C. 예르간 먹이RNAi 도금: 대장균에서 표적 dsRNA 발현을 유도하는 기술
Published: April 30, 2023
Abstract
출처: 콜룬드치치, E., 외. RNAi 및 열 충격 유발 전사 인자 발현의 적용은 C. elegans에서뉴런에 세균 세포를 다시 프로그래밍한다. J. 비스 익스펙. (2018).
이 비디오는 C. elegans에서 RNAi 처리의 뒤에 원리를 설명하고 형질 전환벌레 긴장에 있는 lin-35를 노크하는 프로토콜을 보여줍니다.
Protocol
이 프로토콜은 Kolundzic, 외,RNAi및 열 충격 유도 전사 인자 발현의 응용 프로그램에서 발췌하여 생식세포를 C. 엘레건의뉴런으로 재프로그래밍하기 위해, J. Vis. Exp. (2018). 솔루션 준비 NGM-아가 플레이트 (1 L) NaCl 3g, 펩톤 미디어 2.5g(예: 바토-?…
Representative Results
그림 1: 린-53에 대한 RNAi에 의해 발생 Pvul 표현형. (상단) L4/젊은 성인 단계 F1 자손 웜의 DIC 사진 제어 또는 lin-53 RNAi 치료 어머니에서 파생 된. 스케일 바 = 20 μm. (아래) lin-53 RNAi로 처리된 동물은 돌출된외음부(pvul)표현형(블랙 애로우 헤드)을 표시한다. pvul 표현형은 린-53에 대?…
Materials
| Chemicals | |||
| Agar-Agar, Kobe I | Roth | 5210.1 | |
| Bactopeptone | A. Hartenstein GmbH | 211 677 | Peptone Media |
| Yeast extract | AppliChem | A1552,0100 | |
| Amphotericin B | USBiological | A2220 | |
| CaCl2 | Merck Biosciences | 208290 | |
| Cholesterol | Roth | 8866.2 | |
| Gelatine | Roth | 4275.3 | |
| IPTG | Sigma | 15502-10G | |
| K2PO4 | Roth | T875.2 | |
| KH2PO4 | Roth | 3904.2 | |
| MgSO4 | VWR | 25,163,364 | |
| Na2HPO4 | Roth | P030.1 | |
| NaCl | Roth | 9265.1 | |
| NaClO | Roth | 9062.3 | |
| NaOH (5 N) | Roth | KK71.1 | |
| Tris | Roth | AE15.2 | |
| Carbenicillin | Roth | 634412 | |
| Tetracycline | Roth | 2371.2 | |
| Incubators | |||
| Incubator | Sanyo MIR-5 | 5534210 | for maintenance of worm strains at 15 °C or 25 °C |
| Microscopes | |||
| Stereomicroscope | SMZ745 | Nikon | |
| Bacterial strains | |||
| Escherichia coli HT115 | F-, mcrA, mcrB, IN(rrnD-rrnE)1, rnc14::Tn10(DE3 lysogen: lavUV5promoter -T7 polymerase) (IPTG-inducible T7 polymerase) (RNAseIII minus). | ||
| Escherichia coli OP50 | Uracil auxotroph E. coli strain | ||
| Worm strains | |||
| BAT28: otIs305 (hsp16.2prom::che-1::3xHA) ntIs1 (gcy-5prom::gfp) V. | derived from OH9846 by 4x times more back crossing with N2 | ||
| RNAi Clones | |||
| lin-53 | SourceBioscience | ID I-4D14 | Ahringer library 16B07 ChromI, K07A1.12 |
| empty vetor: L4440 | Addgene | #1654 |
Cite This Article
RNAi Plating for C. elegans Feeding: A Technique to Induce Target dsRNA Expression in E. coli. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20138, doi: (2023).