거대한 섬유 시스템은 성인의 간단한 회로의 연결입니다<em> Drosophila melanogaster</em> 파리에서 가장 큰 신경을 포함하는. 우리는 거대한 섬유 interneurons의 직접적인 자극을 다음과 지느러미 길이 (DLM)와 tergotrochanteral (TTM) 근육에 게시 신경 잠재력을 기록하여이 경로를 통해 시냅스 전송을 감시하기위한 프로토콜을 설명합니다.
성인 놀라게하는 경우 D. melanogaster은 공중으로 점프하고 멀리 비행 반응. D. 등 많은 무척추 동물에서 성인 단계에서 melanogaster, "탈출"(또는 "놀라게") 응답은 여러 구성 요소의 연결 회로 거대한 섬유 시스템 (GFS)라고하여 중재합니다. 뉴런, 그들 특유의 형태학 및 간단한 연결의 비교 대형 크기는 GFS의 연결 회로를 공부에 대한 매력적인 모델 시스템을 확인합니다. GFS의 경로는 그의 axons 자궁 결합을 통해 흉부 신경절에 정중선을 따라 머리에서 내려와이 양자 대칭 장 섬유 (GF) interneurons 구성되어 있습니다. 복부 신경 tergotrochanteral 근육 드라이브 ipsilateral motorneuron 1) 큰 중간 dendrite (TTMn) (TTM), mesothoracic 대퇴골 / 다리의 주요 신근와 GFS 양식 전기 화학 시냅스의 mesothoracic neuromere (T2)에서 하고, 2) contralateral peripherally synapsing interneuron (PSI) 어느 방향 양식에있는 등 지느러미 근육 길이 (DLMs)의 motorneurons (DLMns), 날개 depressors과 화학 (cholinergic) 시냅스. 그들은 날개에 직접 연결된 것이 아니라 이동하지 않습니다 – dorsovental 근육 (DVMs)으로의 연결 통로 (S), 날개 엘리베이터 아직 (DLMs와 DVMs가 간접 비행 근육으로 공동으로 알려져 있습니다 풀려되지 않았습니다 간접적으로 왜곡된 인근 흉부 표피에 의해 날개) (왕의 와이먼, 1980;. 앨런 외, 2006). DLMs의 디 – 시냅스 활성 (PSI를 통해)는 TTMs 먼저 대퇴골을 연장하여 추진 수 TTM의 monosynaptic 활성화 (~ 0.5 MS)에 상대 이러한 근육의 수축의 타이밍에 작지만 중요한 지연을 초래 지상에서 비행. 동시에 차례로 서로 비행 기간 동안 DVMs을 신장 활성화 DLMs을 스트레칭 활성화 TTMs. GF 경로는 감각 (예 : "공기 퐁퐁"또는 "라이트 – 오프") 자극을 적용하여 중 간접적으로 활성화하거나 직접 두뇌 (여기서 설명)에 위에 – 임계값 전기 자극에 의해 수 있습니다. TTMns 및 DLMns 다른, 밝혀지지 않은, 감각 입력을하더라도 두 경우 모두에서, 행동의 가능성은 전적으로 GFS, PSIs 및 TTM / DLM motoneurons 통해 TTMs 및 DLMs 도달합니다. "지연 반응"(자극과 근육의 탈분극 사이의 시간)과 측정 (고주파 자극의 특정 숫자로 성공적인 응답의 숫자) "고주파 자극에 다음과 같은 것은"reproducibly 및 양적 기능 상태를 평가하는 방법을 제공한다 모두 중앙 시냅스 (GF – TTMn, GF – PSI, PSI – DLMn) 및 화학 (glutamatergic) 신경근육학 분기점 (TTMn – TTM 및 DLMn – DLM)을 포함하여 GFS 구성 요소의. 이것은 중앙 버렸네 형성에 관련된 유전자를 식별하고 CNS 기능을 평가하기 위해 사용되고 있습니다.
