1. Cerrahi Hazırlık Anesteziklerin uygun tip ve doz ile sıçan anestezisi. Burada üretan (1.5 g / kg, Sigma-Aldrich Co, St. Luis, MO) – 100 ml fosfat üretan 20 g seyreltilmesi ile% 20 çözüm olarak hazırlanmış, yani hayvan tamponlu salin (PBS) 7.5 alacaksınız ml / kg üretan solüsyonu intraperitoneal (IP). Nedeniyle doz-yanıt eğrisi, toplam doz üretan, her biri yaklaşık 30 dakika ayrılmış dört uygulamalar için ayrılmıştır. Üretan ilk iki uygulama öncesinde, hayvan bir hayvan önlemek için izofluran konsantrasyonu% 3-4 (dakikada 2 litre oksijen) uygulandığında (dakikada 2 litre oksijen) bakımı,% 2 ile uyuşturulduktan enjeksiyon yoluyla vurguladı. Ameliyat sırasında, isofluorane (2 dakika süreyle% 2 konsantrasyon) bir ek idari gerekirse kullanılabilir. Olmasını sağlamak için, insizyon yerinde (baş, sırt tarafı) boyunca kürk Tıraşkürk yara kontamine ve kesi yeri etrafında yeterli bir alan dezenfekte edilebilir değil. Antiseptically organik iyot ya da klorheksidin sabun ve antiseptikler (etanol) kullanılarak yapılan cerrahi sitesi hazırlayın. Silikon sondalar (NeuroNexus Teknolojileri, Ann Arbor, MI) hazırlayın. Probları distile su ile çalkalayın ve ardından% 70 etanol kullanılarak dezenfekte edilebilir. Gerekirse, sondalar, sonra histolojik inceleme prob konumunu ortaya çıkarmak için bir floresan işaretleyici (örneğin Boya, Invitrogen Co) antiseptically hazırlanan ile boyanabilir. Bunu yapmak için, küçük ve çok yumuşak bir boya fırçası kullanın ve ince boya ile silikon prob arkasına dokunun. Bu prosedür her zaman prob hasar görmüş ya da katlanmasını değildir emin olmak için bir mikroskop üzerinde yapılmalıdır. Her zaman boya kanallarının herhangi bir engelleme olmadığından emin olmak için kontrol edin. Probu üzerinde kalan herhangi bir kalıntı boya daha sonra su ile durulama ardından, alkol ile kaldırılabilir. Silikon elektrodes bakım: küçük boyutları nedeniyle, silikon sondalar hassas ve önemli bir bakım ile kullanırken bile kırılma son derece duyarlı. Böylece, bizim gibi her zaman, potansiyel tehlikelerin izlenmesi önerilir: (i) uygun bir şekilde belirlenmiş kutusunda probları tutun, (ii) çökmesini engelleyin ya da işlerken probları bırakarak, (iii) stereotaksik manipülatörler de sabit olduğundan emin olun. herhangi bir kazaları önlemek için; kayıt, (iv) çevre doku ve / veya kan probları ekleyebilirsiniz. Bu nedenle, kaydettikten sonra probları çıkarırken dikkatli olmak önemlidir. PBS veya tuzlu solüsyon sabit bir akış kullanarak şiddetle tavsiye edilir; (v) Her zaman kaydettikten sonra probları temiz. Problar temizlemek için, güçlü bir sıvı, bir kaç dakika için enzimatik temizleyici (Boston, Bausch & Lomb) batığın onları tavsiye edilir. Probları her zaman saf su ile yıkayın ve kendi adanmış kutusuna geri dönmek. Bizim tecrübelerimize göre, silikon sondalar yeterli bakım sağlar10'dan fazla deneyler için iyi kaliteli kayıtlar. Bir kanal kullanım sırasında gürültülü olur 'Eğer, daha sonraki analizler ekarte edilmelidir. Biz kanallar arasında cross-talk az olduğunu buldular, bu nedenle gürültülü bir kanal genelde diğer kanallarda bir sinyal üzerinde çok az etkisi vardır. 2. Cerrahi Herhangi bir cerrahi manipülasyonlar önce göz yüzeyi üzerinde bir göz merhemi sürün. Beyin iltihabı azaltmak için 5 mg / ml subkutan Deksametazon yönetin. Ameliyat boyunca stereotaksik çerçeve hayvan sabitleyin. , Yara kanama ve lokal anestezi için potansiyel riskini azaltmak için kesi yapılmadan önce insizyon yerinde subkutan epinefrin (2-4 mg / kg% 0.5 çözümü için seyreltilmiş) Lidokain HCl% 2 Yönetici. Kafa derisinin orta hat üzerinden 2 cm'lik bir kesi yapmak ve kafatası yüzeyi maruz yanal cilt yerinden. Fasya künt diseksiyon ve kontrolü ile dorsal kafa derisi temizleyinmicrocautery veya kemik balmumu kullanarak kanama. Oksipital kemik, hayvan topraklama ve başvuru için kafatası küçük vida takmak için iki delik olun. Referans vida dura ile temas halinde olmalıdır. Kayıtları sırasında elektriksel gürültü azaltmak için, her zaman ıslak vidaları tutmak için tavsiye edilir. Bunu yapmak için, vidaları çevreleyen küçük bir akrilik bariyer inşa edilmesi ya da vida agar ile kaplı olabilir. 