Trapianto di fegato in ratti

1. Donatori di funzionamento Anestetizzare ratti maschi peso 200 ± 20 grammi con isoflurano sul cono maschera (il 3% per l'induzione, 2% durante l'operazione, 1 'aria l / min di flusso, FiO2 70%). Eseguire una laparotomia mediana larga e trasversale e cauterizzare i vasi epigastrici su entrambi i lati. Tagliare il legamento falciforme, e separare la vena diaframmatica sinistra dal suprehepatic vena cava. Infine, dividere la vena diaframmatica tra due 7-0 legature di seta. Tagliare il triangolare di sinistra ed i legamenti gastro-epatiche. Dividere il legamento epato-esofageo e l'arteria tra 7-0 legature (coagulazione è una valida alternativa). Isolare il infraepatica vena cava fino alla vena renale sinistra. Separare la vena renale destra dai tessuti circostanti e dividerlo tra 10-0 e 7-0 legatura, sulle sue estremità prossimale e distale, rispettivamente. Dividere la vena surrenale destra tra 7-0 ligaturES e libera il fegato dai suoi legamenti posteriori, tagliando sotto una leggera trazione. Isolare la vena gastrosplenico e dividerlo tra 10-0 e 7-0 legatura, sulle sue estremità prossimale e distale, rispettivamente. Dividere l'arteria epatica corretta tra 7-0 legami. Isolare il duodeno-pancreatico vena e divisa fra un 10-0 e 7-0 uno legatura, sulla sua estremità prossimale e distale, rispettivamente. Inserire un 22G, stent 3,5 mm nel dotto biliare comune, praticando una piccola incisione di 1 cm di distanza dal ilo epatico. Fissare la stent in posizione con una legatura 7-0. Iniettare 10 UI di eparina, diluito in 1 ml di soluzione salina normale, attraverso la vena dorsale del pene. Incannulare la vena porta (per quanto possibile dall'ilo) con un ago 21G e delicatamente lavare il fegato con 20 ml di lattato suoneria freddo (o altre soluzioni di conservazione). Al tempo stesso, tagliare la vena cava inferiore le vene renali per consentire un adeguato outflow. Perfusione epatica freddo dovrebbe durare tra uno e due minuti. Tagliare la vena porta al di sotto del duodeno-pancreatico vena. Tagliare il dotto biliare comune distalmente alla legatura attorno allo stent. Completa l'incisione della vena cava infraepatica. Tagliare il sovraepatica vena cava skim al diaframma e rimuovere il fegato. Mettere il fegato in una bacinella piena di Ringer lattato freddo e laici del bacino su una base di ghiaccio. 2. Preparazione Graft Inserire la vena porta nel suo bracciale, poi questi vanno rovesciati con la nave intorno al bordo per esporre il intima. Bloccare il segmento di estroflesso sul bracciale con una legatura 7-0. Ripetere la stessa operazione sul infraepatica vena cava. Posizionare un micro-clamp (4-6 mm di lunghezza), sulla parte prossimale del sottoepatica vena cava. Questa operazione evita la perdita di sangue dopo riperfusione portale. Capovolgere il fegato e inserire due Prolene 8-0 punti di suturai bordi laterali opposti della sovraepatica vena cava, dall'esterno verso l'interno. Conservare l'innesto (immerso in soluzione di Ringer lattato) in frigorifero a 0-4 ° C. 3. Destinatario di funzionamento Anestetizzare ratti maschi peso 200 ± 20 grammi con isoflurano sul cono maschera (il 3% per l'induzione, 2% durante l'operazione, 1 'aria l / min di flusso, FiO2 70%) e mantenere su un blocco caldo. Da notare, pesi beneficiari e dei donatori dovrebbe essere abbinato (± 40 grammi). Iniettare 10 ml di soluzione fisiologica per via sottocutanea e 0,03 g di piperacillina / tazobactam intramuscolare prima della laparotomia. Eseguire una linea mediana xifo-pubica laparotomia. Inverso il processo xifoideo con un auto-statici forcipe per esporre meglio il fegato. Tagliare i legamenti anteriori e dividere la vena diaframmatica sinistra, tra due legami 7-0. Dividere il legamento epato-esofageo e l'arteria tra 7-0 legature (coagulation è una valida alternativa). Non mostrato nel video (identico al funzionamento del donatore). Isolare il infraepatica vena cava fino alla vena renale destra. Dividere la vena surrenale destra tra 7-0 legature e liberare il fegato dai suoi legamenti posteriori, tagliando in trazione leggera (non mostrato nel video (identico al funzionamento dei donatori)). Posizionare un 7-0 legatura attorno al dotto biliare comune, proprio sotto la sua divisione. In altre parole legatura uno millimetri al di sotto e tagliare in mezzo. Isolare l'arteria epatica all'ilo e dividerlo tra i 7-0 legature. Separare delicatamente i rami portale di sinistra e di destra. Prestare attenzione a non danneggiare l'arteria epatica comune o gastro-vena splenica. Posizionare l'anello attorno alla cava vena cava, cranialmente alla vena renale destra. Quindi fissare la parete del vaso per l'anello mettendo quattro cardinali 9-0 punti di sutura. Ripetere la stessa operazione con l'anello portale sulla vena porta. </li> Iniettare 10 UI di eparina, diluito in 1 ml