التوسع في الدم المحيطي الإنسان خلايا T γδ باستخدام Zoledronate
Summary
تم وصف طريقة لتوسيع الخلايا التائية γδ من خلايا الدم المحيطية وحيدات النوى (PBMC). يتم تحفيز PBMC المستمدة من الخلايا التائية γδ وتوسيع استخدام zoledronate وانترلوكين 2 (IL – 2). ويمكن تطبيق توسيع نطاق كبير من الخلايا المناعية تي γδ لالخلوية ذاتي من السرطان.
Abstract
يمكن الإنسان γδ الخلايا التائية الاعتراف والاستجابة لطائفة واسعة من التوتر الناجم عن المستضدات ، وتطوير نشاط واسع وبالتالي الفطرية المضادة للورم ومكافحة العدوى. 1 غالبية الخلايا التائية γδ في الدم المحيطي لديها مستقبلات الخلايا التائية Vγ9Vδ2. هذه الخلايا الاعتراف المستضد بطريقة معقدة رئيسية مستقلة التوافق النسيجي وتطوير وظائف قوية والمستجيب لحل الخلايا مثل TH1 – 1 لذلك ، γδ الخلايا هي خلايا تي مرشحا جذابا المستجيب للعلاج مناعي السرطان. Vγ9Vδ2 خلايا تي الاستجابة لphosphoantigens مثل (E) – 4 – 3 – هيدروكسي ميثيل لكن – 2 – enyl بيروفوسفات (HMBPP) ، الذي يتم تصنيعه في البكتيريا عبر isoprenoid الحيوي ؛ 2 و بيروفوسفات isopentenyl (IPP) ، والتي يتم إنتاجها في الخلايا حقيقية النواة من خلال مسار mevalonate. 3 في حالة فسيولوجية ، وتوليد IPP في الخلية nontransformed لا يكفي لتنشيط الخلايا T γδ. التقلبات في مسار mevalonate في الخلايا السرطانية يؤدي إلى تراكم IPP وتنشيط خلايا تي γδ 3 لأن aminobisphosphonates (مثل pamidronate أو zoledronate) تمنع farnesyl سينسيز بيروفوسفات (FPPS) ، انزيم يعمل المصب من IPP في مسار mevalonate ، ومستويات من الخلايا ويمكن IPP sensitibity إلى الاعتراف γδ زيادة الخلايا التائية التي aminobisphosphonates علاجيا. IPP تراكم أقل كفاءة في خلايا nontransfomred من الخلايا السرطانية مع التركيز عقاقيري ذات الصلة من aminobisphosphonates ، التي تسمح لنا العلاج المناعي للسرطان عن طريق تنشيط خلايا تي γδ مع aminobisphosphonates 4 المثير للاهتمام ، IPP يتراكم في حيدات عندما يتم التعامل مع PBMC aminobisphosphonates ، وذلك بسبب كفاءة امتصاص الدواء من قبل هذه الخلايا. 5 حيدات التي تتراكم تصبح IPP مستضد تقديم الخلايا ويحفز الخلايا التائية Vγ9Vδ2 في الدم المحيطي. 6 وبناء على هذه الآليات ، قمنا بتطوير تقنية لتوسيع نطاق واسع من الثقافات γδ باستخدام الخلايا التائية zoledronate وانترلوكين -2 (IL – 2). 7 طرق أخرى لتوسيع نطاق الاستفادة من الخلايا التائية γδ في bromohydrin phosphoantigens الاصطناعية بيروفوسفات (BrHPP) 8 أو 2 – 3 – الميثيل – butenyl – 1 – بيروفوسفات (2M3B1PP) 9 وجميع هذه الأساليب تسمح السابقين فيفو التوسع ، مما أدى إلى أعداد كبيرة من الخلايا التائية γδ لاستخدامها في العلاج المناعي بالتبني. ومع ذلك ، zoledronate الوحيد هو كاشف وافقت عليها ادارة الاغذية والعقاقير متوفرة تجاريا. Zoledronate الموسع γδ الخلايا التائية عرض CD27 — CD45RA — المستجيب النمط الظاهري الذاكرة ويمكن تقييم وظيفتها بواسطة الإنترفيرون γ مقايسة الإنتاج 7.
