我々は浸潤性封入剤としてperfluorodecalinの使用を説明しています。これは、撮像の深さを改善するための簡単な方法です。<em>シロイヌナズナ</em最小限の生理的影響と>葉組織。
生体試料に深く高解像度の画像を取得する問題が広く1を認めている。このような植物の葉の海綿状の葉肉のような空気で満たされた組織または肺の脊椎動物、さらに困難は細胞成分との間の、細胞と空域の間及び生体組織や光学系の他の部分との間の屈折率の複数の遷移から生じる。また、屈折率の不一致は、蛍光物質の励起および蛍光顕微鏡における信号の放出の減衰につながる。我々は光学的にレーザパワーでダメージが増加するに頼ることなく、深さで焦点顕微鏡(LSCM)サンプル画像をスキャンするレーザーを改善し、最小限の生理的影響2を有する浸潤のイメージング媒体としてここにパーフルオロカーボンのアプリケーション、perfluorodecalin(PFD)を、記述する。我々は、その結果として光学的に複雑であるシロイヌナズナの葉組織、とPFDの使用のためのプロトコルを記述する構造( 図1)。 PFDは、この使用3に適するよう、属性の数を持っています。 PFDの屈折率(1.313)が水(1.333)と同等ですし、空気(1.000)よりも細胞質ゾル(約1.4)のそれに近いです。さらに、PFDは非蛍光、容易に入手可能であり、非毒性です。それは洪水を可能にする気孔貫通4、のための- PFDの低い表面張力(19ダインcm -1には )水(72ダインcm -1)のそれより低く、また上限(30ダインcm -1の 25)以下です。潜在的に破壊的な真空または界面活性剤の応用せずにスポンジ状の葉肉の空域。最後にと決定的に、PFDは、CO 2とガス交換がこうしてサンプルについての生理学的影響を最小限に抑え、浸水組織で維持できるようにするO 2を 、溶解させるための偉大な能力を持っています。これらのプロパティは、部分的液体呼吸と肺のインフレを含む様々な用途で使用されているる5,6、手術7、人工血8、増殖培地9、及び植物10の氷の結晶形成の研究の酸素化。現在のところ、それは、ライブ共焦点イメージングのための水または水性緩衝液に組織をマウントするのが一般的です。私たちは、封入剤として、PFDの使用は、既存の慣行の改善を表し、イメージングのためのライブ全体の葉のサンプルの簡単な製造を可能にすることを検討してください。
これは、空気充填または光学的に複雑な組織の顕微鏡を向上させるためにシンプルで使いやすい手法です。私たちは、テクニックはいくつかの強力な利点を持っていることが示されていると我々は、それが空気が豊富な組織に関連する生物学的疑問を解明するために使用されることを願っています。例えばそれは、植物の葉肉や肺内の病原体の攻撃の研究のための自然な選択になるでしょう。我々はまた、技術の限界を認識しています。我々は、長いタイムスケールの実験中に優れた屈折率のマッチング、顕微鏡の他のモードでの使用、及びパーフルオロカーボン封入補充に取り組んでいます。我々はまた、PFCガスの主な利点の一つは、すなわち生物学的に不活性なフリップサイドを持っていること、しかし、認識する。 PFCは容易にまたそれらが容易にそのようなホルモン、薬物、および他の小分子やイオンのような関心の化合物を送達するために使用することはできないことを意味する生物学的分子を溶解しない。
The authors have nothing to disclose.
著者は、彼のアドバイスとエクセターのバイオイメージング施設の大学のためにエクセター大学の教授ニコラススミノフを感謝したいと思います。資金は、英国バイオテクノロジー生物科学研究会議(助成基準BB/E002682/1)によって提供されていました。
Name of the reagent | Company | Catalogue number | コメント |
Perfluorodecalin | F2 Chemicals | N/A | Telephone to order. |
Carolina Observation Gel | Blades Biological | 13-2700 |