عزل خلايا المناعة وظيفية القلب
Summary
هذا الأسلوب لعزل الخلايا المناعية وظيفية من القلب ويوفر بديلا للأساليب التقليدية للكولاجيناز الهضم ، والذي يسبب تنشيط الخلايا المناعية غير المرغوب فيها ، مما أدى إلى انخفاض في استجابة هذه الخلايا. لدينا وسيلة لعزل الخلايا المناعية وظيفية غلة القلب عن طريق تجنب المشاكل المرتبطة الهضم الأنزيمي.
Abstract
الخلايا المناعية القلب تكتسب الفائدة على الدور الذي تلعبه في تغيير بنية مرضية في العديد من أمراض القلب 1-5 هذه الخلايا المناعية ، والتي تشمل الخلايا البدينة ، وخلايا تي الضامة ؛ تخزين وإطلاق مجموعة متنوعة من الوسطاء بما في ذلك النشطة بيولوجيا والسيتوكينات وقد ثبت البروتياز مثل تريبتاز 6-8 هؤلاء الوسطاء أن اللاعبين الرئيسيين في عملية الأيض المصفوفة خارج الخلية من خلال تفعيل metalloproteinases مصفوفة أو التسبب في تراكم الكولاجين بواسطة وظيفة القلب الليفية "تحوير 9-11 ومع ذلك ، التقنيات المتاحة لعزل الخلايا المناعية والقلب كانت مشكلة لأنها تستخدم كولاجيناز البكتيرية لهضم أنسجة عضلة القلب. هذا الأسلوب يؤدي تنشيط الخلايا المناعية وبالتالي فقدان وظائف. وضعنا على سبيل المثال ، تصبح الخلايا البدينة القلب بشكل ملحوظ أقل استجابة للمركبات التي تسبب تحبب (12). لذلك ، وهي تقنية تسمح للرانه عزل خلايا وظيفية قلبية المناعية التي من شأنها أن تؤدي إلى فهم أفضل لدور هذه الخلايا في أمراض القلب. 13 ، 14
يتطلب هذا الأسلوب في ألفة مع المكان التشريحي للفأر الخنجري الإبطين ، وعملية الرباط المنجلي ، وتأمور القلب. هذه هي معالم هامة لزيادة نجاح العملية وضمان عائدات أعلى من الخلايا المناعية في القلب. ويمكن بعد هذه الخلايا المناعية القلب المعزولة أن تستخدم لتوصيف النمط الظاهري ، وظائف ، والنضج ، وشارك في التجارب مع ثقافة خلايا القلب وغيرها للحصول على فهم أفضل لتفاعلاتها.
Protocol
Discussion
هذا الأسلوب من عزل الخلايا المناعية القلب تمكن من تحليل وظيفتها ، النمط الظاهري ، والنضج دون تفعيل غير المرغوب فيها التي تحدث عادة خلال التقليدية الأنزيمية الهضم تقنية العزل. متوسط العدد الكلي للخلايا التي تم الحصول عليها مع هذا الأسلوب هو حوالي 400،000 في قلب فأ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل شركة ميرك UNCF – زمالة دراسات عليا بحوث العلوم أطروحة (JLM) ، القومي للقلب والرئة والدم المعهد منح RO1 – HL – 62228 (JSJ) وRO1 – HL – 073990 (JSJ).
Materials
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| Hanks’ Balanced Salt | Sigma | H4891 | One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt Solution as a part of the procedure. |
| Antibiotic- Antimyotic | Gibco | 15240-062 | |
| HEPES | Sigma | H3784 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma | A3912 | |
| 250 mL Nalogene Filter Bottle | Thermoscientific | 157-0020 | |
| 12 N HCL | Fisher Scientific | CAS 7647-01-0 | For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water. |
| 10 N NaOH | Fisher Scientific | SC267 | For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water. |
| Double Distilled Water |
Table of Specific Equipment:
| Name of Reagent and Equipment | Company | Catalogue Number | Comments |
| 3-O Suture Silk Braided | Ethicon Products | SA64H | |
| Small Animal Ventilator | CWE Incorporated | SAR-830 | Set breathing rate to 40.5 breaths per min. |
| Bevel 18 gauge needle | BD Biosciences | 305199 | Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube. |
| Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter | Baxter | 2N111 | Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4. |
| 10 cc syringe | Fisher Scientific | 14-823-16B | |
| 15 mL Falcon Tubes | BD Biosciences | 352097 | |
| Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge | Fisher Scientific | 75-004-377 | Remember to pre-cool and keep at 4°C. |
| Hyclone | Thermoscientific | S300030.02 | |
| Hemocytometer | Hausser Scientific | HS-LB-1483 |
References
- Brower, G. L., Chancey, A. L., Thanigaraj, S., Matsubara, B. B., Janicki, J. S. Cause and effect relationship between myocardial mast cell number and matrix metalloproteinase activity. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 283, H518-H525 (2002).
