移植物抗宿主病的诱导和<em在体内</em> T细胞监测中的应用MHC匹配的小鼠模型
Summary
小鼠骨髓移植是一种被广泛使用的技术，研究在人类移植物抗宿主病的免疫机制。监测能力的T细胞贩运模式<em在体内</em>允许在移植物抗宿主病的发展和延续的T细胞反应进行详细的分析。
Abstract
移植物抗宿主病（GVHD）的广泛使用的骨髓移植作为根治性治疗各种血液不足的限制阻挡。引起的成熟的同种异体反应性T细胞存在于注入收件人的骨髓移植物和移植物抗宿主病到主机器官造成损害。然而，在小鼠中，T细胞，必须添加到骨髓接种物以引起移植物抗宿主病。虽然大量的工作已经做了移植后的T细胞反应的特征，生物发光成像技术是一种非侵入性的方法来监测体内的 T细胞贩运模式。
致命的辐射，受体小鼠移植供体小鼠的骨髓细胞和脾细胞。从L2G85.B6（表达荧光素酶的转基因小鼠）T细胞亚群的移植。只移植特定的T细胞亚群，一个是能够跟踪特定的T细胞亚群在体内 ，并根据他们的位置，发展特异性T细胞亚群的作用，在促进移植物抗宿主病在不同时间点的假设。在预定的时间间隔移植后，受体小鼠的是使用精诺真IVIS CCD相机成像的。利用活体成像软件，可量化的光子强度（红色=高强度，紫=低强度）的基础上产生的伪彩色图像的光照强度。
受体小鼠移植后4-7天之间，开始出现临床症状，移植物抗宿主病。 Cooke 等人开发了一个评分系统进行定量疾病进展的基础上的受体小鼠皮毛质地，皮肤的完整性，活动，减肥，和姿势。小鼠每天的得分，和安乐死时，他们变得奄奄一息。受鼠一般垂死移植后的20-30天。
小鼠模型，移植物抗宿主病的免疫学研究的有价值的工具。选择性地移植特定的T细胞亚群人仔细辨认每个子集所扮演的角色的新低。非侵入性跟踪在体内的 T细胞反应的价值又增加了一层小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型。
Protocol
Discussion
这里介绍在小鼠体内诱导移植物抗宿主病的协议小鼠移植物抗宿主病的临床相关的模型。始建于1994年，Berger 等人。的C57BL / 6到BALB.B应变组合是MHC-匹配，移植物抗宿主病（GVHD）的死亡率介导的CD4依赖，CD8 + T效应2，高度相似，临床上最常见的情况3。它是已知的CD8 T细胞移植本身不导致在这个模型中移植物抗宿主病，但是，疾病的进展显着更糟时，CD4 +和CD8 + T细胞相比，CD4 + …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
爱丽丝高根和王娇静，其优秀的技术支持，智力投入，并提前将这些研究在道义上的支持，我们非常感激。这些研究是由美国国立卫生研究院资助AI036532支持GAH。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue Number | Comments |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 12633-012 | |
| Fetal Calf Serum | Invitrogen | 10439016 | |
| 40 μM Cell Strainer | BD Biosciences | 352340 | |
| CD3e-Biotin | Miltenyi Biotech | 130-093-021 | |
| Anti-Biotin Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-091-147 | |
| CD8a Microbeads | Miltenyi Biotech | 130-049-401 | Used to deplete CD8 T cells from spleen. |
| CD8a Purification Antibody Cocktail | Miltenyi Biotech | 130-095-236 | Used to purify CD8 T cells from spleen. |
| D-Luciferin | Caliper Life Sciences | 122796 |
References
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