1. Chirurgie Vorbereitung Anesthetize der Ratte mit der entsprechenden Art und Dosis des Anästhesie. Hier verwenden wir Urethan (1,5 g / kg, Sigma-Aldrich Co., St. Luis, MO) – hergestellt, wie 20% ige Lösung durch Verdünnen von 20 g Urethan in 100 ml Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (PBS), dh das Tier erhalten 7,5 ml / kg Urethan-Lösung intraperitoneal (IP). Aufgrund der Dosis-Wirkungs-Kurve wird die Gesamtdosis von Urethan in bis vier Anwendungen, die jeweils von etwa 30 Minuten voneinander getrennt sind. Bevor die ersten zwei Anträge von Urethan-, ist Tier mit einer Konzentration von 3-4% (Sauerstoff bei 2 Litern pro Minute) Isofluran verabreicht und bei 2% (Sauerstoff bei bis zu 2 Liter pro Minute) narkotisiert, ein Tier zu verhindern, immer durch Injektion betont. Während der Operation kann eine zusätzliche Gabe von Isofluoran (2% Konzentration für 2 Minuten) bei Bedarf verwendet werden. Shave das Fell entlang der Inzisionsstelle (Rückenseite des Kopfes), um sicherzustellen, dassdas Fell wird nicht verunreinigen die Wunde, und dass eine ausreichende Fläche können rund um die Inzisionsstelle desinfiziert werden. Bereiten Operationsstelle antiseptisch mit organischen Jod oder Chlorhexidin Seife und Antiseptika (Ethanol). Bereiten Silizium-Sonden (NeuroNexus Technologies, Ann Arbor, MI). Probes können desinfiziert mit 70% igem Ethanol durch Spülen mit destilliertem Wasser folgen. Bei Bedarf können Sonden mit einem fluoreszierenden Marker antiseptisch (z. B. Dye I, Invitrogen Co.) vorbereitet, um später zeigen die Position der Sonde in die histologische Analyse lackiert werden. Dazu verwenden wir einen kleinen und sehr weichen Pinsel und zart berühren die Rückseite des Silizium-Sonde mit dem Farbstoff. Dieses Verfahren ist stets auf ein Mikroskop, um sicherzustellen, dass die Sonde nicht beschädigt oder verbogen durchgeführt werden. Immer überprüfen, um sicherzustellen, dass der Farbstoff nicht blockiert einen der Kanäle. Ein verbleibender Farbstoff auf die Sonde links kann später mit Alkohol entfernt werden, gefolgt von Spülen mit Wasser. Silicon electrodes Pflege: Aufgrund ihrer geringen Größe sind Silizium-Sonden zart und extrem anfällig zu brechen, auch wenn Sie ihn mit großer Sorgfalt. Wir empfehlen daher, die Überwachung potenzieller Gefahren zu allen Zeiten, wie zum Beispiel: (i) Halten Sie die Sonden in einem entsprechend benannten Feld, (ii) verhindern Abstürzen oder Fallenlassen Sonden beim Umgang mit ihnen; (iii) Stellen Sie sicher, dass die stereotaktische Manipulatoren fest sind um Unfälle zu vermeiden, (iv) Bei der Aufnahme, das umliegende Gewebe und / oder Blut können die Sonden zu befestigen. Deshalb ist es wichtig, dass man auch vorsichtig, wenn Sie die Sonden nach der Aufnahme. Mit einem konstanten Fluss von PBS oder Kochsalzlösung wird dringend empfohlen, (v) Reinigen Sie die Sonden nach der Aufnahme. Zum Reinigen der Sonden ist es dringend zu versinken sie in einer Flüssigkeit enzymatischer Reiniger (Boston, Bausch & Lomb) für ein paar Minuten empfohlen. Spülen Sie die Sonden mit destilliertem Wasser und bringt sie zu ihren engagierten Box. Nach unserer Erfahrung sorgt für eine ausreichende Versorgung der Silizium-Sondenguter Qualität Aufnahmen für mehr als 10 Experimente. Wenn ein Kanal 'wird laut' während des Gebrauchs, sollte es von nachfolgenden Analysen ausgeschlossen werden. Wir haben festgestellt, dass cross-talk zwischen den Kanälen ist minimal, daher eine laute Kanal hat in der Regel nur sehr wenig Einfluss auf ein Signal in andere Kanäle. 2. Chirurgie Tragen Sie eine Augen-Salbe auf Augenoberfläche vor jeder Operation Manipulationen. Verwalten Dexamethason 5 mg / ml subkutan Entzündung des Gehirns reduzieren. Fix das Tier in stereotaktischen Rahmen während der Operation. Verwalten Lidocain HCl 2% mit Adrenalin (2-4 mg / kg bis 0,5% igen Lösung verdünnt) subkutan in die Inzisionsstelle vor dem Schnitt gemacht, um das potenzielle Risiko der Wunde blutet und zur Lokalanästhesie zu reduzieren. Machen Sie ein 2 cm langer Schnitt durch die Kopfhaut Mittellinie und verdrängen die Haut seitlich am Schädel Oberfläche freizulegen. Deaktivieren Sie das dorsale Kopfhaut von der Faszie durch stumpfe Präparation und Kontrolledie Blutung durch microcautery oder mit Knochen Wachs. Machen Sie zwei Löcher bohren, um kleine Schrauben in dem Hinterhauptbein des Schädels für die tierische Grundlage und Referenz zu befestigen. Die Referenz Schraube muss in Kontakt mit dura