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JoVE Journal 免疫学と感染
Bacterial Peptide Display for the Selection of Novel Biotinylating Enzymes
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新規ビオチニル化酵素の選択のための細菌ペプチド表示

DOI:
10.3791/60266-v

•

10:43 min

•

October 03, 2019

•

, ,
1Department of Molecular Medicine,University of Southern Denmark, 2Department of Nephrology,Odense University Hospital

章

  • 00:04標題
  • 00:29Insertion of Peptide Coding Sequencing Sequence in pBAD BirA-eCPX-AP
  • 01:32Generation of a BirA Library
  • 03:16Selection of Bacteria Expressing Biotinylated Peptide
  • 07:18Quantification of Enrichment
  • 08:26Results: Model Selection with pBAD-BirA-eCPX-AP and pBAD-BirA-eCPX-AP(K10A)
  • 10:00Conclusion

概要

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ここでは、特定の標的ペプチドをビオチン化する大腸菌ビオチンタンパク質リゲスBirAの新規変異体を選択する方法を提示する。プロトコルは、標的ペプチドの細菌表示のためのプラスミドの構築、BirAライブラリーの生成、BirA変異体の選択および特徴付けについて説明する。

タグ

Bacterial Peptide DisplayBiotinylating EnzymesBirAStreptavidin SelectionPCRMegaprimersDpnIT7 Express LysY/Iq Competent E. Coli

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