Malpighian Tubule Dissektion von einer Erwachsenenfliege: Isolieren einer Osmoregulierungs- und Ausscheidungsorgan
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Rossano, A. J. und Romero, M. F. Optische Quantifizierung des intrazellulären pH-Werts in Drosophila melanogaster Malpighian Tubule Epithelia mit einem fluoreszierenden genetisch kodierten pH-Indikator. J. Vis. (2017).
Dieser Artikel beschreibt die Zerlegung der vorderen Malpighian Tubuli (MT) von einer weiblichen Drosophila-Fliege und ein Beispielprotokoll von Rossano et al. (2017), in dem die MTs für die Live-Bildgebung in einer Perfusionskammer vorbereitet sind.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Rossano und Romero, Optische Quantifizierung des intrazellulären pH-Werts in Drosophila melanogaster Malpighian Tubule Epithelia mit einem fluoreszierenden genetisch kodierten pH-Indikator, J. Vis. Exp. (2017). 1. Herstellung von Poly-L-Lysin-Dias Zeichnen Sie einen 40 x 20 mm Rand mit einem hydrophoben PAP-Stift um die Spitze der Standard-Dias von 75 x 25 mm und legen Sie ihn bei RT 15 min zum Trocknen beiseite. Verwenden Sie gr…
Representative Results
Abbildung 1: Herstellung von Glasstäben für den Umgang mit Malpighian Tubules.A – E. Prozess des Erhitzens und Ziehens einer Glasstange, um eine Verjüngung und Winkel geeignet für die Handhabung von MTs zu produzieren. Pfeile bezeichnen Richtung und Größe der Kraft angewendet werden. F. Foto eines entsprechend gefertigten Glaswerkzeugs. Maßstabsleiste = 10 mm. <a href="https://…
Materials
| Poly-L-Lysine (PLL) Solution | Sigma-Aldrich | P4832 | Store at 4 °C, can be reused. |
| Adhesive Perfusion Chamber Covers, adhesive size 1 mm, chamber diameter × thickness 9 mm × 0.9 mm, ports diameter 1.5 mm | Sigma-Aldrich | GBL622105 | Can be substituted as needed to match perfusion system. |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Ellsworth Adhesives | 184 SIL ELAST KIT 0.5KG | Available from multiple vendors. |
| Helping Hands Soldering Stands | Harbor Freight Tools | 60501 | Available from multiple vendors. |
| Schneider's Medium | Fisher Scientific | 21720024 | Store at 4 °C in sterile aliquots. |
| #5 Inox Steel Forceps | Fine Science Tools | 11252-20 | Can be substituted based on experimenter comfort. |
| 35 x 10 mm polystyrene Petri dish | Corning Life Sciences | Fisher Scientific 08-757-100A | Exact brand and size are unimportant. |
| 75 x 25 mm Microscope Slides | Corning Life Sciences | 2949-75X25 | Exact brand and size can vary as long as perfusion wells are compatible. |
| Filimented Borosilicate Capillary Glass, ID 1.5 mm, OD 0.86 mm, thickness 0.32 mm | Warner Instruments | 64-0796 | Filiment not necessary, glass can be substituted to match perfusion tubing and perfusion wells. |
| Vacuum Silicone Grease | Sigma-Aldrich | Z273554 | Available from multiple vendors. |
| Glass rods, 5 mm diameter | delphiglass.com | 9198 | Exact size is personal preference, multiple vendors available |
| PAP Hydrophobic Pen | Sigma-Aldrich | Z377821 | Available from multiple vendors. |
| Sealing Film | Sigma-Aldrich | P7668 | Available from multiple vendors. |
| 15 mL Falcon tube | BD Falcon | 352096 | Available from multiple vendors. |
| 50 mL Falcon tube | BD Falcon | 352070 | Available from multiple vendors. |
| Dissecting Stereoscope | Zeiss | Discovery.V8 | Any dissecting stereoscope can be used. |
| UAS-pHerry transgenic Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Rossano et al., 2017 | |
| capaR-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Terhzaz et al., 2012 | |
| c724-GAL4 driver line Drosophila melagnogaster | Available from Romero Lab | First published: Sozen et al., 1997 | |
| Single-edged Carbon Steel Razor Blade | Electron Microscopy Sciences | 71960 | Available from multiple vendors. |
| Microscopy Slide Folder | Fisher Scientific | 16-04 | Available from multiple vendors. |
| Bunsen Burner | Fisher Scientific | 50-110-1231 | Available from multiple vendors. |
| Polystrene Drosophila Rearing Vials with Flugs | Genesee Scientific | 32-109BF | Comparable items can be substituted. |
| 2.5 L Laboratory Ice Bucket | Fisher Scientific | 07-210-129 | Available from multiple vendors. |
| 200 uL barrier pipette tips | MidSci | AV200 | Available from multiple vendors. |
| 200 μL variable volume pipette | Gilson Incorporated | PIPETMAN P200 | Available from multiple vendors. |
Cite This Article
Malpighian Tubule Dissection from an Adult Fly: Isolating an Osmoregulatory and Excretory Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20102, doi: (2023).