ライブの磁気共鳴分光法キイロショウジョウバエマジックアングルスピニングを使用して
Summary
この手法は、ライブの分子特性評価のためにプロトンMRスペクトロスコピー（HRMAS 1H – MRS）を回転の高分解能マジック角の使用を可能にする<em>キイロショウジョウバエ</em> HRMASプローブを備えた従来の14.1テスラ分析計と。
Abstract
高分解能マジック角スピニング（HRMAS）プロトン磁気共鳴分光法（<sup> 1</sup> H – MRS）のスペクトル線幅を向上させ、抽出、無傷の細胞、細胞培養、および代謝と細胞のプロセス間の関係を調査するため、さらに重要な無傷の組織から得られるため、高分解能スペクトルを可能にする新たな非破壊手法です。<em> in vivoで</em> HRMAS<sup> 1</sup> H – MRSの研究では、ライブショウジョウバエで報告されてこなかった<em>キイロショウジョウバエ。</em><em>ショウジョウバエ、</em>単純な遺伝的生物として、複数の生物学的機能と様々な進化的に保存されたシグナル伝達経路は、全体の生体レベルで確認することができますし、それは遺伝学と生理学を調査するための有用なモデルです。この目的のために、我々は、開発と実装<em> in vivoで</em> HRMAS<sup> 1</supライブ調査する> H – MRS法<em>ショウジョウバエ</em>ここでは14.1 Tで、我々はHRMASを概説<sup> 1</supの分子特性評価のための> H – MRSプロトコル<em>ショウジョウバエ</em> HRMASプローブを備えた従来のMRスペクトロメータを持つ。この手法は、小説です。<em> in vivoで、</em>非破壊<em>ショウジョウバエ</emしたがって、疾患のバイオマーカーの同定を可能にし、>代謝物測定のアプローチは、新規治療開発に貢献するかもしれない。
Protocol
Discussion
果実における in vivo MRI での実現可能性の最近の報告を除いて6ハエ、 ショウジョウバエを用いるin vivo MRS研究ではまだ報告されていない。現在のプロトコルでは、我々は生物学的に重要な分子を検出するためのin vivoで HRMAS 1 H – MRSのアプローチで小説の実装について説明します。ゼロフライ死亡率を達成しながら、具体的には、ライブ<e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、ロナルドG.トンプキンス（A.アリアTzika、取締役に衛生研究所（NIH）の助成金ローレンスG. Rahme、衛生研究所（NIH）センターグラント（P50GM021700）の国立研究所研究所のAI063433の国立研究所によって部分的にサポートされていましたA.アリアTzikaの子供の研究助成金（＃8893）のためのNMRのコア）、およびシュリナーの病院。我々はDionyssios Mintzopoulos博士に感謝するこのプロトコルとOvidiu C. Andronesi博士号を開発の初期段階における支援のためのTOBSYパルスシーケンスの支援のための。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
| 2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| 4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
||
| SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
References
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).
- Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy. J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).
- Astrakas, L. G. Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis. Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).
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- Zektzer, A. S. Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses. Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).
