整体动物灌注固定鼠害

1。准备固定液 （请参阅表定影液和缓冲器 ）。 2。准备灌注缓冲器 （请参阅表定影液和缓冲器 ）。 3。准备仪器和麻醉使用的水洗澡，温暖灌注缓冲至37°C。充满缓冲液的烧杯放置在出口阀。一个缓冲区填充50毫升注射器和重视固定液油管。冲洗管道多次被驱逐和撤出缓冲区。 清除缓冲区的行，直到所有气泡在油管被淘汰。这是不能有气泡中的任何行灌注成功的关键。 取下注射器和连接的4％多聚甲醛固定液（室温）容器。在管端，以避免气泡，同时定位到容器管，挤压管，所以，从笔底下降缓冲区突出O触点的容器内的液体表面。 关闭出油口（针的末端）。将缓冲阀（蓝色）作为固定液阀的（白）相同的位置。这将允许只从缓冲区行流。 打开出气口，通过A1 A3填充缓冲区行重复步骤。所有的气泡被淘汰后关闭出气口，取出注射器和连接的缓冲容器，照顾油管引入气泡。 测试系统的能力举行抽水橡胶压力计blub的压力。通常是由于空气压缩系统中的一些阻力。 设置在交通便利的秩序的手术工具。填充缓冲区灌注针，以消除气泡的可能性。 手术前，氯胺酮/甲苯​​噻嗪的混合物（高达80毫克/公斤体重氯胺酮和10毫克/公斤体重甲苯噻嗪）管理，通过腹腔注射（27号针头注射器和1毫升）。必要时将执行麻醉额外的管理，在每个操作的过程中保持麻醉的手术平面。 4。灌注术一旦动物已经达到了手术的麻醉平面，把它洋溢着碎冰的浅盘上。 （用脚趾捏反应的方法来判断麻醉深度。动物必须是反应迟钝，然后再继续）。 通过体壁和腹壁下方的肋骨外侧切口5-6厘米。仔细分离膈肌肝脏。 在使用隔膜弯曲，钝的剪刀做一个小切口。可以帮助你的手指的位置和压力​​的能力，以减少隔膜。 继续沿整个长度的肋骨暴露胸腔膈肌切口。 将沿肋骨一侧弯曲，钝的剪刀，仔细取代肺部，使某铜通过左肋吨上涨至锁骨。对侧上作出类似的削减。 起重胸骨而去，精心修剪的任何组织，将它连接到心脏。胸骨与止血钳尖端，并将其放置在头上止血。如果处理得当，胸腺升降机远离心脏与胸骨，提供了一个明确的看法的主要血管。 做一个小切口，使用虹膜剪左心室后端。 点击这里查看大图 。 截止到升主动脉心室通过15号橄榄钝或尖灌注针。小费应该是通过主动脉壁可见，不应该达到的主动脉弓，臂丛和颈动脉分歧。 使用止血钳，夹住心脏，这针固定，防止泄漏。如果需要，修改后的止血，可用于打击针尖周围的主动脉（这些止血留在原地，直到解剖开始，但是从未来的清晰度插图省略）。 最后，使动物的右心房，用虹膜剪刀创造尽可能大出口不损害降主动脉切口。在这一点上的动物是准备灌注。 5。灌注打开和出气口连接针座照顾，不引入任何气泡。 泵的压力表灯泡到80毫米汞柱的压力，快速及均匀。维护此整个缓冲区输液期间的压力。启动定时器。 调整针头角。针的角度是至关重要的，以实现最大流量（注意流量的变化与角度调整）。 开关的buffER阀（蓝色）（200毫升），一旦缓冲区接近完成。流体应清楚。肝脏的结算是一个良好的灌注指标。肝脏应该清楚这一点。您的记录，显示时间。 在几秒钟内，应遵守固定震颤，这应该被视为真正的固定时间。您的记录，显示时间。 压力可以逐步提高到最高130毫米汞柱2，保持稳定的流量。 关闭出口阀，一旦接近完成固定液。您的记录显示结束时间。 在这个阶段应该是僵硬的大鼠。 使用多聚甲醛，必须收集和储存处置根据贵机构的规定。 6。解剖4,11 删除的头，用一把剪刀。 使从颈部到鼻子的包膜沿中线切口和暴露头骨。 剪掉剩余的颈部肌肉，使颅底暴露，除去残留的肌肉，用剪刀或rongeurs。 放置到一侧的枕骨大孔的虹膜剪刀对尖底，仔细沿着头骨的内表面滑动的剪刀。 接下来，延伸到后头骨表面的远端边缘切割。使对侧相同截。使用rongeurs扫清小脑周围的头骨。 小心地将沿颅骨内表面剪刀的尖背远端后角头骨远端前缘，起重在刀刃上，你切割，以防止损害大脑。对面的重复。 远离大脑头骨背表面剥离rongeurs。修剪掉的头骨两侧使用rongeurs以及。 用铲，断绝嗅球和神经连接tions沿大脑的腹面。 轻轻挑逗的大脑远离头部，修剪任何硬脑膜仍然连接大脑的头骨，用虹膜剪刀。 取出大脑，并将其放置在一小瓶至少10倍体积的大脑本身的固定液含流体。