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Ein Protokoll für die Identifizierung von Protein-Protein-Wechselwirkungen Basierend auf<sup> 15</sup> N Metabolische Markierung, Immunpräzipitation, Quantitative Massenspektrometrie und Affinity Modulation
JoVE Journal
生物学
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JoVE Journal 生物学
A Protocol for the Identification of Protein-protein Interactions Based on 15N Metabolic Labeling, Immunoprecipitation, Quantitative Mass Spectrometry and Affinity Modulation
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Ein Protokoll für die Identifizierung von Protein-Protein-Wechselwirkungen Basierend auf<sup> 15</sup> N Metabolische Markierung, Immunpräzipitation, Quantitative Massenspektrometrie und Affinity Modulation

DOI:
10.3791/4083-v

•

14:44 min

•

September 24, 2012

•

, , , , ,
1Max Planck Institute of Molecular Plant Physiology, 2University of Kaiserslautern

章

  • 00:05標題
  • 02:30Cell Lysis, Crosslinking and Sample Preparation
  • 05:22Immunoprecipitation
  • 07:06Sample Preparation for nano-LC-MS/MS
  • 10:50Results: HSP70B with its Nucleotide Exchange Factor CGE1
  • 14:07Conclusion

概要

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Wir präsentieren eine Variation der QUICK (quantitativen Immunpräzipitation mit Knockdown kombiniert) Ansatz, der zuvor wurde eingeführt, um zwischen wahr und falsch Protein-Protein-Wechselwirkungen zu unterscheiden. Unser Ansatz basiert auf<sup> 15N</sup> Metabolische Markierung, die Modulation der Affinitäten von Protein-Protein-Wechselwirkungen durch die Anwesenheit / Abwesenheit von ATP, Immunpräzipitation und quantitative Massenspektrometrie.

タグ

Protein-protein Interactions15N Metabolic LabelingImmunoprecipitationQuantitative Mass SpectrometryAffinity ModulationCo-immunoprecipitationTargeted ApproachMass Spectrometry (LC-MS/MS)False Positive DiscoveriesRNAiQUICK (QUantitative Immunoprecipitation Combined With Knockdown)

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