Характеризуя травоядным механизмы сопротивления: Spittlebugs на Brachiaria Sрр. как пример

1. Растения Одноместный черенки вытекают из взрослых растений используют в качестве экспериментальной единицы. Черенки обрезают на 10 см, чтобы обеспечить единообразие посадочного материала. Для предотвращения загрязнения патогенов растений, черенки промывают в 3% раствор гипохлорита натрия в течение 2 мин, а затем промыть thoughroughly с водопроводной водой. Каждый резки посадили в ок. 36 г стерильной почве в цилиндрическую трубу ПВХ (5,3 см Внешний диаметр от 6,5 см высотой) запечатанный в нижней части с пенополистирола чашка, максимум с втулкой из ПВХ. Резка проводится на месте с помощью пены кольца помещен в центральное отверстие втулки. Растения оплодотворяются и поливают по мере необходимости для поддержания адекватного уровня влажности почвы. Растения будут расти в течение одного месяца, прежде чем оспорено насекомых, позволяя развитию поверхностных корней, которые служат в качестве места для кормления корневой ксилемы грудью нимф spittlebug. ПВХ трубы с укоренившиеся черенки обращены на 8 дней до начала заражения, чтобы стимулировать дальнейший рост поверхностные корни, частично с поправкой на врожденные различия в корне архитектуры. Этот шаг требует искусственного источника света, которые мы предоставляем на 24 часа в сутки. Чтобы избежать смешанных побег из herbivory с травоядное сопротивление, отдельного растения повторяет с мало или совсем нет поверхностные корни после этой инверсии лечения исключаются из эксперимента. Это исключение должно быть редко, никогда не приводит к устранению генотип которых они представляют. 2. Насекомые Взрослый spittlebugs собираются с поля, чтобы определить виды, и ввел в яйцекладки клетки, где они предусмотрены листвы восприимчивых brachiariagrasses питаться. Самки откладывают яйца в почву, содержащиеся в мелкой съемный лоток помещается на дне клетки. После нескольких дней, почва, взвешенных в воде и пропускают через ряд сит (42, 60 и 150 меш) для сбора яиц. Приостановка просеивается материал в 30% солевой раствор приводит к тому, зрелых яйцеклеток плавать, оставляя за собой незрелые яйца и остаточных органических веществ. Для предотвращения порчи насекомыми патогенные микроорганизмы, яйца дезинфицируют в 0,5% раствор гипохлорита натрия в течение 5 мин, затем ополаскивают дистиллированной водой. Каждый тест завод (экспериментальные единицы) зараженных на поверхности почвы с шестью зрелые яйца. Только зрелые яйца близка к штриховки выбраны для инвазии. Они могут быть идентифицированы по наличию двух красных точек в передней части, соответствующие глаз насекомого; розовый знаков в их задней части, соответствующие животе насекомых, а также полностью расширена крышечкой. Успешное вылупление подтверждено 4 дней спустя, и в этот момент какой-либо невылупившиеся яйцо заменяется новорожденного spittlebug из нашей колонии. Испытание заводы расположены в рандомизированных полный дизайн блока с шестью репликаций в генотипе. 3. Оценки Эксперимент оценивается ок. 30 дня после заражения (точное время зависит от видов насекомых изучал). Ущерб оценивается по 1 до 5 визуальной шкале, где 1 соответствует никаких видимых повреждений и 5 соответствует мертвых растений (рис. 1). Подсчет очков повреждения растений позволяет оценить толерантность. Рисунок 1. Повреждение шкале, используемой для оценки толерантности к spittlebug herbivory в Brachiaria sрр. 1 = не обнаружено повреждений, 2 = 0-25% некротических листвы; 3 = 25-50% некротические листья, 4 = 50-75% некротических листвы; 5 = 75-100% некротических листвы. Насекомые выживания оценивается путем подсчета насекомых идущие либо их окончательного возраста или взрослого на стадии (рис. 2). Подсчет очков для борьбы с насекомыми выживания позволяет оценить антибиоз. Рисунок 2. Spittlebug развития от первой стадии (слева) для взрослых (справа). Только насекомых достижения по крайней мере их окончательной стадии (стрелки) на дату оценки учитываются как "пострадавших". 4. Представитель результаты Результаты анализа представитель скрининга Brachiaria гибридов на устойчивость к spittlebug Aeneolamia reducta представлены на рисунке 3. Рисунок 3. Результаты скрининга Brachiaria гибридов на устойчивость к spittlebug Aeneolamia reducta. Мы считаем, растений, устойчивых, если их ответ на herbivory падает в нижнюю половину этого участка. Антибиоз увеличивается справа налево и терпимости увеличивается сверху вниз. Стрелки указывают на наши устойчивые проверок.