- Brower, G. L., Janicki, J. S. Pharmacologic inhibition of mast cell degranulation prevents left ventricular remodeling induced by chronic volume overload in rats. Journal of Cardiac Failure. 11, 548-556 (2005).
- Chancey, A. L., Brower, G. L., Janicki, J. S. Cardiac mast cell-mediated activation of gelatinase and alteration of ventricular diastolic function. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 282, H2152-H2158 (2002).
- Levick, S. P., Gardner, J. D., Holland, M., Hauer-Jensen, M., Janicki, J. S., Brower, G. L. Protection from adverse myocardial remodeling secondary to chronic volume overload in mast cell deficient rats. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 43, 56-61 (2008).
- Levick, S. P., McLarty, J. L., Murray, D. B., Freeman, R. M., Carver, W. E., Brower, G. L. Cardiac Mast Cells Mediate Left Ventricular Fibrosis in the Hypertensive Rat. Hypertension. 53, 1041-1047 (2009).
- Batista, M. L., Santos, R. V., Cunha, L. M., Mattos, K., Oliveira, E. M., Seelander, M. C. Changes in the pro-inflammatory cytokine production and peritoneal macrophage function in rats with chronic heart failure. Cytokine. 34, 284-290 (2006).
- Galli, S. J., Tsai, M. Mast Cells: Versatile regulator of inflammation, tissue remodeling, host defense and homeostasis. Journal of Dermatological Science. 49, 7-19 (2008).
- Yndestad, A., Holm, A. M., Muller, F., Simonsen, S., Froland, S. S., Gullested, L. Enhanced expression of inflammatory cytokines and activation markers in T-cells from patients with chronic heart failure. Cardiovasc. Res. 60, 141-146 (2003).
- Bozkurt, B., Kribbs, S. B., Clubb, F. J., Michael, L. H., Didenko, V. V., Hornsby, P. J. Pathophysiologically Relevant Concentrations of Tumor Necrosis Factor-ɑ Promote Progressive Left Ventricular Dysfunction and Remodeling in Rats. Circulation. 97, 1382-1391 (1998).
- Frangogiannis, N. G., Lindsey, M. L., Michael, L. H., Youker, K. A., Bressler, R. B., Mendoza, L. H. Resident Cardiac Mast Cells Degranulate and Release Preformed TNF-ɑ, Initiating the Cytokine Cascade in Experimental Canine Myocardial Ischemia/Reperfusion. Circulation. 98, 699-710 (1998).
- Jobe, L. J., Melendez, G. C., Levick, S. P., Du, Y., Brower, G. L., Janicki, J. S. TNF-α inhibition attenuates adverse myocardial remodeling in a rat model of volume overload. Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 297, H1462-H1468 (2009).
- Forman, M. F., Brower, G. L., Janicki, J. S. Spontaneous histamine secretion during isolation of rat cardiac mast cells. Inflammation Research. 53, 453-457 (2004).
- Levick, S. P., Murray, D. B., Janicki, J. S., Brower, G. L. Sympathetic nervous system modulation of inflammation and remodeling in the hypertensive heart. Hypertension. 55, 270-276 (2010).
- Morgan, L., Levick, S., Voloshenyuk, T., Murray, D., Forman, M., Brower, G. A novel technique for isolating functional mast cells from the heart. Inflammation Research. 57, 241-246 (2008).
