Spectroscopie par résonance magnétique du direct Drosophila melanogaster En utilisant Magic Angle Spinning
Summary
Cette technique permet l'utilisation de l'angle magique à haute résolution filer spectroscopie par résonance magnétique protonique (HRMAS 1H-MRS) pour la caractérisation moléculaire de vivre<em> Drosophila melanogaster</em> Avec un spectromètre de 14,1 teslas conventionnelle équipée d'une sonde HRMAS.
Abstract
High-Resolution Magic Angle Spinning (HRMAS) protons spectroscopie par résonance magnétique (<sup> 1</sup> H-MRS) est un roman technique non-destructive qui améliore spectrale ligne largeurs et permet à haute résolution des spectres d'être obtenu à partir d'extraits, des cellules intactes, des cultures de cellules, tissus et plus important encore intactes pour étudier les relations entre les métabolites et les processus cellulaires.<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS études doivent encore être rapportés dans la mouche à fruit direct<em> Drosophila melanogaster.</em><em> Drosophile,</em> Comme un simple organisme génétique, qui permet aux fonctions multiples et diverses biologiques évolutivement conservés voies de signalisation qui sera examiné à l'échelle de l'organisme entier et il est un modèle utile pour étudier la génétique et la physiologie. À cette fin, nous avons développé et mis en œuvre une<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS méthode pour étudier en direct<em> Drosophile</em> À 14,1 T. Ici, nous présentons une HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS protocole pour la caractérisation moléculaire des<em> Drosophile</em> Avec un spectromètre conventionnel MR équipé d'une sonde HRMAS. Cette technique est un roman,<em> In vivo,</em> Non destructif<em> Drosophile</em> Approche de mesure métabolite, qui permet l'identification de biomarqueurs liés aux maladies et peut donc contribuer au développement de thérapeutiques nouvelles.
Protocol
Discussion
À l'exception du récent rapport de la faisabilité de l'IRM in vivo dans les mouches des fruits 6, études in vivo chez la drosophile MRS n'ont pas encore été signalés. Dans le présent protocole, nous décrivons la mise en œuvre d'un roman in vivo HRMAS 1 H-MRS approche pour la détection de molécules biologiquement importantes. Plus précisément, nous avons détecté des lipides et des métabolites de petites mouches drosoph…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu en partie par un National Institutes of Health (NIH) aux subventions AI063433 Laurence G. Rahme, un des Instituts Institut national de la santé (NIH) Centre Grant (P50GM021700) à Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika, directeur de le cœur RMN), et l'Hôpital des Shriners pour enfants de subvention de recherche (# 8893) à A. Aria Tzika. Nous remercions Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. pour l'assistance dans les phases initiales du développement de ce protocole et Ovidiu C. Andronesi Ph.D. pour l'assistance à la séquence d'impulsions TOBSY.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
| 2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| 4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
||
| SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
References
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).
- Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy. J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).
- Astrakas, L. G. Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis. Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).
- Fan, T. W. M. Metabolite profiling by one- and two dimensional NMR analysis of complex mixtures. Prog Nuc Magn Reson Spec. 28, 161-219 (1996).
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- Zektzer, A. S. Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses. Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).