werden. Um elektrische Störungen während der Aufnahmen zu reduzieren, empfiehlt es sich, die Schrauben stets feucht zu halten. Um dies zu tun, kann eine kleine Acryl-Barriere rund um die Schrauben gebaut werden, oder die Schrauben können mit Agar abgedeckt werden. Machen Sie eine 1-2 mm Durchmesser Kraniotomie in den Koordinaten entsprechend der kortikalen und / oder subkortikale (e) von Interesse 5. Mit Druckluft Knochen Staub zu entfernen, da während der Kraniotomie (Bohrloch) benötigt. Prevent Schädel aus aufwärmen, Bohren, indem Tropfen PBS. Machen Sie eine zweite Kraniotomie, wenn nötig, um die zweite Sonde einzusetzen. In diesem Video stellen wir eine Aufnahme von zwei kortikalen Arealen gleichzeitig, also zwei Kraniotomien gemacht werden. Bauen Sie ein kleines Hindernis aus Acrylharz (zB: Lang DentalManufacturing, Co., Inc., Wheeting, IL) um die beiden Kraniotomien um PBS oben auf freigelegte Dura zu halten, verhindern, dass es vor dem Austrocknen. Übernehmen PBS ständig während des gesamten Experiments. Öffnen Sie die Dura Materie beider Kraniotomien. Zwei Nadeln (30 ½ gauge) gebogen an den Spitzen (Bildung eines Hakens), kann für diese Manipulation verwendet werden. Schließen Sie den Stecker des Silizium-Sonden zur stereotaktischen manipulatiors. Die Anschlüsse sind an einer Stange befestigt, um die Schäfte der Sonden völlig parallel zur stereotaktischen Manipulators haben. Dies ist entscheidend für stabile Aufnahmen zu erhalten und zu vermeiden Sonde beschädigen. Schließen Sie das Referenz-Schraube, um die Silizium-Sonde Bezugsstifts. ; Ii) das Gehäuse von dem Aufnahmegerät, und iii) die stereotaktischen Rahmen i) den Boden der Sonde Stecker: Zur elektrischen Rauschen der Erde Schrauben müssen verbunden werden zu reduzieren. Setzen Sie die Spitze des Silizium-Sonden nur in Kontakt mit der Pia. Langsam einführen the Silizium-Sonden und stellen Sie sicher, dass die Schenkel der Silizium-Sonden (Abb. 1 & 2) in das Gehirn kann ohne Widerstand oder Verbiegen eingeführt werden. Sie vorsichtig die Sonden bis zum Erreichen gewünschten Aufnahmebereich. Wenn nötig, fügen Tropfen PBS auf der Oberseite des Kraniotomien zu vermeiden Trocknung des Gewebes. Da Urethannarkose sollte nur für Terminal-Verfahren verwendet werden, wird das Tier mit einem ip-Injektion von mindestens 200mg/kg von Natrium-Pentobarbital eingeschläfert verdünnt auf eine Konzentration von nicht mehr als 60 mg / ml. Dies ist durch Enthauptung des Tieres verfolgt. 3. Repräsentative Ergebnisse: Vertreter Aufnahmen von lokalen Bereich Potenziale und Spike-Aktivität sind in Abbildung 3A dargestellt. Nach der Durchführung spike sorting (diskriminierende Spitzen aus verschiedenen Neuronen, Abb. 3b, c, 6, 7, 8) Silizium-Sonde Aufnahmen bieten die Möglichkeit, neuronale Aktivität Bevölkerung beteiligt zu untersuchen, among anderen, die folgenden Prozesse: Gedächtnis und Entscheidungsfindung 9, Plastizität 10, Stimulus-Codierung 11, spontane Aktivität 12 und Wirkungen der verschiedenen Drogen 13. Abbildung 1. A. Beispiel eines Silizium-Sonde mit einem Schaft ist eine Montage aus rekonstruierten Neuronen (mit freundlicher Genehmigung von S. Sakata 14) überlagert. B. Beispiel einer Sonde mit einer Tetrode Konfiguration an jedem der 8 Schäfte. C. Schematische Darstellung eines Ratte Schädel. Die grünen Felder stellen das Ausmaß der Kraniotomie über den rechten und linken somatosensorischen Kortex. Abbildung 2. Beispiel für Experiment mit Silizium-Sonden in den präfrontalen Kortex und Hippocampus eingefügt. Drops of PBS decken die Kraniotomie der exponierten br schützenain vor dem Austrocknen. Zwei Schrauben über das Kleinhirn entfernt werden, um Grund-und Referenz angeschlossen werden, bzw.. Abbildung 3. A. Bild zeigt 500ms einer repräsentativen elektrophysiologische Ableitung von Local Feldpotential (LFP) von einem Tetrode (Anmerkung: negative Spannung wird auf der Ordinate). Legen Sie zeigt – eine Wellenform eines Spikes B. zwei-dimensionale Ansichten der Einheit Cluster im Merkmalsraum von 1 Tetrode.. Jedes Cluster stellt Spikes aus einer einzigen Einheit (Neuron). C. Durchschnittliche spike Wellenformen aus repräsentativen Einheiten (farbcodiert) an jedem der vier Aufnahmen Sites von einem einzigen Tetrode. D. Waveform Energie (bezogen auf Amplitude) der aufgezeichneten Spitzen im Laufe der Zeit . Beachten Sie die relativ konstante Energie-Werte für jede Einheit, dies deutet auf eine stabile Aufzeichnung über die Dauer des angezeigten Zeitraums.