Variantes de agua poco profundos (para niños) de las pruebas de laberinto de agua en ratones

1. Las piscinas infantiles Oxford La piscina infantil se ha realizado de acuerdo con tres diseños sucesivos, Mc 1-3. Todos emplear aguas poco profundas (2 cm) contenidos en una base blanca (para aumentar su aversión), que está rodeado por paredes transparentes hechas de plexiglás o plástico acrílico transparente. Estos tienen salidas de verdadero / falso establecidos en ellos. Los falsos salidas están ocluidos por los tapones negros de madera pintados, mientras que la verdadera salida es abierta y se unió a un tubo de plástico negro que se puede quitar con el ratón en el interior. El ratón se regresó con rapidez y de forma no traumática a su jaula, mientras que en el interior del tubo. Después de la primera publicación de la piscina infantil, se informó de que el regreso a la jaula era también un motivador efectivo para el aprendizaje del laberinto Lashley III 2. La temperatura del agua de 20 a 25 ° C se utiliza. 20 a 21 ° C es ideal, se ha observado que algunos ratones parecen menos motivados a temperaturas más altas. contenido "> El primer laberinto 5 era circular. Sin embargo, a veces los ratones (en particular los que tienen lesiones en el hipocampo) parecen no notar el tubo de salida abierta. Un diseño octogonal, con los tubos de salida colocados en las esquinas con el fin de atraer la atención de los ratones, mejorado en gran medida este problema. Sin embargo, la tasa de error en el funcionamiento oportunidad sería 4/trial, en oposición a 6/trial con el diseño circular 12 de tubo. Por lo tanto una piscina dodecagonal se utiliza ahora con 11 falsa y 1 verdadera salida situado en los ángulos formados por las intersecciones de las paredes. 1.1. Evolución y características de las piscinas para niños Mc 1, una piscina circular de 85 cm de diámetro con 12 salidas de verdadero / falso (Figura 1). Mc 2, una piscina octogonal de 86 cm de diámetro con 8 salidas de verdadero / falso establecidos en las esquinas. Mc 3, una piscina dodecagonal (12 lados) 120 cm de diámetro con 12 verdadero / falso salida establecidos en el maízres (Figura 4). En todo lo anterior (y el laberinto infantil, véase más adelante) de los tubos de salida fue de 40 mm de diámetro. Sin embargo, se dio cuenta de que de vez en cuando a los ratones se mostraban reacios a entrar en ellos, y el rendimiento de control en el laberinto a veces sumergir después de haber estado respondiendo bien. Por lo tanto, y teniendo en cuenta la facilidad con que entraron en el aparato de madriguera (ver publicación JOVE "Evaluación de madriguera, la construcción del nido y el acaparamiento en ratones"), además de que los orificios de salida en el laberinto de Barnes son de 50 mm de diámetro, se consideró si el 40 mm era demasiado pequeña. Una prueba se llevó a cabo en la jaula de alojamiento de seis ratones C57BL / 6. (Se parecen más dispuestos a entrar en 40 tubos mm en la jaula como presumiblemente el estrés es menor aquí que en una pieza del aparato, por lo que hace el examen de la jaula reduciría al mínimo las diferencias de entrada si los tubos más pequeños fueron ligeramente aversivo, haciendo que la probar más conservador). Dos tubos de 40 mm y dos tubos de 50 mm se colocaron en el suelo en unmodelo de alternancia. Como se predijo, hubo más entradas en tubos de 50 mm (28 entradas) de 40 mm (9 entradas). Por lo tanto se han previsto pruebas piloto en un laberinto Y nueva con tubos de salida de 50 mm, y si esto tiene éxito los viejos tubos de 40 mm en la piscina dodecagonal y remar laberinto Y serán reemplazados por nuevos 50 mm queridos. A medida que la piscina infantil, infantil del laberinto y la novedad espacial del laberinto son todas las pruebas espaciales, basándose en las señales de las habitaciones que el ratón ve a través de las paredes transparentes del aparato, la habitación debe estar bien amueblada con señales distintivas (por ejemplo, estanterías, armarios, formas de plástico negro en las paredes). 2. Ejecución de la Piscina para niños Coloque un ratón en el centro de la piscina frente a una de cuatro posiciones en el perímetro (9, 12 o tres si el tubo de escape es a las 6 horas). La colocación es semi-aleatoria; un máximo de tres ensayos consecutivos, puede ser en la misma dirección. Esto puede ser difícil de lograr en la práctica, porque comoaprendizaje procede de los ratones tienden a orientarse hacia la salida correcta, ya que se bajan a la piscina por la cola. Si lo hacen fuerte no debe hacerse ningún intento de forzarlos en la posición prevista, ya que son simplemente demostrando aprendizaje. Suelte cuando están justo por encima del agua, como entonces se les cae y al instante saben que ya no están detenidos. Poco a poco la liberación de los resultados de los que luchan por liberarse y esto puede poner en peligro la orientación inicial. Esto también se aplica a el laberinto infantil. Longitud máxima del ensayo es de 60 seg. Si el ratón no puede escapar de ese entonces, guiar manualmente a la salida con un par de palas de metacrilato transparentes, cada una mide aproximadamente 30 x 20 cm. Las medidas adoptadas son el tiempo para encontrar la