一个简单的方法来衡量在果蝇的乙醇灵敏度

1。创建曝光室用刀片切一半一小瓶插头。另外，用棉球。 小瓶插件的一半，或将棉花球推的食品瓶的底部，使表面光滑，苍蝇不会卡住英寸如果多重曝光室，确保小瓶插头和食品，采取在每个分庭相同体积。一侧小瓶的标志，可以促进这项工作。 2。公开的苍蝇收集8苍蝇的性别，年龄1-5天，定期到无酵食品小瓶曝光的前一天。 标签代码，例如，实验者被蒙蔽的实际基因型/应变。 曝光室转移到由攻八苍蝇。不要麻醉。 200证明乙醇添加少量的食用染料，如酸性蓝9，使它很容易看到。 外套一小瓶插头的底部，或棉球，用0.5毫升乙醇。 乙醇插头插入曝光瓶。确保酒精到小瓶中，而不是对小瓶壁面临。 启动一个定时器计数。 3。记录乙醇引起的中毒开始后每分钟定时器，挖掘板凳上曝光室惊人死不休的苍蝇，并观察十秒钟他们。 记录每分钟固定苍蝇的数量。苍蝇是固定的，如果他们无法得到他们的背上，停留在一个位置，或在整个10秒的观察期的快速振动翅膀。后者苍蝇被认为是固定的，绝大多数是因为这些果蝇之间的快速翼运动时期固定。过得不固定，如果能得到他们的背上，走离和/或了小瓶墙。 一个暴露试验完成时记录为固定的4个或更多的苍蝇。 放弃苍蝇和曝光室内的空气，让以后重复使用。 4。确定的时间，以50％的镇静镇静（ST50）50％的时间是四个八个苍蝇保持静止时，乙醇暴露开始后的时间。这是决定如下： 无论是：第一次测量分钟时，整整四个苍蝇是固定的。 或者：如果少于4苍蝇（Y1）固定在一个时间点（分钟X），和四个以上的下一个测量时间点（Y2），（X +1分钟），然后线性插值ST50使用公式： ST50 =（4 – Y1）/（Y2 – Y1）+ X 5。重复曝光，以确定宽容公开的苍蝇 ST50（WT）确定为野生型控制在实验中使用的应变。 公开的苍蝇的实验组，乙醇如上所述。 测量其ST50（1），但继续揭露，直到你到达的时间2X ST50（WT）。 苍蝇转移到一个空的食品小瓶，并举行4小时。 重新暴露的苍蝇，并确定曝光2 ST50（2）。 确定公差计算公差（％）（ST50（2）/ ST50（1） – 1）X100。 6。代表性的成果： 如图所示，是我们每基因型和剂量的苍蝇与6-8小瓶获得的一些代表性的结果。如果您的标准误差是相当大，那么系统的问题可能发生。确保乙醇面临到曝光商会，该商会是相同体积。 图1。剂量响应曲线的野生型果蝇暴露于乙醇增加的百分比。八瓶的苍蝇暴露每剂和性别。雄性和雌性果蝇显示各剂量（P> 0.22，双向ANOVA）相同的ST50，而不同剂量ST50的增加乙醇剂量（P <0.001）显着降低。请注意，从过度拥挤的瓶子苍蝇，可以大大比那些从健康瓶，而这种规模的差异可以影响ST50。铺设种子每15-20女性瓶每瓶以获得最佳的幼虫密度为1-2天。 图2。苍蝇暴露无论是90％，或100％的乙醇再现先前所描述的乙醇阻力白色rabbit1 mutation2（P <0.001，2路ANOVA）引起的。 图3。重复暴露于100％的乙醇，间隔4小时的恢复时间间隔，在ST50的显着增加的原因后，第二次曝光（P <0.001，配对t测试）。请注意，果蝇暴露在24分钟的第一次接触（对应的两倍NA已经ST50）。一个较短的时间（12分钟）曝光并没有引起ST50时再曝光（数据未显示），显着增加。