概要

小鼠浅表淋巴结手术

Published: May 21, 2012
doi:

概要

遵循多时间内相同的鼠标免疫反应的进展,淋巴结可以依次通过手术切除。在这里,我们描述了这种技术可以如何执行。

Abstract

在免疫学领域,了解进展对疫苗,感染或肿瘤的免疫反应,反应之后往往随着时间的推移。同样,淋巴细胞稳态的研究需要时间课程实验。这些研究是在相同的鼠标理想,以减少实验的变异,以及使用的老鼠数量。抽血时间课程实验允许的性能,但它只能提供约外周血淋巴细胞的信息,并提供数量有限的细胞1-4。由于通过人体循环和居住在淋巴结中的淋巴细胞有不同的特性,重要的是要检查这两个地方。淋巴结顺序切除手术提供了一个独特的机会,后续的免疫反应或免疫细胞膨胀,随着时间的推移相同的鼠标。此外,这种技术的产生,这是足够的PE 1-2X10 6个淋巴结细胞之间rform表型特征和/或功能分析。顺序淋巴结手术或淋巴结清扫已成功地应用于我们和其他国家5-11。在这里,我们描述如何可以通过一个小切口,在皮肤一个anesthetised鼠标删除臂丛和腹股沟淋巴结肿大。由于手术是肤浅的,并迅速完​​成,鼠标恢复速度非常快,愈合好,不会遇到过多的疼痛。每隔一天,有可能收获一个或两个淋巴结允许时间课程实验。因此,该技术是适合学习节点居住淋巴细胞淋巴结的特点,随着时间的推移。这种方法适用于各种实验设计,我们相信,许多实验室将受益于执行顺序淋巴结手术。

Protocol

1。手术前的准备工作根据加拿大动物护理准则理事会处理小鼠。 anesthetise小鼠注射氯胺酮/甲苯​​噻嗪(150/300毫克/千克,IP)或异​​氟醚吸入(2%,1L氧气)。如果可以,异氟醚应该使用,因为它允许为更好地控制麻醉时间和深度。此外,氧管理的同时,支持动物的生理功能。此外,异氟醚直接消除肺部,因此并不需要肝,肾代谢。 注入丁丙诺啡(0.05 – …

Discussion

我们已经描述了LN的手术协议,它可以适用于许多实验系统。虽然非常有益的免疫反应或免疫细胞的平衡,这种技术具有一些限制。首先,只有四个LNS可以收获。二,免疫反应的研究必须是系统性的,或发生在腹股沟浅淋巴结或臂丛(皮肤排出)。最后,收获细胞数号法律公告搬迁的质量,技术的限制,这可能有助于实验变异时需要绝对细胞数的影响。然而,对靶细胞的百分比,对自己,可以提?…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我们感谢西尔维·为该协议的的关键的读数的勒萨热和的所有劳顾会委员。这项工作被受支持的由一个从的作者:卫生研究所(CIHR)的的加拿大研究院的的授出日期(澳门币-77545)。纳萨莉拉布雷克被由一个FRSQ的高级奖学金的的支持,,和MELISSA的Mathieu收到1 NSERC亚历山大·格雷厄姆·加拿大贝尔公司研究生奖学金。

Materials

Reagent Name Company Catalog number コメント
Graefe Fine Pattern Premium Forceps Harvard Apparatus 52-2144 Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip
Michel Clip Applying and Removing Forceps Harvard Apparatus 52-3779 12.5 cm (5 in)
Michel Clip 100 Harvard Apparatus 52-3746 7.5-1.75 mm
Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) Schering-Plough    
Vetalar (Ketamine hydrochloride) Boniche Animal Healthcare   DIN: 01989529
Rompun (Xylazine) Bayer   DIN: 02169592
Isoflurane ABBOTT   DIN: 02032384
Hypotears eye ointment Novartis Ophtalmics   DIN: 02133288
Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) Omega L0000017 DIN: 02251477

参考文献

  1. Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
  2. Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
  3. Zhou, X. Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1. Immunity. 33, 229-240 (2010).
  4. Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes. J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).
  5. Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses. Immunity. 7, 123-134 (1997).
  6. Witherden, D. Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules. J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).
  7. Labrecque, N. How much TCR does a T cell need. Immunity. 15, 71-82 (2001).
  8. Leignadier, J., Labrecque, N. Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation. PLoS One. 5, e13740 (2010).
  9. Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).
  10. Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response. J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).
  11. Bassett, J. D. CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells. Blood. 117, 1146-1155 (2011).
  12. Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization. J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).
  13. Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation. Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).

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記事を引用
Mathieu, M., Labrecque, N. Murine Superficial Lymph Node Surgery. J. Vis. Exp. (63), e3444, doi:10.3791/3444 (2012).

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