하나는 고품질의 녹음을 얻을하려고 할 때주의를 지불했다 가장 중요한 것들 중 하나는 준비의 적절한 오리 엔테이션과 건강입니다. 이상적으로, 파리는 여전히 전기 자극에 반응하는 레코딩 세션의 끝에 살아하고해야합니다. 에 기록 전극이 가장 효율적으로 흉부 외골격을 뚫고위한 전극과 직각을 이루는 등, 즉시 그러한 방식으로 표면에 붙어 있어야, 필요한 경우, 전극의 삽입은의 일부를 제거하여 용이 될 수있다 메스 텅스텐과 지느러미 흉부 표피 따라서 DLM 비행 근육 (이 단계는 어렵게 유리 전극의 도움말을 휴식하는 만들기의 추가 혜택을 제공합니다) 노출. 또한, 치료가 subcuticularly 위치 DLMs 및 TTMs을 통해 전극을 밀어 피하기 위해 이동해야합니다. 파리의 머리는 잘 제대로 두뇌에 삽입되도록 자극 전극 수 있도록하고이 레코딩 세션 동안 꺼내되는 것을 방지하기 위해 보안해야합니다.
의 크기와 잘 설명하는 형태로 인해 GFS는 Drosophila에서 가장 접근의 연결 경로 중 하나를 나타냅니다. 작은 분자량의 추적 염료로 전기 시냅스의 투자율은 전기 결합 뉴런의 시각화를위한 수 있으며, 여러 가능한 GAL4 라인은 가능한 셀 또는 셀 그룹 (제이콥스 외, 2000의 일부에서 유전자 발현 수준을 조작하게;. 앨런 외., 2006) Drosophila GFS의 연결을 소성을 공부에 편리한 모델 시스템 (엥겔 및 우 만들기 위에서 언급한 장점, 그러한 요법 이니, 자발적인 복구 및 dishabituation로 회로 디스플레이 등록 정보의 모두 수입 성의와 흉부 구성 요소 이외에도, 1996).
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 LP로 웰컴 트러스트 부여에 의해 지원되었다
NAME | COMPANY | CAT. # | COMMENTS |
S48 Square Pulse Stimulator | Grass Instruments | http://www.grasstechnologies.com/ | |
Stimulation unit | Grass Instruments | http://www.grasstechnologies.com/ | |
SIU5 RF Transformer Isolation Unit | Grass Instruments | http://www.grasstechnologies.com/ | |
5A two-channel intracellular Microelectrode Amplifier | Getting Instruments | http://www.gettinginstruments.com/ | |
Digidata 1440A data acquisition system | Molecular Devices | http://www.moleculardevices.com/ | |
Analogue-digital Digidata 1320 and Axoscope 9.0 software | Molecular Devices | http://www.moleculardevices.com/ | |
Recording platform with manual micromanipulators | Narishige, Sutter Ins., World Precision Ins. | http://narishige-group.com/ http://www.sutter.com/index.html http://www.wpi-europe.com/en/ |
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Light source | Fostec | http://www.nuhsbaum.com/FOSTEC.htm | |
Wild M5 stereomicroscope | Wild Heerbrugg | http://www.wild-heerbrugg.com/ | |
Vibration isolation table | TMC | http://www.techmfg.com/ | |
Borosilicate tubing for microelectrodes | Sutter Instrument | http://www.sutter.com/index.html | |
P-95 Micropipette puller | Sutter Instrument | http://www.sutter.com/index.html | |
Microfil 34 gauge, 67 mm (electrode filler) | World Precision Instruments | MF34G-5 | http://www.wpi-europe.com/en/ |
Microdissection tools (forceps,…) | Fine Science Tools | www.finescience.com | |
Dissecting (stereo) microscope | Leica | http://www.leica-microsystems.com/ | |
Faraday cage | Unknown manufacturer |
Other: plastic syringes, tungsten earth wire and NaOH-sharpened tungsten electrodes, KCl, wax platform, a PC with monitor…