1-2 mm çapında kraniotomi ilgi 5 kortikal ve / veya subkortikal alan (lar) karşılık gelen koordinatlar olun. (Delik delme) kraniotomi sırasında gerekli olarak kemik tozu temizlemek için basınçlı hava kullanın. Kafatası PBS damla uygulayarak delme ısınmak önleyin. Ikinci sonda eklemek için gerekirse ikinci bir kraniotomi olun. Bu videoda, bu nedenle iki cerrahinin yapılan, iki kortikal alanlar aynı anda bir kayıt sunuyoruz. Diş Lang: akrilik reçine küçük bir bariyer (örneğin oluşturunİmalat, Co, Inc, Wheeting, IL), kurumasını engelleyen maruz dura üstüne PBS tutmak amacıyla iki cerrahinin çevreleyen. Tüm deney sırasında sürekli PBS uygulayın. Her iki cerrahinin dura madde açın. İki iğneler (30 ½ ölçer) ipuçları (kanca oluşturan) bükülmüş, bu manipülasyonu için kullanılıyor olabilir. Stereotaksik manipulatiors silikon sondalar konnektörü takın. Konnektörler stereotaksik manipülatör mükemmel paralel probları Shanks sahip olmak için bir direğe bağlı. Bu istikrarlı kayıtları korumak ve prob zarar görmesini önlemek için çok önemlidir. Referans vida, silikon prob referans pin bağlayın. Ii) şasi kayıt cihazı zemin; ve iii) stereotaksik frame i) prob fişi zemin toprak vidası bağlı olmak zorunda elektriksel gürültü azaltmak için. Silikon sondalar sadece pia ile temas ucu yerleştirin. Yavaş yavaş inci tanıtmake silikon sondalar ve silikon sondalar (Şekil 1 ve 2) Shanks direnci veya bükmeden beynin içine eklenebilir emin olun. İstediğiniz kayıt alanı ulaşana kadar dikkatlice probları düşüktür. Gerekirse, doku kurumasını önlemek için cerrahinin en üst PBS damla damlatılır. Üretan anestezi sadece terminal prosedürleri için kullanılması gerektiğini, çünkü hayvan, en azından sodyum 200mg/kg bir ip enjeksiyonu ile ötenazi pentobarbital en fazla 60 mg / ml 'lik bir konsantrasyon ile seyreltilir. Bu hayvan dekapitasyon tarafından takip edilmektedir. 3. Temsilcisi Sonuçlar: Şekil 3A yerel alan potansiyelleri ve spike aktivitesi Temsilcisi kayıtları gösterilmiştir. Başak sıralama (Şekil 3B, C; farklı nöronların kaynaklanan ayrımcı ani 6, 7, 8) gerçekleştirdikten sonra silikon prob kayıtları, yer nöronal nüfus faaliyetlerini araştırmak olanağı sağlardiğer ong, aşağıdaki işlemleri: 9 verme bellek ve karar, plastisite 10, uyaran kodlama 11, spontan aktivite 12 ve 13 çeşitli ilaçların etkileri. Şekil 1. Tek bir sap ile silikon prob A. Örnek yeniden inşa nöronların (S. Sakata 14 nezaket) bir montaj üst üste 8 Shanks her tetrode yapılandırma ile bir prob B. Örnek bir C şematik Sıçan kafatası. Yeşil kutuları sağ ve sol somatosensoriyel korteks üzerinde kraniotomi ölçüde temsil eder. Şekil 2, prefrontal korteks ve hipokampus takılı silikon sondalar deney örneği . PBS Damlalar maruz br korumak için kraniotomi kapağıkurumasını değil. Beyincik üzerinde bulunan iki vidayı sırasıyla, zemin ve referans bağlı olacaktır. Şekil 3. A. Resmi bir tetrode (negatif gerilim koordine çizilen notu) Yerel Alan Potansiyeli (LFP) bir temsilcisi elektrofizyolojik kayıt 500ms gösterir. Ekle gösterir. Başak B. bir dalga İki boyutlu 1 tetrode özelliği uzayda birim kümeleri kez. Her küme, tek bir birim (nöron) ani zaman içinde tek bir tetrode dört kayıt sitelerin her birinde C. temsilcisi birimlerinden ortalama başak dalga şekilleri (renk kodlu). D. Dalgaformu enerji (genlik ile ilgili) kaydedilen ani temsil eder . . Her birim için nispeten sabit enerji değerleri unutmayın; görüntülenen dönemi süresi boyunca istikrarlı bir kayıt gösterir.