salida (definición: toda la cabeza dentro del tubo) y los errores. Los errores se definen como que no superen la longitud de la cabeza de un tubo (incluida la salida real). Al pasar cerca de la salida real, sin entrada, por lo general me ocurrenfrequently después de los primeros ensayos. Aunque se puede argumentar que este es un problema, una visión alternativa es que los ratones con deficiencias en la cognición espacial hacen esto porque no saben que hay una salida por allí. Controles saben, y por lo tanto investigar más a fondo. Un techo de errores 11 / ensayo se impone en el número de errores en el análisis, para evitar demasiado corte de los datos. Esto mitigar frente a un déficit que se encuentra en ratones espacialmente con discapacidad, es decir, es una medida conservadora. Los ratones que no logran llegar a la salida en 60 segundos se les asigna una puntuación de 11 errores de ese juicio. Así que 60 veces 11 seg siempre tienen errores. 3. El Remando del laberinto Para simplificar el procedimiento de piscina infantil y el aparato se decidió experimentar con un laberinto Y, operado de acuerdo con los mismos principios que las piscinas infantiles. El aparato consiste en tres brazos de poliestireno transparente o de plexiglás, cada 30x 8 x 20 cm. Este está montado sobre una base blanca (Figura 7). Blanco fue elegido para maximizar la repulsión que causa el color del piso y así alentar a escapar de las aguas poco profundas (2 cm de profundidad). Al igual que en el laberinto de agua, sólo hay una salida verdadera, con los otros dos brazos que termina en salidas falsas que tienen el mismo aspecto desde el interior del laberinto (Figura 8). Ejecución del remo del laberinto Coloque un ratón en el extremo de uno de los brazos cerrados, de espaldas a la central. La secuencia de las armas elegidas como la posición inicial se define por una secuencia semi-aleatoria, no más de tres ensayos consecutivos con la misma posición, y un número igual de los brazos izquierdo o derecho. Cada prueba dura 60 segundos. Si el ratón no puede salir (toda la cabeza en el tubo de salida) dentro de este tiempo alentar a que entre en el brazo con la ayuda de una pieza de metacrilato transparente. La base del brazo de salida está bloqueada por el metacrilato y el ratón permitido encuentra a la salida por sí mismo; estedeberían alentar un mejor aprendizaje de empujar las cosas bien en el tubo. Pero esto puede ser necesario recurrir a si el ratón se resiste a entrar en el tubo después de 15 seg. Tome medidas del tiempo total para salir y el número de errores (todo el cuerpo excepto la cola entra en un brazo a ciegas). Calificación del remo del laberinto Hay dos definiciones de un juicio correcto: en primer lugar, uno en el que el ratón se encuentra en la salida de <60 seg y no hace entradas en los brazos ciegos, con errores se anotó si se introducen y / o brazos ciegos si la salida no se encuentra dentro de 60 seg. Este análisis confunde fracasos para comenzar a moverse con errores en entradas en los brazos. En segundo lugar, un análisis de los ensayos que hace hincapié en la capacidad cognitiva se puede realizar mediante la exclusión, por cada ratón, todos los ensayos en los que el ratón no salió del brazo de partida dentro de los 60 segundos (es decir, eliminar los 0 puntuaciones 60) y luego calcular el% correcto del restantes ensayos. 4. Dos tipos de Y-laberintoConjunto 1. Aparato Cuando se construye un laberinto Y para niños, es útil incorporar dos puertas para permitir que se ejecute como un (seco) espacial novedad experimento de memoria 6 (Figura 13). Una puerta de guillotina transparente cubre el orificio de salida en la pared de extremo del brazo de salida, mientras que una puerta de guillotina opaca se puede insertar para sellar de un brazo de los otros dos durante la fase de muestreo de la prueba. Es importante que los corredores de estas puertas no están al alcance de los ratones, ya que de lo contrario pueden desviar su atención porque están potenciales rutas de escape. Lo ideal es que deben extenderse 7 cm hacia abajo desde la parte superior de la pared del laberinto. 2. Puesta en marcha Coloque una (0,5 cm) de la capa delgada de madera material de cama de chips en el suelo de el laberinto. Esto se redistribuye entre las dos fases de prueba para ratones individuales, y entre los ratones. Para las mejores prácticas, para hacer el ambiente olfativo more similar para los primeros frente a los ratones posterior, coloque uno o dos ratones no experimentales en el laberinto durante unos minutos antes de que comience el experimento. 3. Procedimiento Con el brazo de salida bloqueada por la puerta opaca y su orificio de salida bloqueada por la puerta transparente, coloque el puntero del ratón en el grupo de inicio (uno de los dos brazos sin salir del laberinto) y deje que explore durante 5 min. A continuación, eliminarlo, levantar la puerta opaca para permitir el acceso a las tres armas, reemplazarlo en el grupo de inicio y observarlo durante 2 min. Anote el número de entradas y el tiempo pasado en cada brazo. Los ratones de control deben recordar que las primeras dos brazos, y pasar más tiempo en el brazo antes eran inaccesibles.