Detecção de Atividade Neu1 sialidase em Regulação Toll-like receptor de ativação
Summary
O ensaio sialidase é uma abordagem simples técnica que irá elucidar mecanismo molecular romance (s) de sensores de TLR de infecções microbianas e envolvimento em doenças inflamatórias ao nível do receptor na superfície celular de macrófagos ao vivo.
Abstract
Mamíferos Toll-like receptors (TLRs) são uma família de receptores que reconhecem patógenos padrões moleculares associados. Não são apenas os TLRs sensores crucial da microbiana (por exemplo, vírus, bactérias e parasitas) infecções, eles também desempenham um papel importante na fisiopatologia de doenças infecciosas, doenças inflamatórias e, possivelmente, em doenças auto-imunes. Assim, a intensidade ea duração das respostas TLR contra as doenças infecciosas devem ser rigorosamente controladas. Segue-se que o entendimento a integridade estrutural dos receptores de sensor, suas interações ligante e componentes de sinalização é essencial para a proteção imunológica subseqüentes. Seria também oferecem oportunidades importantes para a modificação de doenças através da manipulação sensor. Embora as vias de sinalização de sensores de TLR estão bem caracterizadas, os parâmetros de controle de interações entre os sensores e seus ligantes ainda permanecem mal definidos. Recentemente, identificou um novo mecanismo de ativação do TLR por seu ligante natural, que não foi observado anteriormente 1,2. Ele sugere que a ativação induzida por ligante TLR é rigidamente controlado por Neu1 ativação sialidase. Temos também informou que Neu1 regule receptores neurotrofina como TRKA TrkB e 3, que envolvem Neu1 e matriz metaloproteinase-9 (MMP-9) cruzada no complexo com os receptores 4. O ensaio sialidase foi inicialmente usado para encontrar um romance ligante thymoquinone, na ativação de Neu4 sialidase na superfície celular de macrófagos, células dendríticas e células fibroblasto via GPCR Gαi proteínas e MMP-9 5. Para os receptores TLR, nossos dados indicam que Neu1 sialidase já está em complexos com receptores TLR-2, -3 e -4, e é induzida mediante ligação do ligando a qualquer receptor. Ativado Neu1 hidrolisa sialidase sialil α-2 ,3-β-ligados galactosyl resíduos distante ligação do ligando para remover impedimento estérico a TLR-4 dimerização, MyD88/TLR4 recrutamento complexo, NFkB ativação e respostas pró-inflamatórias da célula. Em um relatório de colaboração, sialidase Neu1 foi mostrado para regular a fagocitose em macrófagos 6. Tomados em conjunto, o ensaio sialidase nos forneceu insights poderosos para os mecanismos moleculares do ligante induzida por ativação do receptor. Embora a relação exata entre Neu1 sialidase e ativação de TLR, receptores Trk ainda não foi completamente elucidado, isso representaria uma nova abordagem ou pioneira de vias de regulação celular.
Protocol
Discussion
Utilizando o teste recentemente desenvolvido para detectar atividade de sialidase em células macrófago vivo 2, usamos essa tecnologia para detectar atividade de sialidase em ligante induzida por atividade sialidase em viver BMC-2 macrófagos de uma forma dependente da dose, bem como em viver DC-2.4 células dendríticas , HEK-TLR4/MD2, HEK293, SP1 nas células mamárias adenocarcinoma, WT humanos e 1140F01 e WG0544 tipo I fibroblastos sialidose. Inibidores da neuraminidase, como o Tamiflu (fosfato de oselta…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Apoio parcial por doações para MRS é de Ciências Naturais e Pesquisa de Engenharia Council of Canada (NSERC), o Harry Botterell Foundation for Neuroscience Research, ARC, eo Garfield Research Kelly Cardiovascular e Fundo de Desenvolvimento. SRA é um receptor da Rainha do Prêmio de Pesquisa da Universidade e do Robert J. Wilson Fellowship. PJ é um receptor de Prêmio de Pós-Graduação da rainha e do Robert J. Wilson Fellowship. AG e SA são os destinatários do Prêmio de Pós-Graduação da Rainha. SF foi o ganhador da Bolsa de Pós-Graduação em Ontario Ciência e Tecnologia (OGSST). AG é o destinatário da Rainha Franklin Bolsa de Pós-Graduação Bracken. SA é o destinatário da Rainha RS Bolsa de Pós-Graduação McLaughlin.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco, Rockville, MD | |||
| 4-MUNANA | Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA | |||
| Fetal calf serum | HyClone, Logan, Utah, USA | |||
| DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media | DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA | S3023 | 15 mL | |
| Tamiflu (Oseltamivir Phosphate) | Hoffman La Roche |
References
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