Con ovuli<em> Schistosoma mansoni</em> Come<em> In vivo</em> Modello di elminti-indotta infiammazione polmonare
Summary
Schistosoma mansoni uova sono potenti stimolatori del T helper di tipo 2 (Th2) risposta immunitaria, caratteristica di infezioni parassitarie, asma e infiammazione allergica. Questo protocollo utilizza S. mansoni uovo iniezione per generare un CD4 Th2 citochine indotta da risposta infiammatoria nel polmone, caratterizzata dalla formazione di granulomi intorno al polmone l'uovo, eosinofilia e l'attivazione dei macrofagi alternative.
Abstract
Parassiti Schistosoma sono trematodi del sangue che infettano circa 200 milioni di persone in tutto il mondo 1. In infezione cronica con Schistosoma, la patologia grave, inclusa la fibrosi epatica e splenomegalia, è causata dalla risposta immunitaria alle uova di parassiti piuttosto che il parassita stesso 2. Uova Parasite indurre una risposta Th2 caratterizzata dalla produzione di IL-4, IL-5 e IL-13, l'attivazione dei macrofagi alternativa e il reclutamento di eosinofili. Qui, descriviamo l'iniezione di uova di Schistosoma mansoni come un modello per esaminare parassita risposte specifiche citochine Th2 nei polmoni e dei linfonodi drenanti, la formazione di granulomi polmonari che circondano l'uovo e l'infiammazione delle vie aeree.
Dopo sensibilizzazione intraperitoneale e sfida endovenosa, S. mansoni uova vengono trasportati al polmone attraverso le arterie polmonari in cui sono intrappolati all'interno del parenchima polmonareda granulomi composti da linfociti, eosinofili e macrofagi attivati alternativamente 3-6. Associata alla formazione di granulomi, infiammazione nelle bronco-alveolari spazi, l'espansione dei linfonodi drenanti e l'attivazione delle cellule T CD4 si può osservare. Qui dettaglio il protocollo per isolare le uova Schistosoma mansoni da fegati infettati (modificato da 7), la sensibilizzazione e sfidando i topi, e il recupero degli organi (lavaggio bronco-alveolare (BAL), del polmone e linfonodi drenanti) per l'analisi. Abbiamo anche istologico dati rappresentativi e immunologici e suggerimenti per l'analisi immunologica aggiuntivo.
In generale, questo metodo fornisce un modello in vivo per indagare elminti indotte risposte immunologiche nel polmone, che è ampiamente applicabile allo studio di Th2 malattie infiammatorie comprese le infezioni elminti, malattie fibrotiche, infiammazione allergica e asma. I vantaggi di questo modello per lo studio del tip2 e infiammazione nel polmone includono la riproducibilità di una potente risposta infiammatoria Th2 nei polmoni e linfonodi drenanti, la facilità di valutazione di infiammazione mediante esame istologico dei granulomi circondano l'uovo, e il potenziale di conservazione a lungo termine del parassita uova.
Protocol
Discussion
Qui, un modello che impiega le uova Schistosoma mansoni di indurre l'infiammazione polmonare di tipo 2 viene descritto. Tratti caratteristici di questo modello includono il potente risposta immunitaria Th2, infiammazione delle vie aeree e la formazione di granuloma polmonare. Dal momento che questi parametri dipendono le risposte delle cellule CD4 Th2 11, questo è un modello utile per studiare gli effetti delle cancellazioni proteine specifiche o lineage-specifica sulle risposte delle cell…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institutes of Health (NIH) AI091759 e il morbo di Crohn e Colite Fondazione William America e Shelby Modell Award Famiglia Research Foundation (a MN). Schistosoma topi infettati sono stati forniti dal Centro NIAID Resource schistosoma (NIAID Contract N01 A130026).
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
References
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