사람의 체외에서 억제
Summary
Tregs는 면역 시스템의 강력한 진압하고 있습니다. 그들을 정의하는 독특한 표면 마커의 부족이있다, 그러므로, Tregs의 정의는 주로 기능입니다. 여기서 우리는 최적화된 설명을<em> 체외에서</emT1D 개발하기 위해 위험 과목 면역 불균형을 식별하는 능력> 검정.
Abstract
규제 T 세포 (Tregs)는 자기 항원에 면역 관용의 중요한 중재자입니다. 또한, 그들은 다음과 같은 감염 면역 반응의 중요한 규제하고 있습니다. Tregs의 독특한 표면 마커를 식별할 수 있도록 노력에도 불구하고, 유일한 고유 기능은 효과기 T 세포의 증식과 기능을 억제하는 능력이다. 그것은 체외의 assays 인간의 Treg의 기능을 평가에서 사용할 수있는 것이 분명이지만 건강한 세포와 세포가자가 면역 질환 (제 1 형 당뇨병 – T1D 등) 필요로하는 과목에서 격리 교차 단면 연구의 결과를 평가하면,이 문제가됩니다 비교합니다. 응답 비율과 항원 제시 세포의 수와 유형 (APC)는 체외 억제의 assays 인간의 사용 : 응답 T 세포, 자극의 자연과 강도, Treg의 수와 유형 실험실 사이 큰 변화가있다. 이 변화는 Treg 함수가 어려운 측정 연구 사이의 비교를합니다. Treg 필드는 건강한 과목과 면역 질환있는 사람 모두 잘 작동하는 표준 억제 분석이 필요합니다. 우리는 췌장 β – 세포의 면역 파괴를 기본과 과목에 비해 건강한 지원자에서 격리 T 세포의 자극에 아주 작은 내부 분석 변화를 보여줍니다 체외 억제 분석에을 개발했습니다. 이 작품의 주요 목표는 서로 다른 주제 그룹 간의 비교를 허용 체외 인간 억제 분석에 대해 설명하는 것입니다. 또한이 분석은 기능을 nTreg의 작은 손실을 윤곽을 그리다하고 앞으로 손실, 예방 immunomodulatory 치료 1에서 혜택을 누릴 수 있으므로 식별 과목을 예상할 수있는 잠재력이있다. 아래, 우리는이 절차에 관련된 단계 철저한 설명을 제공합니다. 우리는 Treg 기능을 측정하는 데 사용되는 체외 억제 분석에의 표준화에 기여할 수 있도록 최선을 다하겠습니다. 또한, 우리는 면역 불균형의 초기 상태와 T1D에 대한 잠재적인 biomarker 기능을 인식하는 도구로 분석을 제공합니다.
Protocol
Discussion
Tregs 수있는 유일한 고유 기능으로, 진압 기능은 동일한 시간과 여러 연구 사이의 질병 개발의 다른 단계에서 과목 사이에 안정적으로 균일하게 테스트해야합니다. 우리는이 분석의 표준화로 우리의 기여로 저희 연구실에서 개발된 억제 분석의 세부 사항을 제공합니다. 우리의 광범위한 최적화 연구에서는, 우리는 안티 – 인간 인 경우에는 3 번 CD – 코팅 구슬 (APC로 PBMC와 함께 1μg/ml의 농도 UCHT1 복…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 위스콘신과 위스콘신의 어린이 연구소 소년 Diabetesat 메디컬 칼리지에 대한 최대 맥기 국립 연구소에 의해 지원되었다. funders는 연구 설계의 데이터 수집과 분석, 또는 원고의 준비를 전혀 역할을 없었다.
Materials
| Name of the reagent or instrument | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Ficoll-Paque PLUS | Amersham Pharmacia Biotech | 17-1440-03 | |
| DPBS-1X | Gibco | 14190-144 | |
| Trypan Blue | Invitrogen | 15250-061 | |
| anti-CD4 microbeads | Miltenyi | 130-045-101 | |
| Pre-separation filters | Miltenyi | 130-041-407 | |
| LS column | Miltenyi | 130-042-401 | |
| EDTA | Invitrogen | 15575-020 | |
| BSA | Sigma-Aldrich | B4287 | |
| Anti-human CD4-APCCy7 (clone RPA-T4) | BD Pharmingen | 557852 | |
| Anti-human CD25-PE (clone M-A251; IL-2Rα) | BD Pharmingen | 555432 | |
| Anti-human CD8-FITC (clone RPA-T8) | BD Pharmingen | 555366 | |
| Anti-human CD14-FITC (clone M5E2; LPS receptor) | BD Pharmingen | 555397 | |
| Anti-human CD32-FITC (clone FLI8.26; FcγR-type II) | BD Pharmingen | 555448 | |
| Anti-human CD116-FITC (clone M5D12; GM-CSFRα chain) | BD Pharmingen | 554532 | |
| Dynalbeads M-450 tosylactivated | Invitrogen | 140-13 | |
| Anti-human CD3 | Ancell | 144-024 | |
| Buffer1 | Homemade | 0.1M Na2B4O7 pH7.6 | |
| Buffer2 | Homemade | PBS/2mM EDTA/ 0.1% BSA pH7.4 | |
| Buffer3 | Homemade | 0.2M Tris/0.1% BSA pH8.5 | |
| Complete RPMI media | Homemade | RPMI 1640 media 2 mM L-glutamine 5 mM HEPES 100 U/μg/ml peni/strept 0.5 mM sodium pyruvate | |
| [3H] thymidine | Perkin Elmer | NET027Z005MC | |
| human pooled AB serum | Atlanta Biologicals | S40110 | |
| Multiscreen harvest plate | Millipore | MAHFC1H60 | |
| Microscint 20 | Perkin Elmer | 6013621 |
References
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