연구를위한 기관지 폐포 세척액 (BAL), 적절한 샘플 수익률을 얻기

1. 주제는 호흡 연구 간호사에 의해 도착에 만족 주제는 고체 음식과 맑은 액체 1 2 시간> 4 시간 동안 금식을하고있다. 절차는 (표준 병원 정책에 따라) 적절한 사전 및 사후 절차 검사와 함께 일 경우로 수행됩니다. 주제는 병원 가운을 착용. 작은 계기 정맥은 (이상적으로 왼쪽 손에) 삽입 시술 후 회복 기간 1이 끝날 때까지 현장에 남아있다. 시술 전 관측이 수행된다 (혈압, 맥박, 산소 포화도 [SAT 성적]). 피사체가 기관지 제품군에 전달된다. 2. 주제는 기관지에 경험 호흡기 임상 연구에 의해 스위트 룸에있는 절차에 대한 준비가되어 있습니다 3 – 리드 ECG, 맥박 산소 측정기 1,10 및 혈압계, 모니터링 장비 등의 부착된다. AnesthetIC 지원은 서면 동의서를 포함하여 필요하지 않습니다. 산소는> 90 % 1 SAT 성적을 달성하기 위해, 최대 4 L / min으로 비강 캐뉼라를 통해 전달 될 ​​수있다. 운영자는이 멸균 생리 식염수를 흡입하여 효과적인 흡입을 보장 포함, 기관 지경을 확인합니다. 리도카인과 국소 마취 (xylocaine 사용) (Instillagel를 사용하여) 비강과 구강 점막에 달성 진정 작용이 적절하고 피사체에 의해 요구되는 경우, 정맥 미다 졸람 1을 투여한다. 적절한 반전 에이전트 (플루 마제 닐은) 즉시 사용할 수 있습니다. 소생 장비는 1,10 쉽게 사용할 수 있습니다. 3. 기관 지경을 삽입 위치 삽관 법은 코를 통해 보통이다. 이 때문에 비강 폴립, 염증 비갑개 또는 불편 다음 피사체가 입을 통해 삽관되어 할 수없는 경우 (입 가드 방지하는 데 사용됩니다) 범위 나 대상의 치아에 손상 될 수 있습니다. 후두에 국소 마취 보통 4-6 밀리리터의 전체가 사용되며, 4 % 리도카인을 사용하여 완성된다. 일반적으로이 점안에 기침의 원인이됩니다. 성대가 전달되고 오른쪽 하엽과 오른쪽 중간 엽 (RML)의 부문과 RML 입구에, 분 기부에서 2 % 리도카인 2 ㎖ 분취 량을 사용하여 더 점막 마취. 기관 지경은 흡인 ( '윙크 시험'흡인 버튼을 이용하여인가 될 때기도가 붕괴되도록 그것이 안전한 위치에 충분한 원위 그러나 너무 원위없는 위치에 이상적으로 내측 부분에서, RML 내에 위치 ). 좋은 위치는 완전히 bronchoscopist 즉시 부드러운 흡입에 완전히 닫히지기도에 의해 위치에 유지 될 수있는 지경에 윙크 테스트 중에 표시됩니다. 4. BAL이 수행 네 개의 60 ㎖를 주사기 사전입니다60 ㎖, 50 ㎖, 50 ㎖, 연속 주사기에 40 ㎖ – 가온 생리 식염수로 채워진. 제목과 bronchoscopist 준비가되면 bronchoscopist가 RML의 위치를​​ 유지하는 동안 식염수의 첫 번째 주사기는 기관지 조수에 의해 주입된다. 부드러운 손 흡입 후, 같은 포트 및 50 ㎖ 주사기를 사용하여 보조에 의해 수행된다. 이 절차는 다음 우리 고유의 기술로 사용되는 200 ㎖의 최대 양으로, 또한 3 회 반복된다. 검색 BAL 유체는 이미 얼음이 녹는에 개최 라벨이 부착 된 용기에 부드럽게 배출된다. 유리 용기는 세포 부착을 억제하고 세포의 수익을 극대화하기 위해 presiliconized 할 수있다. BAL 액이 계면 활성제에 의해 형성된 표면에 비누 거품과 빛에 대한 흐릿한 나타납니다. 기관 지경 서서히 완전히 배출된다. BAL 액은 즉시 처리를 위해 얼음에 지연없이 전송됩니다. 5. 제목 복구 </p> 주제는 병동 호흡 연구 간호사에 의해 2 ~ 4 시간 동안 복구됩니다. 이 시간 동안 그들이 (그들의 제비가 안전한 것으로 평가 될 때) 과정을 거친 후, 순서에 흡인의 위험을 감소 휴식 후 만 먹고> (60) 분 1을 마실 수 있습니다. 포스트 절차 관측 모니터링 및 기록됩니다. 임상 검사는 배출하기 전에 발생합니다. 피사체가 일반적인 부작용 (발열, 가벼운 바로 submammary 가슴 통증, 목의 통증)에 대한 프리 디스 브리핑 상당한 부작용 1 발생할 경우 연락 번호 부여됩니다. 피사체 추적 관찰 1 ~ 5 일 임상 접촉 후 절차에. 이 전화 나 사람이 될 수 있습니다. 6. 세포는 실험실에서 고립되어 – 녹는 얼음에 수행 가능한 BAL 유체의 부피는 멸균 거즈 면봉의 이중 층을 통해 기록 및 여과prechilled, 멸균 50 ML의 원심 분리기 튜브에 점액 플러그를 제거합니다. 세포는 5 ~ 10 분 동안 4 ° C에서 500 XG에서 원심 분리하여 펠렛 및 50 ㎖의 차가운 생리 식염수에 소용돌이로 교반하여 세척한다. 원심 분리 한 번 반복된다. 세포 (RPMI-1640 + 10 % 소 태아 혈청 + 2 밀리미터 L-글루타민 + 페니실린 [40 IU / ㎖], 스트렙토 마이신 [75 IU / ㎖] 및 암포 테리 신 B [0.5 IU / ㎖])와 문화 매체에 재현 탁된다 미분 계수 트리 판 블루의 동량과 혈구를 사용하여 수행 하였다. 세포 현탁액은 적절한 조직 배양 접시에 피펫에 의해 도입, (우리가 1 × 10 6 세포 / ml 사용), 그리고 대식 세포의 부착을 허용하는 3 시간 동안 37 ° C에서 배양 필요한 밀도로 정규화됩니다. 웰 당이 세포 현탁액 1 ㎖를 24 – 웰 배양 플레이트에 적절하다. 림프구 작업, 3 시간 배양 한 후, 배양 배지를 부드럽게 상하 3X 피펫 팅하고, 수집된다. 이 매체는 림프구를 포함및 비 접착 성 대 식세포 및 림프구 기능을 평가하기 위해 사용될 수 있으며, 또한 정제 단계에서 사용될 수있다 식세포를 제거하는 CD14 자기 비드 예. 대식 작업, 배양 3 시간 후, 매체는 조심스럽게 최소한의 피펫으로 제거하고 항생제없이 신선한, 따뜻한 배지 (RPMI 1640 + 10 % 소 태아 혈청 + 2 밀리미터 L-글루타민)로 대체. 대 식세포는 (도 1 참조) 조직 배양 플레이트에 부착한다.