돌기 세포의 이해의 항원과 T 세포 항원 처리를 제시 면역 기관으로 마이 그 레이션. Qdot nanocrystal 라벨은 오랫동안 안정 형광 신호를 제공합니다. 이것은 형광 현미경에 의해 다른 기관에 돌기 세포 추적하실 수 있습니다.
돌기 세포 (DCS)는 주변 조직과 같은 thymus, 골수, 비장, 림프절과 Peyer의 패치를 1-3으로 면역 장기에서 발견 항원 제시 세포 전문 (APCs)입니다. DC가가 주변 조직 샘플에 그들이 걸릴 프로세스 및 주요 histocompatibility 분자 (MHC)의 맥락에서 그들의 표면에있는 항원의 존재에 대한 유기체를 제시한다. 그런 다음, 항원 – 로드된 DC가들은 특정 면역 반응을 실행 T lymphocytes로 처리 항원을 제시 면역 장기로 마이 그 레이션. DC가의 철새 기능을 평가하는 한 가지 방법은 형광 염료 4 그들을 분류하는 것입니다.
즉결 우리는 murine 골수 파생 DC 레이블을 Qdot 형광 nanocrystals의 사용을 보여줍니다. 이 분류의 장점은 Qdot nanocrystals가 회복 조직에 표시된 세포를 검출에 이상적하게 안정적이고 오래 지속 형광을 가지고있다. 이것을 달성하기 위해, 최초의 세포는 DC의 차별을 유도하기 위해 murine 뼈 marrows에서 발견한 및 과립구 대식 세포 콜로니 자극 인자 -의 존재에 8 일 동안 교양 것입니다. 이러한 전지는 다음 체외 보육의 짧은하여 형광 Qdots이 표시됩니다. 스테인드 세포는 형광 현미경과 시각 수 있습니다. 세포는이 시점에서 실험 동물에 주입 수있다 또는 염증성 자극과 함께 체외 보육시 성숙한 세포로 수 있습니다. 우리 손에, DC의 성숙은 형광 신호의 손실을 결정 안이나 Qdot의 얼룩은 DC가의 생물 학적 특성에는 영향을 미치지 않습니다. 주입시 이들 세포는 전형적인 해부와 고정 절차를 다음과 형광 현미경에 의해 면역 장기에서 확인할 수 있습니다.
T 세포 상호 작용 또는 DC 개발 및 다양한 질병 9-11에서 역할을 결정 : DC를 조사, Murine 골수양) DC가이 광범위 DC 기반의 백신의 효능 및 개선을 결정하기 위해 사용되었습니다. 즉결 우리는 tibias 및 대퇴골 뼈 marrows에서 발견한 엽 성의 전구 물질에서 DC가를 생성하는 방법을 보여줍니다. 우리는 따라서 오염의 가능성을 줄이고, 우리가 에탄올 70%에 잠수하여 그들을 소독 수 있도록 도움말을 절단하지 않고 뼈를 복구합니다. 골수 세포에서 DC가을 차별화하는 데 우리는 이전에 설명한 5 GM – CSF를 사용합니다. 일부 프로토콜은 또한 IL – 4를 사용하지만, 그것은 GM – CSF 12 높은 수준의 작업을 때이 시토킨가 필요 없다는보고되었습니다. 사실, 우리는 이전에 다음과 DC가이 면역 반응 13 유도 할 수 있다고 증명하고있다. 또한, 관심이 첨부된 세포가보다 단핵구와 같은 표현형을 보여 이후 매체와 배양 접시를 세척하여 8 일간의 문화에서 불과 느슨하게 자기편 세포를 복구하는 데주의가 필요하다. 여기 형광 Qdot 입자와 DC가의 라벨을 보여줍니다. 이 레이블은 다른 방법을 몇 가지 장점을 존중하고 있습니다. 첫째, Qdots 입자는 쉽게 세포에 포함됩니다. 둘째, 형광 신호가 매우 높은 및 DC 성숙에 의해 변경되지 않습니다. 세포 또는 조직이 GFP가 얼룩 프로토콜을 선택하는 순간에 더 많은 유연성을 제공, DC가 14 태그를 사용하면 어떻게 반대로 같은 아세톤과 같은 용매와 고정하는 경우 셋째, 형광가 손실되지 않습니다. 마지막으로,이 입자에 의해 주어진 높은 형광 신호는 조직 자동 형광에도 불구하고 세포의 시각화 수 있습니다. 이전 6 설명한 바와 같이, Qdot의 얼룩이 세포의 성숙 기능에 영향을주지 않았다. 즉결 우리는 Qdot 묻은 DC가이 costimulatory 분자를 upregulating하고, 염증성 자극에 대한 응답으로 IL – 6와 질산 산화물을 생산, 비 – 스테인드 DC가 같은 유사한 방식으로 동작한다는 것을 보여주기. DC가이 면역 반응을 트리거링 전문 세포가 있지만, 그들은 이러한 암, 죽상 경화증 4, 15, 16과 같은 병적인 조건에 참여하는 표시되었습니다. 그들은 또한 구조적도 새로운 혈관 19, 20 개발에 참여하는 등 제안 angiogenic 과정 17, 18,에 참여하는 주장했습니다. 따라서, DC는 생체내에서 추적하고, 다른 조직 4 21 그들의 지리적 지역화를 결정하는 허용 방법은, 22 매우 가치가 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 그랜트 R15 CA137499 – 01 (FB)와 오하이오 대학교 (FB)에서 시작 기금에서 NIH에 의해 부분적으로 지원.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
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C57BL/6 mice | Jackson laboratories | Females, 6-8 weeks old | |
RPMI | Invitrogen | 11875-119 | |
Fetal bovine serum, qualified | Invitrogen | 10437-028 | |
Antibiotic-antimycotic | Invitrogen | 15240-096 | |
PBS | Invitrogen | 10010-049 | |
ACK Lysing Buffer | Lonza Walkersville, Inc | 10-548E | |
Recombinant murine GM-CSF | PeproTech Inc | 315-03 | |
Qtracker 655 Cell Labeling Kit | Invitrogen | Q25021MP | |
Lipopolysaccharide | Invivogen | tlrl-eblps | |
Recombinant murine TNF alpha | Peprotech | 315-01A | |
CD86 antibody | BD Biosciences | 553691 | |
CD40 antibody | BD Biosciences | 553791 | |
Griess reagent system | Promega | G2930 | |
IL-6 capture antibody | eBioscience | 13-7061-81 | |
IL-6 detection antibody | eBioscience | 13-7062-81 |