概要

Finger-stick Metodologia di campionamento del sangue per la determinazione di esercizio apoptosi indotta da linfociti

Published: February 24, 2011
doi:

概要

L'esercizio fisico è in grado di indurre l'apoptosi nelle cellule del sistema immunitario. Ci sono limitazioni concernenti le misure varie, in particolare relativi alla quantità di tempo necessaria per isolare e trattare un campione di sangue prima della valutazione. È dimostrata una procedura rapida e mini-invasiva per l'analisi di esercizio apoptosi indotta da linfociti.

Abstract

L'esercizio fisico è uno stimolo fisiologico in grado di indurre l'apoptosi nelle cellule del sistema immunitario. Ad oggi, diverse limitazioni sono state identificate con la misura di questo fenomeno, in particolare relativi alla quantità di tempo necessaria per isolare e trattare un campione di sangue prima della valutazione della morte cellulare. A causa di questo, è difficile stabilire se un aumento segnalato in apoptosi delle cellule immunitarie possono essere contribuito l'effetto reale di esercizio del sistema, o un riflesso del tempo e di elaborazione necessaria per ottenere alla fine questa misura. In questo articolo si dimostra una procedura rapida e mini-invasiva per l'analisi di esercizio apoptosi indotta da linfociti. A differenza di altre tecniche, il sangue intero viene aggiunto a un pannello di anticorpi immediatamente dopo l'ottenimento di un campione. Dopo il periodo di incubazione, i globuli rossi vengono lisati ed i campioni sono pronti per essere analizzati. L'uso di un dito-stick procedura di campionamento riduce il volume di sangue richiesto, e riduce al minimo il disagio ai soggetti.

Protocol

1. Finger-Stick prelievo di sangue Raccolta di sangue intero è di solito presi a riposo per una misura di base (di solito dopo 10-15 resto seduto min), durante o immediatamente dopo un attacco di esercizio, e per tutto il periodo post-esercizio (in genere da 1-3 ore dopo la cessazione del esercizio fisico). Utilizzando le precauzioni universali, in primo luogo sterilizzare la punta del dito con il 70% di alcool isopropilico. Successivamente, la puntura il sito utilizzando un bisturi autom…

Discussion

Un mini-invasiva procedura di raccolta dei campioni e successiva analisi è dimostrato per l'analisi delle fasi sia precoce e tardiva di esercizio apoptosi indotta da linfociti. E 'anche possibile escludere con chiarezza quelle cellule, che sono necrotico, e non apoptotica. Questa procedura risolve gli inconvenienti ed il disagio associato a venipuntura invasiva della regione antecubitale in momenti diversi, prima, durante e immediatamente dopo l'esercizio o attribuisce un catetere per tutta la durata della …

開示

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questa ricerca è stata sostenuta da una sovvenzione Facoltà Nuovo dal Consiglio di Facoltà borsa di studio alla Western Kentucky University.

Materials

Material Name タイプ Company Catalogue Number Comment
Flow Cytometry Binding Buffer   eBioscience 00-4222-26  
RBC Lysis Buffer   eBioscience 00-4333-57  
Lancet Device Accu Check Soft Touch Roche Diagnostics Corp.    
Capillary tubes Heparinized Capillary Tubes Chase Scientific Glass, Inc. 501  
Centrifuge GmC Lab Gilson PMS-880  
Annexin V-FITC Conjugated   Biovision Inc. K201-400-1  
CD4-PE Conjugated Anti-human, clone RPA-T4 eBioscience 12-0049-42  
CD8-PE Conjugated Anti-human, clone OKT8 eBioscience 12-0086-73  
CD19-PE Conjugated Anti-human, clone HIB19 eBioscience 12-0199-42  
7-AAD Viability Staining Solution   eBioscience 00-6993-50  
CD45RA-APC Conjugated Anti-human, clone HI100 eBioscience 17-0458-42  
Flow cytometer C6 Accuri    

参考文献

  1. Simpson, R. J., Florida-James, G. D., Whyte, G. P., Black, J. R., Ross, J. A., Guy, K. Apoptosis does not contribute to the blood lymphocytopenia observed after intensive and downhill treadmill running in humans. Res. Sports Med. 15, 157-174 (2007).
  2. Steensberg, A., Morrow, J., Toft, A. D., Bruunsgaard, H., Pedersen, B. K. Prolonged exercise, lymphocyte apoptosis and F2-isoprostanes. Eur. J. Appl. Physiol. 87, 38-42 (2002).
  3. Mooren, F. C., Bloming, D., Lechtermann, A., Lerch, M. M., Völker, K. Lymphocyte apoptosis after exhaustive and moderate exercise. J. Appl. Physiol. 93, 147-153 (2002).
  4. Peters, E. M., Eden, M. V. a. n., Tyler, N., Ramautar, A., Chutergoon, A. A. Prolonged exercise does not cause lymphocyte DNA damage or increased apoptosis in well-trained endurance athletes. Eur. J. Appl. Physiol. 98, 124-131 (2006).
  5. Wang, J. -. S., Huang, Y. -. H. Effects of exercise intensity on lymphocyte apoptosis induced by oxidative stress in men. Eur. J. Appl. Physiol. 95, 290-291 (2005).
  6. Mooren, F. C., Lechtermann, A., Völker, K. Exercise-induced apoptosis of lymphocytes depends on training status. Med. Sci. Sports Exerc. 36, 1476-1483 (2004).
  7. Navalta, J. W., Sedlock, D. A., Park, K. -. S. Blood treatment influences the yield of apoptotic lymphocytes after maximal exercise. Med. Sci. Sports Exerc. 37, 369-373 (2005).

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記事を引用
Navalta, J., McFarlin, B., Simpson, R., Fedor, E., Kell, H., Lyons, S., Arnett, S., Schafer, M. Finger-stick Blood Sampling Methodology for the Determination of Exercise-induced Lymphocyte Apoptosis. J. Vis. Exp. (48), e2595, doi:10.3791/2595 (2011).

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