概要

운동 유발성 Apoptosis 림프구의 결정을위한 손가락 - 스틱 혈액 샘플링 방법론

Published: February 24, 2011
doi:

概要

운동은 면역 세포의 apoptosis를 유도 할 수있다. 다양한 측정 한계는 특히 사전 심사에 혈액 샘플을 분리하고 치료하는 데 필요한 시간의 양을 관련된있다. 보여주는 운동 유발성 림프구의 apoptosis의 분석을위한 신속하고 법으로서 절차입니다.

Abstract

운동은 면역 세포의 apoptosis를 유도하는 수있는 생리적 자극이다. 지금까지 다양한 제한은 특히 이전에 세포 죽음의 평가에 혈액 샘플을 분리하고 치료하는 데 필요한 시간의 양을에 관한,이 현상의 측정과 확인되었습니다. 이 때문에 면역 세포 apoptosis에보고 증가가 시스템에 대한 운동의 실질적인 효과에 기여하거나, 결국이 측정을 얻기 위해 필요한 시간과 처리를 반영 아르 될 수 있는지 여부를 확인하기가 어렵습니다. 이 문서에서 우리는 운동 유발성 apoptosis 림프구의 분석을위한 신속하고 법으로서 절차를 보여줍니다. 다른 기법과는 달리, 전체 혈액 샘플을 취득 즉시 항체 패널에 추가됩니다. 잠복기에 따라, 적혈구는 lysed 및 샘플 분석 준비입니다. 손가락 – 스틱 샘플링 절차의 사용은 필요한 혈액의 볼륨을 감소하고, 주제에 대한 불편을 최소화합니다.

Protocol

1. 손가락 – 스틱 혈액 샘플링 전체 혈액의 컬렉션은 일반적으로의 정지 다음 (일반적으로 1~3시간에서 동안 기준 측정 (보통 10-15 분 앉아 휴식을 다음) 또는 즉시 운동 시합에 따라, 그리고 사후 운동 기간 동안 휴식을 취해 운동). 유니버설주의를 사용하면, 먼저 70% 이소 프로필 알코올로 손가락을 소독. 다음 찔린 자동 첨두 또는 유사한 장치를 사용하여 사이트입니다. 우리…

Discussion

법으로서 샘플 수집 과정 및 후속 분석 운동 유발성 apoptosis 림프구의 조기 늦게 두 단계의 분석에 대한 증명입니다. 그것은 명확하게 괴사 및 apoptotic되지 않은 그 세포를 제외하는 것도 가능합니다. 이 절차 동안, 이전에 여러 시간 지점에서 antecubital 지역에서 침략 venipuncture와 관련된 단점과 불편을 극복하고, 즉시 운동 후 또는 운동 시합 기간 동안 카테터를 확보. 조사의 측면에서, 이러한 절차?…

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 연구는 웨스턴 켄터키 대학에서 학부 장학금위원회에서 새로운 교수 부여에 의해 지원되었다.

Materials

Material Name タイプ Company Catalogue Number Comment
Flow Cytometry Binding Buffer   eBioscience 00-4222-26  
RBC Lysis Buffer   eBioscience 00-4333-57  
Lancet Device Accu Check Soft Touch Roche Diagnostics Corp.    
Capillary tubes Heparinized Capillary Tubes Chase Scientific Glass, Inc. 501  
Centrifuge GmC Lab Gilson PMS-880  
Annexin V-FITC Conjugated   Biovision Inc. K201-400-1  
CD4-PE Conjugated Anti-human, clone RPA-T4 eBioscience 12-0049-42  
CD8-PE Conjugated Anti-human, clone OKT8 eBioscience 12-0086-73  
CD19-PE Conjugated Anti-human, clone HIB19 eBioscience 12-0199-42  
7-AAD Viability Staining Solution   eBioscience 00-6993-50  
CD45RA-APC Conjugated Anti-human, clone HI100 eBioscience 17-0458-42  
Flow cytometer C6 Accuri    

参考文献

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記事を引用
Navalta, J., McFarlin, B., Simpson, R., Fedor, E., Kell, H., Lyons, S., Arnett, S., Schafer, M. Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis. J. Vis. Exp. (48), e2595, doi:10.3791/2595 (2011).

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