Questo video descrive un metodo di microiniezione per la somministrazione di cellule tumorali al seno nello spazio perivitellino degli embrioni transgenici di zebrafish. Dopo l’incubazione, visualizziamo l’embrione al microscopio fluorescente per osservare l’invasione, la diffusione e la metastasi delle cellule tumorali.
Protocol
1. Immagine e analisi del processo metastatico Raccogli diversi embrioni anestetizzati con una pipetta Pasteur a punta larga e trasferiscili sul fondo di vetro di un piatto di polistirolo. Rimuovere l’acqua in eccesso e mantenere una quantità limitata di acqua d’uovo. Manipolare l’embrione in posizione con uno strumento ad anello per capelli e posizionare una copertura sopra il vetro. Utilizzare un microscopio confocale invertito in combinazione con obiettivi ad immersione …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Wide-tip Pasteur pipette (0.5-20 µL)
Eppendorf
F276456I
Confocal microscope
Leica
SP5 STED
Stereo microscope
Leica
MZ16FA
Tg (fli:EGFP) zebrafish strain
Kindly provided by Dr. Ewa SnaarJagalska (Institute of Biology, Leiden University, Leiden, The Netherlands)
zPDX-Analysis of Invasiveness: Investigating Invasive Behavior of Metastatic Cancer Cells in Zebrafish Embryo Xenografts. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20219, doi: (2023).