Использование Яйца<em> Schistosoma mansoni</em> А<em> В естественных условиях</em> Модель гельминтов вызванных воспалением легких
Summary
Schistosoma mansoni яйца являются мощными стимуляторами типа Т-хелперов 2 (Th2) иммунного ответа, характерно заражение паразитом, астмы и аллергического воспаления. Этот протокол используется С. mansoni яйцо инъекции для создания CD4 Th2 цитокин-индуцированного воспалительной реакции в легких, характеризующееся легкое образование гранулемы вокруг яйца, эозинофилия и макрофагов альтернативной активации.
Abstract
Schistosoma паразиты кровяных сосальщиков, которые заражают примерно 200 миллионов человек во всем мире 1. При хронической инфекции Schistosoma, тяжелая патология, в том числе фиброзом печени и селезенки, вызывает иммунный ответ на яйца паразита, а не паразита 2. Яйца паразита вызывает Th2 ответ характеризуется продукцией ИЛ-4, IL-5 и IL-13, альтернативная активация макрофагов и набор эозинофилов. Здесь мы описываем введения яйца Schistosoma mansoni в качестве модели для изучения паразитов конкретного ответа Th2 цитокинов в легких и лимфатических узлах слива, формирования легких гранулем окружающие яйцеклетку, и воспаления дыхательных путей.
После внутрибрюшинного и внутривенного сенсибилизации проблемы, С. mansoni яйца транспортируется в легкие через легочную артерию, где они оказались в ловушке в легочной паренхимыпо гранулемы состоит из лимфоцитов, эозинофилов и альтернативы активированные макрофаги 3-6. Связанные с формированием гранулемы, воспаления в бронхо-альвеолярной пространства, расширение осушения лимфатических узлов и CD4 активацию Т-клеток может наблюдаться. Здесь мы подробно протокол выделения Schistosoma mansoni яйца от зараженных печени (изменение от 7), информирование и сложных мышей и восстановления органов (бронхо-альвеолярной лаважа (БАЛ), легких и дренаж лимфатических узлов) для анализа. Мы также гистологические и иммунологические представитель данные и предложения для дополнительного анализа иммунологических.
В целом, этот метод обеспечивает в естественных условиях модель для исследования гельминтов вызванного ответа иммунологическая в легких, которая широко применяется для изучения Th2 воспалительных заболеваний, включая инфекции гельминтов, фиброзных заболевания, аллергические воспаления и бронхиальной астмы. Преимущества данной модели для изучения типе 2 воспаление в легких включает воспроизводимость мощным Th2 воспалительных реакций в легких и лимфатических узлах слива, простота оценки воспаления гистологического исследования гранулемы окружающие яйцеклетку, и потенциал для длительного хранения паразитов яиц.
Protocol
Discussion
Здесь модель использования Schistosoma mansoni яйца, чтобы побудить 2 типа воспаления легких описано. Характерные особенности этой модели можно отнести мощный Th2 иммунного ответа, воспаления дыхательных путей и легочной формирования гранулемы. Так как эти параметры зависят от CD4 Th2 ответа ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа выполнена при поддержке Национального института здоровья (NIH) AI091759 и Крона и колит Фонд Уильяма Америки и Шелби Modell Family Foundation премию исследований (М. Н.). Шистосом-инфицированных мышей были поставлены NIAID шистосом ресурсный центр (NIAID контракт N01 A130026).
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
References
- World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , (2002).
- Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
- Sandler, N. G. Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair. J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).
- Perrigoue, J. G. IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).
- Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses. Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).
- Nair, M. G. Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).
- Dalton, J. P. A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues. Parasitology. 115, 29-32 (1997).
- Lewis, F. A. Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations. J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).
- Tilney, N. L. Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat. J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).
- Lewis, F., Coligan, J. E. Schistosomiasis. Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).
- Kaplan, M. H. Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response. J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).
- Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).
- Cheever, A. W. Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).