偶尔漩涡小瓶。 7。后固定及储存设备保持大脑中固定液24小时在4°C，偶尔纷飞。 24小时后，用大脑磷酸盐缓冲生理盐水交换媒体的3倍和纷飞每次。 大脑可以储存在磷酸盐缓冲生理盐水或HBHS叠氮化钠，并保存在4°C。 8。代表结果灌注成功的一个初步的指标是四肢，如鼻子，耳朵，爪子和内脏器官，如胸腺，肝化（IHC世界）结算。总值的检查结果显示大脑的血液血管（白色至淡黄色的外观）无效。这也将是真正在组织切片染色和免疫组化注定。灌注的结果最终指标是在组织超微结构的条件。1,6,7,8 准备固定液： 准备8％多聚甲醛股票 加入500毫升DH 2 O40克多聚甲醛加热到60的解决方案 – 65°C，而搅拌（不要超过65°C间，这样做可以产生不利影响免疫组化过程中的成功）。 要清除的解决方案，减少热量和用滴管加2-3毫升1.0 M氢氧化钠。 过滤器和存储长达1个月在4°C。 准备0.2 M磷酸钠缓冲液，pH值7.4 磷酸二氢钠股票，增加至1 L DH 2 O27.8克的NaH 2 PO 4计 * 2 磷酸钠二元股票，添加28.4克的Na 2 HPO 4至1 L DH 2 O 加入810毫升到190毫升的二元股票下一代的股票。 准备4％多聚甲醛固定液 添加等份8％多聚甲醛股票0.2M磷酸钠缓冲注：此修补程序的最好准备新鲜的进步，在不超过72小时。 准备灌注和存储缓冲器： 准备磷酸盐缓冲生理盐水，pH值7.4 DH 2 O的 1升 9 g氯化钠 144毫克KH 2 PO <子> 4 795毫克的Na 2 HPO 4 检查pH值 肝素钠缓冲Hanks液（HBHS与叠氮化钠的pH值7.4） 990毫升DH 2 O的 7.5 g氯化钠， 0.3Ğ氯化钾 0.06克KH 2 PO 4 0.13克的Na 2 HPO 4 2克葡萄糖/葡萄糖 2.4 G 10毫米HEPES 0.1克MgCl 2的 6个部分DH 2 O的 0.05克硫酸镁 7件卫生署2 0.165克氯化钙 2件2 O的 DH 90毫克，南三 检查pH值 表1。制备定影液和缓冲器。 图1。 </stronG>标记元件的灌注装置。 图2。制备灌流装置一开始与固定液行。气泡冲洗管，填补迅速驱逐出境，并撤回到注射器，并通过行的缓冲带缓冲。关闭阀针的末端。没有引入气泡，放入固定液瓶的的固定液线。 图3。灌流装置制备。 1。打开阀针的末端。 2。旋转缓冲区阀（蓝色）定位流。 3。冲洗管气泡迅速驱逐和注射器撤出缓冲区和缓冲区填写。 4。关闭阀针端。缓冲瓶放入油管。压力测试，以确保系统正确的密封LY所抽的的压力表灯泡和看压力表。该仪器是现在的灌注过程中的准备。 图4。灌注装置在缓冲区交货的位置。 图5。灌注外科一，一）通过体壁和腹壁外侧切口。 b）使在膜片的切口，暴露心脏隔膜的跨越。使锁骨平行削减肋骨两侧。 C）胸骨与止血钳尖端，并将其放置在头上止血。 图6。灌注外科二。一）截止到升主动脉心室穿过灌注针。 B）固定灌注针使用一组止血钳的心脏。第二套的修改后的止血，也可用于打击主动脉周围，以防止泄漏的针尖。用虹膜剪刀作一小切口到左心室后端。 图7。与缓冲区灌注泵的压力表灯泡创建线的压力。打开阀门（1）和附加针枢纽。这是关键，以确保无气泡介绍。泵压力计灯泡，到80毫米汞柱的压力，并保持这种整个缓冲区输液期间的压力。 图8。一旦缓冲固定液灌注几乎完成（200毫升）切换缓冲阀（1）允许流动的固定液。压力可以逐步上升到最大的130毫米汞柱。 图9。解剖一）使用了一双剪刀除去头。 b）使沿中线从颈部到鼻子的皮肤切口，暴露颅骨。 C）剪掉剩余的颈部肌肉，使颅底暴露。按住头大开幕（枕骨大孔）在颅骨表面，使访问。小心地插入枕骨大孔的一对虹膜剪刀的尖底，并作出削减。对侧重复同样的动作。使用rongeurs扫清小脑周围的头骨。 图10。夹层。一）仔细沿着头骨的内表面滑动的剪刀。提起小费，你切割，以防止损害大脑。重复相同的对面。使用剥离颅骨rongeurs远离大脑。 B）插图的头骨和大脑暴露出来。 c）用锅铲在最前的位置大脑的嗅球和神经连接切断。小心地铲尖沿易于删除切断连接大脑底面。取出大脑，并将其放置在固定液小瓶。