אנו מתארים את השימוש perfluorodecalin כמדיום הרכבה infiltrative. זוהי שיטה פשוטה לשיפור עומק הדמיה<em> ארבידופסיס thaliana</em> עלה רקמה עם השפעה פיזיולוגית מינימלית.
הבעיה של רכישת תמונות ברזולוציה גבוהה עמוק לתוך דגימות ביולוגיות היא להכרה נרחבת 1. ברקמת אוויר מלא כגון mesophyll הספוגי של עלי הצמח או הריאות חוליות קשיים נוספים נובעים מעברים מרובים מקדם השבירה בין מרכיבים תאיים, בין התאים airspaces ובין הרקמה הביולוגית ואת שאר מערכת אופטית. יתר על כן, חוסר התאמה מקדם השבירה להוביל הנחתה של עירור ופליטה fluorophore האות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. אנו מתארים כאן את היישום של perfluorocarbon, perfluorodecalin (PFD), כאמצעי הדמיה אופטית infiltrative אשר משפר לייזר מיקרוסקופיית confocal (LSCM) הדמיה מדגם בעומק, מבלי להזדקק מגביר פגיעה בשלטון לייזר ויש לו השפעה פיזיולוגית מינימלית 2. אנו מתארים את הפרוטוקול לשימוש PFD עם רקמת עלה ארבידופסיס thaliana, אשר מורכב אופטית כתוצאה שלהמבנה (איור 1). PFD יש מספר תכונות שהופכות אותו מתאים לשימוש הזה 3. מקדם השבירה של PFD (1.313) דומה לזו של מים (1.333), והוא קרוב יותר לזה של cytosol (כ 1.4) מאשר אוויר (1.000). בנוסף, PFD זמינה, ללא ניאון אינו רעיל. מתח הפנים הנמוך של PFD (19 dynes -1 ס"מ), נמוכה מזו של מים (72 dynes -1 ס"מ) וגם מתחת לגבול (25-30 ס"מ Dyne -1) עבור חדירה הפיוניות 4, המאפשר לה להציף mesophyll airspaces ספוגי ללא יישום של ואקום פוטנציאל הרסני או פעילי שטח. לבסוף ו מכריע, PFD בעל קיבולת גדולה המסת CO 2 ו-O 2, אשר מאפשר חילופי גזים להישמר ברקמה מוצף, ובכך ממזערת את ההשפעה הפיזיולוגית על המדגם. מאפיינים אלה היו בשימוש ביישומים שונים הכוללים נשימה נוזלי חלקי הריאות inflation 5,6, 7 ניתוחים, דם מלאכותי 8, חמצון של צמיחה מדיה 9, ומחקרים של היווצרות קרח קריסטל בצמחים 10. כיום, מקובל לעלות רקמות במים או חיץ מימית הדמיה confocal לחיות. אנו רואים כי השימוש PFD כמדיום הרכבה מהווה שיפור על הנוהג הקיים ומאפשרת הכנת פשוט לחיות דגימות עלים שלמים הדמיה.
זוהי טכניקה פשוטה וקלה לשימוש כדי לשפר את מיקרוסקופית של אוויר מלא או אופטית רקמות מורכבות. הראינו כי הטכניקה יש כמה יתרונות חזקים ואנו מקווים כי הוא ישמש להבהיר שאלות ביולוגיות הנוגעות אוויר עשיר רקמות. לדוגמה זה יהיה בחירה טבעית עבור מחקרים של ההתקפה הפתוגן ב mesophyll צמח או הריאות. אנו גם מודעים למגבלות של הטכניקה. אנחנו עובדים על התאמה טובה יותר מקדם השבירה, לשימוש עם מצבים אחרים של מיקרוסקופיה, ומילוי perfluorocarbon mountant במהלך הניסויים זמנים ארוכים. אנו גם מכירים, עם זאת, כי אחד היתרונות העיקריים של PFCs, כלומר להיות אינרטי מבחינה ביולוגית יש flipside. PFCs אינם מתמוססים בקלות מולקולות ביולוגיות אשר גם מרמז כי הם אינם יכולים לשמש בקלות לספק תרכובות של עניין, כגון הורמונים, תרופות מולקולות קטנות או יונים אחרים.
The authors have nothing to disclose.
המחברים מבקשים להודות פרופ 'ניקולס סמירנוף מאוניברסיטת אקסטר את עצתו של אוניברסיטת אקסטר מתקן bioimaging. המימון ניתן על ידי בריטניה ביוטכנולוגיה ו מחקר מדעי הביולוגיה המועצה (מענק התייחסות BB/E002682/1).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | コメント |
Perfluorodecalin | F2 Chemicals | N/A | Telephone to order. |
Carolina Observation Gel | Blades Biological | 13-2700 |