di soluzione salina normale, attraverso la vena dorsale del pene. Impostare l'anestesia 0,25% e la FiO2 al 100%. Bloccare il infraepatica vena cava appena sopra la vena renale destra, quindi fissare il porta appena sopra la vena gastro-vena splenica. Infine bloccare la vena cava sovraepatica essere sicuri di includere almeno 2 mm di diaframma. Tagliare il vicino sovraepatica vena cava al parenchima. Tagliare la sinistra ei rami portale di destra e dividere il setto in mezzo. Tagliare il vicino infraepatica vena cava al parenchima, facendo attenzione a non incidere uno dei punti di sutura precedentemente posizionati. Rimuovere il fegato e posizionare l'innesto nella cavità addominale. Eseguire un end-to-end anastomosi tra la vena cava sovraepatica del graft e del destinatario. Iniziare con la sutura continua della parete posteriore da sinistra a destra, quindi procedere sulla parete anteriore da destra verso left Mantenere la sutura anteriore sciolto fino alla fine per consentire un lavaggio generosa del lume interno prima di serrare le estremità. Inserire il ramo caudale del approssimatore nel manico anello portale, quindi inserire la vena porta dell'innesto nella fessura del ramo craniale del approssimatore, con il polsino portale trovando la sua posizione nella fessura. Chiudere la approssimatore durante il lavaggio del destinatario vena porta con soluzione fisiologica e consentire il bracciale da inserire nel vaso. Fissare il destinatario vena porta attorno al suo polso con un pareggio 7-0 circonferenziale. Rimuovere il approssimatore. Aprire il morsetto sul sovraepatica vena cava e vena porta al fine di: flusso portale è ora ristabilita. Rimuovere l'anello portale tagliando i 9-0 legature con olio extra-fini forbici. Inserire il ramo caudale della approssimatore nel manico ad anello caval, quindi inserire il infraepatica vena cava del trapianto nella fessura del cranio ramo del approssimatore, con il polsino cava trovando la sua posizione nella fessura. Chiudere la approssimatore durante il lavaggio del destinatario sottoepatica vena cava con soluzione fisiologica e consentire il bracciale da inserire nel vaso. Fissare il destinatario vena cava attorno al suo polso con un pareggio 7-0 circonferenziale. Rimuovere il approssimatore. Aprire le microclamps sul infraepatica vena cava dell'innesto e creditore in ordine: il flusso venoso è ora ristabilita. Eseguire una incisione parziale del dotto biliare comune del destinatario, applicare una leggera trazione verso la testa, e inserire il lato libero dello stent precedentemente inserita nel dotto biliare dell'innesto. Fissare lo stent con un pareggio 7-0 circonferenziale. Chiudere l'animale da strati con 5-0 punti di sutura. Lasciare l'acqua libera e alimenti provenienti da risveglio. Amministrare analgesia efficace secondo i protocolli locali istituzionali. Una durata minima di 24 h è raccomandato. _content "> Da notare: end-to-end anastomosi dell'arteria epatica può essere eseguita, quando richiesto dal disegno sperimentale (l'arteria non è necessario per sopravvivenza a lungo termine dopo trapianto di fegato di ratto). 4. Risultati rappresentativi La tecnica descritta può essere masterizzato con successo dal nostro team, dopo circa 10 interventi di formazione. Ha permesso al 100% a lungo termine (> 21 giorni) la sopravvivenza a 36 consecutive Lewis-to-Lewis e scuri Agouti-to-Lewis trapianti, dopo il periodo di formazione breve (un certo numero di destinatari singenici trapianto di fegato sono stati tenuti in vita per oltre 12 da mesi). Post-trapianto singenici giorno 1 test di funzionalità epatica ha mostrato mediana aspartato transaminasi (AST): 84 U / l (51,7-92,7) e alanina mediana transaminasi (ALT): 172,5 U / l (127,5-240,2). La fase anepatica media (dalla vena porta di bloccaggio ad innesto re-perfusione) è stata del 14 ± 2 minuti, con la più lunga fase è la vena cava sovraepatica anastomosi (in esecuzione sFUTURO) Tempo di 9 ± 2 min. Il rapido linker sistema ha permesso il posizionamento di 1,55 mm-foro manette vena porta e 2,40 mm a canna manette vena cava (destinatari peso 200 ± 20 g). Al contrario, quando abbiamo provato il trapianto usando la tecnica Kamada, essi non potevano di 1,40 mm e 2,16 millimetri, rispettivamente (ratti corrispondenti per tensione e peso). Come mostrato in Figura 7, rapido-linker anelli sono progettati per mantenere destinatario su navi ottimale stiramento, permettendo minimo spreco pinza e lunghezza, che si traduce in risultati emodinamici più a-fisiologiche. Figura 1. Misure Anelli. Figura 2. Misure Microclamps. <br /> Figura 3. Quick-linker kit. Figura 4. Quick-linker armata. Figura 5. Quick-linker chiuso. Figura 6. Morsetto SHVC. Figura 7. Classic vs quick-linker assistita bracciale-anastomosi emodinamica. Figura 8. Donatore e la preparazione della cute del destinatario e incisione.