Gelen Yumurta kullanma<em> Schistosoma mansoni</em> Bir şekilde<em> In vivo</emHelmint bağlı Akciğer iltihabı ve> Model
Summary
Schistosoma mansoni yumurta T hücre tip 2 (Th2) immün yanıt, parazit enfeksiyonu karakteristik, astım ve allerjik inflamasyonun güçlü uyarıcılar vardır. Bu protokol S. kullanır CD4 Th2 sitokin bağlı inflamatuar yumurtanın etrafında akciğer granülom oluşumu ile karakterize, akciğerin yanıt, eozinofili ve makrofaj aktivasyonu alternatif oluşturmak için mansoni yumurta enjeksiyon.
Abstract
Schistosoma parazitleri dünyada tahminen 200 milyon kişi 1 enfekte kan kurtları vardır. Schistosoma, karaciğer fibroz ve splenomegali de dahil olmak üzere ciddi patoloji, kronik enfeksiyon oldukça parazitin kendisini 2 den parazit yumurtaları için bağışıklık yanıtı kaynaklanır. Parazit yumurtaları, IL-4 üretimini, IL-5, IL-13, makrofaj alternatif aktivasyonu ve eozinofillerin alımı ile karakterize edilen, Th2 tepkisinin uyarılmasından. Burada, parazit özgü akciğer Th2 sitokin yanıtları ve lenf düğümleri, yumurta çevreleyen pulmoner granuloma oluşumu ve hava yolu inflamasyonu incelemek için bir model olarak Schistosoma mansoni yumurta enjeksiyonu açıklar.
Intraperitoneal hassasiyete ve intravenöz meydan, S. ardından mansoni yumurta onlar akciğer parankimi içinde sıkışıp kalırlar pulmoner arterler yoluyla akciğere taşınırlenfositler, eozinofiller ve alternatif aktive makrofajlar 3-6 oluşan granülomlarlakarakterize. Bronko-alveolar alanlarda granülom oluşumu, inflamasyon ile ilişkili, lenf düğümleri ve CD4 genişleme T hücre aktivasyonu görülebilir. Burada ayrıntı, enfekte ciğeri (7 değiştirilerek) den Schistosoma mansoni yumurta tecrit fareler hassasiyet ve zorlu ve analizi için organların (bronko-alveolar lavaj (BAL), akciğer ve lenf düğümleri) kurtarmak için protokol. Biz de temsilcisi histolojik ve ek immünolojik analizi için immünolojik veriler ve öneriler içerir.
Genel olarak, bu yöntem, in vivo modelde, bir parazit enfeksiyonu, fibrotik hastalıkları, alerjik enflamasyon ve astım da dahil olmak üzere Th2 enflamatuar hastalıkların çalışması için genel olarak uygulanabilir olan, akciğer parazit kaynaklı immünolojik yanıtları araştırmak için sağlamaktadır. Tipik bir çalışma için, bu modelde avantajlarıAkciğer e 2 iltihabı akciğer güçlü bir Th2 inflamatuvar yanıt tekrarlanabilirlik ve lenf düğümleri, yumurta çevreleyen granülomların histolojik inceleme ile inflamasyonun değerlendirilmesi kolaylığı ve parazit uzun süreli depolama için potansiyel bulunmaktadır yumurta.
Protocol
Discussion
Burada, tip 2 akciğer iltihabı teşvik için Schistosoma mansoni yumurta kullanan bir model açıklanmıştır. Bu modelin karakteristik özellikleri güçlü Th2 immün yanıt, hava yolu inflamasyonu ve pulmoner granülom oluşumu vardır. Bu parametreler CD4 Th2 hücre yanıtlarının 11 bağımlı olmaları nedeniyle, bu Th2 hücre yanıtları protein özgü veya soy-spesifik delesyonlar etkilerini araştırmak için yararlı bir modeldir. Burada okuma antijen spesifik Th2 sitokinlerin ölçüm?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Sağlık (NIH) AI091759 ve Crohn ve Amerika'nın William ve Shelby Modell Aile Vakfı Araştırma Ödülü (MN) arasında Kolit Vakfı Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir. Şiştozom-enfekte farelerde NIAID şiştozom Kaynak Merkezi (NIAID Sözleşme N01 A130026) tarafından sağlandı.
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
References
- World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , (2002).
- Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
- Sandler, N. G. Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair. J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).
- Perrigoue, J. G. IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).
- Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses. Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).
- Nair, M. G. Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).
- Dalton, J. P. A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues. Parasitology. 115, 29-32 (1997).
- Lewis, F. A. Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations. J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).
- Tilney, N. L. Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat. J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).
- Lewis, F., Coligan, J. E. Schistosomiasis. Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).
- Kaplan, M. H. Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response. J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).
- Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).
- Cheever, A. W. Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).
