在无脊椎动物病理学研究中发现血淋巴收集和接种转移到大黄微加分中
概要
对滴虫血淋巴的分析是一个重要的信息来源, 说明一些病原体是如何引起疾病的, 以及滴答声对这种感染的免疫反应。本研究旨在说明如何接种真菌繁殖和从根茎微加高的雌性中采集血淋巴。
Abstract
滴答声是强制的血食性外寄生虫和犀牛微加子在兽医学中具有重要意义, 因为它导致贫血, 体重减轻, 动物的皮革贬值, 也可以作为几种病原体的载体。由于控制这些寄生虫的费用过高, 不当使用化学杀菌剂对环境造成损害, 以及对传统寄生虫的抵抗力增加, 对滴答声的替代控制, 使用昆虫病原真菌, 例如, 已被认为是一个有趣的方法。然而, 很少有研究表明, 滴答声的免疫系统是如何对抗这些致癌物质的。因此, 该协议演示了两种用于昆虫病原体接种充血的女性和两种技术用于血淋巴收集和血细胞采集。在腿部插入的病原体接种在雌性的身体允许评估女性的生物参数, 不像在阴囊和头状花序之间的接种, 这经常损害 Gené的器官。多侧血淋巴收集产生了更高的体积恢复比收集通过腿。滴虫血淋巴收集和处理的一些局限性包括: (i) 血细胞破坏率高; (二) 血淋巴污染与中肠紊乱; (三) 低血淋巴体积恢复。当血淋巴通过腿部切割收集时, 血淋巴在腿部开口处积累需要时间, 有利于凝血过程。此外, 与背侧收集相比, 通过腿部收集的血细胞较少, 尽管第一种方法被认为更容易实施。了解昆虫病原剂介导的滴答声中的免疫反应有助于揭示其发病机制, 并为滴答声控制制定新的目标。这里描述的接种过程需要非常低的技术资源, 不仅可以用来暴露在病原微生物面前的滴答声。同样, 血淋巴的收集可能是许多生理研究的第一步。
Introduction
牛是一种对热带地区牲畜有巨大负面影响的对牲畜产生了巨大的负面影响。这种滴答药是病原体的载体, 如巴贝西亚牛、巴贝西亚大代米纳和阿纳苏拉西翁, 再加上直接的血液喂养损伤, 可以减少牛奶和肉类的生产, 导致贫血, 并最终导致死亡。据估计, 这种外生寄生虫每年造成的损失为32.4亿美元.需要可持续的方法, 昆虫病原剂的使用被认为是减少使用化学杀菌剂2,3,4的一个有希望的替代品。
昆虫病原真菌, 如巨细胞病, 是节肢动物的天敌, 包括滴虫, 一些分离物可用作生物控制器。这些病原体通过角质层主动感染宿主, 并对它们的身体进行2,5,6的殖民。随着感染的发展, 细胞和体液反应是由滴虫免疫系统介导的。据报道, 在对病原体 7,8 具有挑战性的情况下, 对滴虫血淋巴的分析是评估免疫反应的有用工具.
关节的免疫反应分为体液和细胞反应。体液反应涉及血凝过程和抗菌蛋白肽的产生, 而细胞免疫反应是通过血细胞进行的。这些细胞存在于所有节肢动物的血淋巴中, 据报道, 它们在涉及先天免疫反应的研究中发展出表达作用, 因为它与吞噬和包封过程直接相关。因此, 对血细胞的研究有助于研究死亡途径和了解自体吞噬、凋亡和坏死等过程。在一些无脊椎动物作为双壳体, 血细胞的收集面临的限制, 如细胞破坏, 低血淋巴体积获得, 低浓度的恢复细胞10.根据所采用的方法, 通常会降低细胞浓度, 直接影响细胞的定量和分析。
血淋巴中循环的血细胞数量在不同节肢动物之间是可变的, 由于性别、年龄和节肢动物发育阶段11等生理阶段不同, 同一物种的血细胞数量可能发生变化。血细胞也可以被发现粘附在一些器官上, 并在感染过程1 1 后立即释放到循环中。然而, 大多数研究报告使用昆虫, 而滴答声仍然较少探索有关他们的生理和病理。尽管病原体接种和血淋巴收集在滴答声是较少使用的技术, 建立标准的方法有助于发展更准确的研究。
本研究的目的是比较最常用的血淋巴收集方法, 并将病原体接种成r. 微 + 滴答声, 评价血淋巴采集和血细胞浓度的有效性。
Protocol
Representative Results
Discussion
当这项研究旨在研究微生物在实验节肢动物模型中的体内作用时, 病原体的接种是有用的, 因为它确保病原体在宿主体内。该技术也可用于接种 RNA 干扰 (RNAi) 等分子。在阴囊和头状花序之间的接种被认为更容易执行, 但经常损害吉内的器官, 损害鸡蛋的生存能力 12,13。Gené的器官在解剖上靠近头盖骨的前部, 它是病毒14的重要器官.因此, ?…
開示
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项研究的部分资金来自巴西的正是《财务法典》 001号, 由巴西的卫报公司资助。CAPES 为 a. f. Marciano 提供博士奖学金。我们感谢巴西国家科学和技术发展委员会为 J. Fiorotti 提供博士奖学金。这项研究还得到了 Carlos Chagas Filho 里约热内卢州研究基金会 (FAPERJ) 和 CNPq. v. r. e. p. Bittencourt 研究员的赠款的支持。
Materials
| Alkaline Hypochlorite solution | Sigma-Aldrich | A1727 | |
| D-(+)-Glucose | Sigma-Aldrich | G8270-1KG | |
| EDTA | Synth | 2706 | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 16000036 | |
| Flexible rubber | BD | ||
| Giemsa stain | Sigma-Aldrich | 48900-500ML-F | |
| Glass capillary | CTechGlass | CT95-02 | |
| Insulin syringe (needle) | BD | SKU: 324910 | |
| KH2PO4 | Vetec | 60REAVET014512 | |
| Leibovitz's L-15 culture medium | Gibco | 11415-064 | |
| Methanol | Sigma-Aldrich | 34860-1L-R | |
| Microscope slides | Kasvi | K5-7105 | |
| Microtubes | BRAND | Z336769-1PAK | |
| Na2HPO4 | Vetec | 60REAVET014593 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653-1KG | |
| Neubauer chamber | Kasvi | K5-0111 | |
| Penicillin | Gibco | 15140163 | |
| Protease inhibitor cocktail | Sigma-Aldrich | P2714 | |
| Tween 80 | Vetec | 60REAVET003662 |
参考文献
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