Protocol
Discussion
الطريقة المعروضة هنا يمكن التوسع كفاءة الخلايا التائية γδ من PBMC. γδ تنشيط خلايا تي وتوسعت بنسبة zoledronate IL – 2 وتطوير وظائف المستجيب كاملة ، والتي تعكسها والإنتاج خلوى السمسة. وقد أفيد أن bromohydrin phosphoantigens الاصطناعية بيروفوسفات (BrHPP) و 2 ميثيل – 3 – butenyl – 1 – بيروفوسفات (2M3B1PP) أيض?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Reagent name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| ZOMETA | Novartis Pharma K. K | zoledronate | |
| PROLEUKIN | Novartis Pharmaceuticals | human recombinant IL-2 | |
| BD Vacutainer CPT Cell Preparation Tube with Sodium Heparin | BD | 362753 | |
| RPMI1640 | Invitrogen | 21870-076 | |
| ALyS203- medium | Cell Science & Technology Institute | 0301-7 | |
| OpTmizer | Invitrogen | 0080022SA | |
| brefeldin A | Sigma | B5936-200UL | |
| phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) | Sigma | P1585-1MG | |
| ionomycin | Sigma | 13909-1ML | |
| IntraPrep | BECKMAN COULTER | A07803 | |
| anti-human CD3-FITC or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07746 FITC A07749 PE/Cy5 |
|
| anti-human CD4-ECD | BECKMAN COULTER | 6604727 | |
| anti-human CD8-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607011 | |
| anti-human CD14-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07765 | |
| anti-human CD19-PE | BECKMAN COULTER | A07769 | |
| anti-human CD45-ECD | BECKMAN COULTER | A07784 | |
| anti-human CD56-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07789 | |
| anti-human TCRαβ-PE | BECKMAN COULTER | A39499 | |
| anti-human TCR Vγ9-FITC | BECKMAN COULTER | IM1463 | |
| anti-human CD27-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607107 | |
| anti-human CD45RA-ECD | BECKMAN COULTER | IM2711 | |
| anti-human CD69-PE | BD | 555531 | |
| anti-human NKG2D-PE | BECKMAN COULTER | A08934 | |
| Anti-humal IFNγ-PE | BECKMAN COULTER | IM2717U | |
| Mouse IgG1 isotype control-PE | BECKMAN COULTER | A07796 | |
| Mouse IgG1 isotype control-ECD or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07797 A07798 |
References
- Bonneville, M., O’Brien, R. L., Born, W. K. γ T cell effector functions: a blend of innate programming and acquired plasticity. Nat Rev Immunol. 10, 467-478 (2010).
- Hintz, M. Identification of (E)-4-hydroxy-3-methyl-but-2-enyl pyrophosphate as a major activator for human γδ T cells in Escherichia coli. FEBS Lett. 509, 317-322 (2001).
- Gober, H. J. Human T cell receptor γδ cells recognize endogenous mevalonate metabolites in tumor cells. J Exp Med. 197, 163-168 (2003).
- Kabelitz, D., Wesch, D., He, W. Perspectives of gammadelta T cells in tumor immunology. Cancer Res. 67, 5-8 (2007).
- Roelofs, A. J. Peripheral blood monocytes are responsible for gammadelta T cell activation induced by zoledronic acid through accumulation of IPP/DMAPP. Br J Haematol. 144, 245-250 (2009).
- Dieli, F. Induction of γδ T-lymphocyte effector functions by bisphosphonate zoledronic acid in cancer patients in vivo. Blood. 102, 2310-2311 (2003).
- Kondo, M. Zoledronate facilitates large-scale ex vivo expansion of functional γδ T cells from cancer patients for use in adoptive immunotherapy. Cytotherapy. 10, 842-856 (2008).
- Espinosa, E. Chemical synthesis and biological activity of bromohydrin pyrophosphate, a potent stimulator of human γδ T cells. J Biol Chem. 276, 18337-18344 (2001).
- Kobayashi, H. Safety profile and anti-tumor effects of adoptive immunotherapy using γδ T cells against advanced renal cell carcinoma: a pilot study. Cancer Immunol Immunother. 56, 469-476 (2007).
- Murali-Krishna, K. Counting antigen-specific CD8 T cells: a reevaluation of bystander activation during viral infection. Immunity. 8, 177-187 (1998).
- Sato, K. Impact of culture medium on the expansion of T cells for immunotherapy. Cytotherapy. 11, 936-946 (2009).
- Abe, Y. Clinical and immunological evaluation of zoledronate-activated Vγ9 γδT-cell-based immunotherapy for patients with multiple myeloma. Exp Hematol. 37, 956-968 (2009).
- Nakajima, J. A phase I study of adoptive immunotherapy for recurrent non-small-cell lung cancer patients with autologous γδ T cells. Eur J Cardiothorac Surg. 37, 1191-1197 (2010).
