема трипанового синего и гемоцитометра. Суспензию клеток нормализуется до требуемой плотности (мы используем 1 × 10 6 клеток / мл), введенных с помощью пипетки в соответствующие ткани культуральных планшетах и инкубируют при 37 ° С в течение 3 часов, чтобы позволить макрофагов присоединению. 1 мл этой клеточной суспензии на лунку подходит для культуральных планшетах с 24 лунками. Для работы лимфоцитов, после 3 ч инкубации культуральную среду осторожно пипеткой вверх и вниз 3x, и собирали. Эта среда содержит лимфоцитыи неадгезивные макрофаги и могут быть использованы для оценки функции лимфоцитов, он также может быть использован в стадий очистки, например, с CD14 магнитных шариков, чтобы удалить макрофаги. Для работы макрофагов, после 3 ч инкубации среду тщательно удалены с минимальным пипетки и заменена свежей, теплой среде без антибиотиков (RPMI 1640 + 10% фетальной бычьей сыворотки + 2 мМ L-глутамина). Макрофаги являются приверженцем планшета для культуры ткани (см. рисунок 1).