마우스의 이미지 세균 감염에 루시페라제를 사용하여
Summary
생활 동물 세균성 감염의 bioluminescence 이미징을위한 방법은 설명되어 있습니다. 병원균은 살아있는 동물에 감염 광학 온 몸이 이미징을 허용 루시페라제 표현을 수정합니다. 동물 모델은 루시페라제 표현 병원균에 감염과 질병의 발생 과정은 bioluminescence 이미징에 의해 실시간으로 시각하실 수 있습니다.
Abstract
이미징은 생물 학적 과정을 모니터링하는 데 사용할 수있는 가치있는 기술입니다. 특히, 암 세포, 줄기 세포, 특정 면역 세포 유형, 바이러스 병원균, 기생충 및 박테리아의 존재는 동물 1-2 생활 내에서 실시간으로 따라 수 있습니다. 병원균의 연구에 bioluminescence 이미징의 응용 3-4 동물 모델에서 감염의 분석을 위해 기존의 전략에 비해 장점이 있습니다. 감염은 병원균의 위치와 수량을 결정하기 위해 안락사를하지 않고, 시간이 지남에 따라 각각의 동물 이내 시각하실 수 있습니다. 광학 이미징 오히려 이전에 감염된 것으로 알려져 사이트의 샘플링보다, 모든 조직과 기관의 종합적인 시험을 수 있습니다. 또한, 특정 조직에 접종의 정확성 직접 사전에 실패는 전체 실험에 걸쳐 주사했다 앞으로 동물을 운반하는 결정하실 수 있습니다. 이미지는 각 동물이 개별적으로 따라야하는 수 있기 때문에 동물 사이의 변화가에 대해 제어할 수 있습니다. 이미징 크게 때문에 3-4 병원체 부하를 확인하기 위해 샘플 조직하지 않고 많은 시간이 지점에서 데이터를 얻을 수있는 능력을 필요로 동물의 숫자를 줄일 수있는 잠재력이있다.
이 프로토콜은 루시페라제을 표현하는 박테리아의 재조합 변종에 대한 bioluminescence 이미징을 사용하여 살아있는 동물에 감염을 시각화하는 방법을 설명합니다. 클릭 벌레 (CBRLuc)와 반딧불 luciferases (FFluc)는 기판 5-6로 luciferin을 활용한다. CBRluc와 FFluc 모두에 의해 만들어진 빛이 살아있는 동물 모델 7-9에서 광학 이미징 이러한 luciferases 훌륭한 기자 만들기, 500 nm의 700 nm의 파장에 대한 광범있다. 600 NM보다 빛의 파장은 헤모글로빈에 의해 흡수를 방지하고, 따라서, 효율적으로 포유 동물 조직을 통과하는 데 필요한 때문에 주로이다. 루시페라제는 유전자 빛의 신호 10 생산하는 세균에 소개됩니다. 마우스 실시간으로 감염 모니터링을 허용하는 intratracheally 발광 생물 박테리아와 주사 폐 있습니다. luciferin 주입 후, 이미지가 IVIS 이미징 시스템을 사용하는 인수입니다. 이미징 동안 마우스 XGI – 8 가스 Anethesia 시스템을 사용하여 isoflurane과 anesthetized 있습니다. 이미지가 집중하고 각각의 세균 감염 사이트 (S)과 전화 번호를 나타내는 신호 소스를 수치 분석하실 수 있습니다. 이미징 후, CFU 결정은 박테리아의 존재를 확인하는 균질 조직에서 수행됩니다. 박테리아의 여러 복용은 발광과 세균 숫자를 상관 관계를 규정하는 데 사용됩니다. 이미징은 항균 화합물과 백신의 효능의 pathogenesis 및 평가 연구에 적용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이러한 프로토콜을 다음과 같은 일반적으로 고품질 이미지를 얻을 수 있지만, 그것은 영상 연구에서 정확하고 일관된 데이터를 얻기 위해 몇 가지 주요 문제를 고려하는 것이 중요합니다. 발광 이미지는 신호가 배경 위에되고 카메라가 포화되지 않도록하기 위해 600 60000로 카운트를 갖고 취득해야합니다. 얻은 신호 미만 600 경우 노출 조건은 카운트를 증가 조정해야합니다. 얻은 신호가 60,000 이?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 본 연구를 통해 가치있는 토론 및 지원에 대한 시릴 실험실 구성원을 감사드립니다. 우리는이 프로토콜을 찍는 동안 박사와 여호수아 힐과 도움 박사 제임스 사무엘의 실험실 감사합니다. 이 작품은 국립 보건원에서 빌 & 멜린다 게이츠 재단과 부여 AI47866로부터 부여하여 48,523 후원했다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Isoflurane | VETONE | 501027 | ||
| Ketamine | Butler animal health supply | |||
| Xylazine | MP Biomedical | 158307 | ||
| Luciferin | GMT | LUCK-100 | ||
| Fetal plus solution | VOR tech pharmaceutical | |||
| Cathether (22G x 1”) | TERUMO | OX2225CA | ||
| Guide wire | Hallowell EMC | 210A3491 | ||
| Octocope with speculum | Hallowell EMC | 000A3748 | ||
| Xenogen IVIS system | Caliper Life Sciences | |||
| XGI-8-gas Anesthsia System | Caliper Life Sciences | |||
| Living Imaging Software | Caliper Life Sciences | |||
| Transparent nose cones | Caliper Life Sciences | |||
| Light baffle divider | Caliper Life Sciences |
References
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